中醫(yī)藥防治腦梗死血瘀證學術思想研究概述
——湖南中醫(yī)藥大學葛金文教授團隊介紹

湖南中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合學科創(chuàng)建于上世紀80年代初，依托國家中醫(yī)藥管理局重點學科、湖南省重點學科、湖南省重點實驗室、湖南省自然科學創(chuàng)新團隊，開展了腦梗死的中西醫(yī)結(jié)合基礎和臨床研究，以葛金文教授為首的研究團隊系統(tǒng)闡述了腦梗死血瘀證的病因病機，科學解釋了腦梗死的現(xiàn)代病理實質(zhì)，并以中醫(yī)治法開展實證研究，在臨床上推廣應用。

一、學術研究概況

腦梗死是嚴重威脅當今人類生命健康的常發(fā)病、多發(fā)病，其致死率、致殘率均居于世界前列。中醫(yī)認為該病屬“中風”范疇，以本虛標實為主，“風、火、痰、瘀”諸邪交織不解，瘀血阻絡是腦梗死的基本病機，活血化瘀是其基本治療法則。研究團隊在中醫(yī)藥理論指導下，系統(tǒng)開展腦梗死血瘀證的病因病機研究，尋求腦梗死現(xiàn)代病理實質(zhì)的科學解釋，并以中醫(yī)治法開展實證研究。研究成果對深入理解腦梗死血瘀證的科學內(nèi)涵和中醫(yī)藥臨床應用具有重要科學意義。

（一）研究思路

1.探索腦梗死的關鍵病因病機。根據(jù)中醫(yī)理論和臨床實踐，項目組提出元氣是人體機能活動根本，血液的運行有賴氣的和煦和推動。虛妄勞作是損害傷氣的根本因素，氣虛無力推動血液運行，血流不暢，瘀滯腦脈，故氣虛是腦梗死血瘀證形成的核心病機；貫穿腦梗死發(fā)生發(fā)展的全過程；中氣虧虛，運化失常，水濕停聚，化而為痰，痰瘀互結(jié)，淤阻腦絡，故痰凝血瘀是腦梗死發(fā)展的重要環(huán)節(jié)；痰瘀諸邪日久，化熱化火，痰瘀火熱，蘊積不除，毒邪乃生，損傷腦髓，發(fā)為中風。

2.闡明腦梗死血瘀證的現(xiàn)代生物學基礎。從血管內(nèi)皮細胞（VEC）損傷、血管內(nèi)膜增生和動脈粥樣硬化（AS）、血栓形成以及腦神經(jīng)細胞損傷四個維度系統(tǒng)研究腦梗死血瘀證的生物學基礎。提出VEC是腦梗死血瘀證的關鍵病理部位；血管內(nèi)膜增生、AS是腦梗死血瘀證的病理基礎；血栓形成是腦梗死血瘀證的病理前提；神經(jīng)細胞損傷是腦梗死血瘀證的病理核心。

圖1 腦梗死血瘀證研究思路

3.系統(tǒng)開展腦梗死血瘀證中醫(yī)藥防治的實證研究和臨床應用。采用益氣活血化瘀、祛痰活血化瘀、解毒活血化瘀的代表方補陽還五湯、腦泰方和滋陰解毒祛瘀方防治腦梗死的臨床和基礎研究，從方證對應的角度闡述了腦梗死氣虛血瘀、痰凝血瘀和瘀毒互結(jié)的病理生理實質(zhì)。

（二）研究方向及研究方法

1.研究方法創(chuàng)新

（1）率先提出并建立了一種新的研究中藥藥效（藥理）的半體內(nèi)實驗研究方法——中藥血漿藥理學方法（Medicinal Herb Research:Serum Pharmacological Method and Plasma Pharmacological Method.Biol Pharm Bull.2010,33(9):1459-1465）。

（2）率先建立了基于血管內(nèi)皮損傷的腦梗死大鼠模型，并用于相關實驗研究（A New Rat Model of Cerebral Infarction Based on the Injury of Vascular Endothelial Cell.Chin J Integr Med.2005,11(30:195-200）。

（3）建立基于雙氧水損傷血管內(nèi)膜的頸動脈血栓家兔模型（以雙氧水損傷血管內(nèi)膜所致的家兔頸總動脈血栓模型，中國病理生理雜志，1990,6(5):318-319）。

（4）提出了腦梗死細胞鐵轉(zhuǎn)運工作模式并用于鐵超載損傷機制研究（NTE Treatment Results in Increased Fpn Expression in Hippocampus of Rats Subjected to Cerebral Ischemia.Molecular Medicine Reports.2015,11(6):4047-4052）。

（5）運用比較蛋白質(zhì)組學技術尋找中藥方劑治療腦梗死的特征性蛋白質(zhì)，利用生物信息學方法，結(jié)合KEGG網(wǎng)絡數(shù)據(jù)庫，研究腦梗死發(fā)生發(fā)展過程中特征性蛋白之間的相互作用，闡明相關調(diào)控網(wǎng)絡機制。從基因組和蛋白（肽）組學層次研究血瘀證的實質(zhì)。

2.研究內(nèi)容突出“三結(jié)合”

（1）將中醫(yī)學的病因病機和現(xiàn)代病理生理研究相結(jié)合，豐富了中醫(yī)活血化瘀法的理論認識，為中西醫(yī)結(jié)合的理論研究提供了新范式。

圖2 血清藥理學與血漿藥理學比較示意圖

圖3 鐵離子細胞內(nèi)外轉(zhuǎn)運的工作模式

圖4 網(wǎng)絡藥理學方法尋求腦梗死生物標記物

1）系統(tǒng)地從循環(huán)VEC、VEC凋亡、VEC功能分子標記物等研究了腦梗死時VEC損傷與功能改變與氣虛血瘀證的關系。

2）在系統(tǒng)評價腦泰方防治腦梗死臨床療效的基礎上，首次研究了祛痰活血中藥腦泰方對VEC死亡的保護作用及對VEC介導的凝血、纖溶、血管舒縮、血小板功能等的調(diào)節(jié)作用，表明保護和調(diào)節(jié)VEC功能是祛痰活血中藥防治腦梗死的重要途徑。

3）率先在國內(nèi)研究了腦泰方的腦缺血預處理樣作用，發(fā)現(xiàn)祛痰活血中藥腦泰方可以通過誘導內(nèi)源性保護物質(zhì)腺苷和一氧化氮的生成增加，從而發(fā)揮對腦缺血的腦保護作用。

4）以人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV-304為受試對象，以一定濃度的Glu、Ins、ox-LDL誘導體外血管內(nèi)皮細胞損傷，同時觀察滋陰活血解毒中藥對該細胞損傷的保護作用，結(jié)果證明滋陰活血解毒中藥對受損的血管內(nèi)皮細胞有保護作用，其機制可能與提高內(nèi)皮細胞的纖溶功能、抑制與炎癥反應相關的細胞粘附過程有關。

5）采用大鼠主動脈球囊導管損傷后血管內(nèi)膜增生模型，研究了補陽還五湯及主要有效組分抗血管內(nèi)膜增生的作用，并從調(diào)控細胞周期及細胞外基質(zhì)揭示其作用機制。結(jié)果表明：補陽還五湯及其兩類有效組分生物堿和苷能顯著抑制血管內(nèi)膜增生，生物堿和苷可能為該方抑制血管內(nèi)膜過度增生的重要藥效物質(zhì)。其作用機制可能與抑制細胞周期的激活，阻抑VSMC增殖，抑制細胞外基質(zhì)的合成及其促進其降解有關。

6）采用血小板衍生生長因子（PDGF）誘導的VSMC增殖模型和血漿藥理學方法，研究了補陽還五湯有效組分生物堿和苷對VSMC增殖的影響，并從細胞周期相關因子及ERK信號轉(zhuǎn)導途徑研究其抗VSMC增殖的機制。證明了抑制ERK信號途徑的激活，從而抑制了VSMC細胞周期轉(zhuǎn)化和細胞增殖是補陽還五湯及其有效組分抗血管內(nèi)膜增生的主要機制。

（2）將經(jīng)典名方和臨床驗方相結(jié)合，有利于中醫(yī)藥的合理利用，為臨床辨證施治、遣方用藥提供新指導。

1）采用腦缺血動物模型研究了腦泰方和補陽還五湯及其有效組分抗腦缺血的作用，發(fā)現(xiàn)了腦泰方和補陽還五湯及其主要有效組分可減少腦梗死體積，改善腦缺血后神經(jīng)功能障礙，對腦缺血后腦組織具有保護作用。在此基礎上對其抗腦缺血的作用機制進行了系統(tǒng)的研究：①采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，從細胞凋亡研究了補陽還五湯兩類有效組分抗腦缺血后遲發(fā)性神經(jīng)元損傷的機制。結(jié)果證實了有效組分通過抑制缺血后腦組織Caspase-1、3、8的表達，從而對抗腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞凋亡，保護缺血腦組織。②采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，從腦缺血后炎癥反應研究了補陽還五湯及兩類有效組分抗缺血性腦損傷的機制。證明了補陽還五湯及其有效組分生物堿、苷通過抑制IL-1β、IL-1R1、ICAM-1mRNA的表達，從而減少炎癥因子及炎癥介質(zhì)的表達，對缺血腦組織起保護作用。③率先從鐵超載這一腦缺血損傷的新機制研究了祛痰活血法抗腦缺血的作用。首次在國內(nèi)提出鐵超載這一腦缺血損傷的新機制，并用于中醫(yī)藥研究。從腦缺血后腦神經(jīng)元鐵跨膜轉(zhuǎn)運機制及益氣活血法干預著手，完成了腦缺血后不同時間不同腦區(qū)神經(jīng)元細胞內(nèi)鐵分布及TF、TFR、DMT1、FPn1、FLVCR、BCRP等鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的表達研究，證明了PI3K/mTOR及NF-κB/p38MAPK信號途徑對腦缺血后鐵跨膜轉(zhuǎn)運及鐵轉(zhuǎn)運蛋白具有調(diào)節(jié)作用，發(fā)現(xiàn)益氣活血中藥腦泰方通過減少TFR、DMT1的表達，抑制鐵的細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，增加Fpn、FLVCR的表達，促進胞內(nèi)鐵的外排，調(diào)節(jié)鐵代謝，發(fā)揮對腦組織的保護作用。④采用大鼠腦缺血動物模型，證明祛痰活血中藥腦泰方能通過提高HIF-1α表達，激活HIF-1α/VEGF通路，上調(diào)VEGF-Notch1信號通路，升高微血管CD34等環(huán)節(jié)促進血管新生，改善腦缺血。

2）闡明了滋陰活血解毒法對急性腦缺血后凝血酶毒性損害的干預作用，其機制可能與滋陰活血解毒方抑制凝血酶及炎癥相關因子IL-1β、IL-8、TNF-α的表達有關。此外，解毒化瘀方能有效降低凝血酶受體和ERK1/2信號通路的表達，降低其毒性對細胞的損傷作用，從而達到保護腦組織的作用。

圖5 團隊主要成員合影

（3）將實證研究和臨床應用相結(jié)合，實現(xiàn)了基礎研究向臨床實踐轉(zhuǎn)化，為科研成果的轉(zhuǎn)化提供了新途徑。

自2005年來，項目研究成果在省內(nèi)外10多家醫(yī)院推廣應用，十多年來，應用該成果治療腦梗死病人近12 000例，療效顯著。項目在省內(nèi)外醫(yī)院推廣中產(chǎn)生了較好的經(jīng)濟效益，近三年新增經(jīng)濟效益600余萬元。項目成果應用于臨床后，顯著提高了臨床療效，總有效率達91.3%，臨床治愈率達80.4%；在衛(wèi)生經(jīng)濟學方面，采用本項目成果治療能為每例患者節(jié)約醫(yī)療費用約20%左右，減輕了患者的家庭經(jīng)濟負擔。成果的應用間接培訓臨床醫(yī)師100余人；孵化了各類重點?？?、學科10余個。

二、科研團隊及科研支撐條件

以葛金文教授為學術帶頭人的科研團隊共有32人，其中正高級職稱16人，副高級職稱8人，中級職稱8人；引進海外高層次人才3人，享受國務院政府津貼專家2人，湖南省高層次衛(wèi)生人才“225”工程學科帶頭人3人，具有博士學位23人，碩士學位8人，博士學歷占71.8%；在讀博士研究生10名、碩士研究生26名。

團隊所在研究方向是國家中醫(yī)藥管理局重點學科中西醫(yī)結(jié)合臨床（心腦疾病）、湖南省重點學科中西醫(yī)結(jié)合的核心方向，依托國家中醫(yī)藥管理局心腦血管病重點專科、分子病理三級實驗室、中西醫(yī)結(jié)合心腦疾病防治湖南省重點實驗室、細胞生物與分子技術湖南省高校重點實驗室、中醫(yī)腦病湖南省臨床研究中心等平臺系統(tǒng)開展了中西醫(yī)結(jié)合防治腦梗死血瘀證的基礎和臨床研究。臨床研究中心擁有專業(yè)病床150張；實驗室總面積1 600平方米，建有細胞生物學、分子生物學、形態(tài)功能三大技術平臺，儀器設備總值達1 500余萬元，包括流式細胞儀、活細胞工作站、分子相互作用儀、酶標儀、實時定量PCR儀等細胞生物學和分子生物學研究設備。

圖6 實驗室各類技術平臺

三、主要科研成果

團隊近五年承擔課題120項，其中：國家級科研項目34項，共獲得科研經(jīng)費1 800余萬元。獲得國家發(fā)明專利9項，省部級科研成果獎7項，其中省科技進步一等獎1項、二等獎3項。發(fā)表學術論文200余篇，其中SCI收錄20余篇。出版規(guī)劃教材和專著20余部。培養(yǎng)碩士研究生50余名，博士研究生20余名，博士后進站10人，訪問學者2名；研究生參加科技競賽獲獎22項，其中國家級二等獎3項、省級一等獎1項。