黑枸杞組培育苗技術的研究

劉中雙

(朝陽縣東大屯鄉林業工作站，遼寧 朝陽 122608)

黑枸杞(LyciumruthenicmLurr)屬茄科枸杞屬，是一種具有重要藥用保健價值的棘刺灌木，野生資源多散布于柴達木盆地的格爾木、德令哈、都蘭等地區的戈壁灘上。黑枸杞的漿果具有良好的藥用價值和保健價值，經測定，黑枸杞果實中的總糖含量為6.9%，總酸含量為0.74%。此外黑枸杞中還檢測出了人體所必須的17種氨基酸，以及豐富的微量元素。據中醫文獻報道，黑枸杞味甘、性平，具有抗衰老、清心熱，改善睡眠、美容養顏等眾多作用[1]。隨著人們對其保健價值研究的深入，近年來黑枸杞越來越受到廣大消費者的青睞，栽培面積也迅速擴大。為了盡快培育出大量遺傳性狀完全一致的黑枸杞優良種苗，我們研究了黑枸杞組培育苗技術，研究結果介紹如下：

1 材料與方法

1.1 試驗材料

6月份，取黑枸杞當年萌發的新枝腋芽為外植體。

1.2 外植體消毒

剪取生長健壯的1年生黑枸杞枝條，在室內除去葉片后剪成約8 cm長的莖段，用洗滌靈水輕輕洗刷表面，注意不要破壞腋芽，洗刷完成后置于流動水下沖洗干凈，然后在無菌條件下進行以下操作：(1)用75%酒精浸泡30s，用無菌水沖洗2遍；(2)用0.1%升汞溶液浸泡8min，用無菌水沖洗3遍后備用[2]。

1.3 培養條件

外植體的腋芽誘導、增殖培養和生根培養都在培養室內進行，室內溫度白天控制在25±2℃，夜間溫度為23±2℃，光照時間為16 h/d，光強2000～2500 lx。誘導培養、增殖培養階段以MS為基本培養基，加入35.0g/L蔗糖、8.0g/L瓊脂、pH值為5.6～5.8。生根培養階段以1/2MS為基本培養基，其他條件不變[3]。

1.4 誘導培養試驗

以MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(BA、IBA及NAA)配制12個配方的誘導培養基(表1)。在無菌環境中將消毒后的外植體切取腋芽，接種于誘導培養基上，每個配方接種50瓶，每瓶1個外植體，20d后統計其萌芽率，40d后統計腋芽生長高度。

表1 誘導培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

1.5 增殖培養試驗

待腋芽長到1.0cm以上時，將其從基部剪開，剪成1.0～2.0cm的單株小芽，轉接到以MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(BA、IBA)配制的9個配方的增殖培養基上(表2)。每個組合接種50瓶，每瓶1個嫩芽，40d后統計其增殖率。

表2 增殖培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

1.6 生根培養試驗

剪取3 cm以上的健壯增殖芽，接種到以1/2 MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(NAA、IBA)配制的4個配方的生根培養基上(表3)進行生根培養。每個處理接種10瓶，每瓶接種5株試管苗。接種30d后統計生根率及根長。

表3 生根培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

2 結果與分析

2.1 誘導培養基的選擇

表4 不同誘導培養基組合對黑枸杞腋芽誘導的影響

外植體接種7d后腋芽開始萌發，約15d后陸續長成綠色新芽。不同的培養基激素組合對外植體腋芽誘導萌芽率及芽生長狀況的影響均較大。生產實踐中我們既要考慮萌芽率，也要兼顧考慮芽的生長狀況。從表4可以看出，4號培養基誘導萌芽率最高，芽生長狀況也相對較好，其次是3號培養基。兩個培養基上成活的芽均能夠達到增至培養的要求。而添加NAA的培養基，不但萌芽率低，而且基部愈傷組織過大，芽生長不良。因此用于黑枸杞腋芽誘導培養的最適培養基配方為MS+ BA1.0 mg/L+IBA 0.8 mg/L。

2.2 增殖培養基的選擇

新芽接入增殖培養基后，經過約20d培養，底部愈傷組織開始有增殖芽出現，40d后，調查有效增殖芽數(高1.0cm以上增殖芽為有效)。表5表明，隨著BA濃度的增加，黑枸杞組培苗的增殖倍數也隨之增加，但是當BA達到2.4mg/L的時候，組培苗基部愈傷組織異常增大，伴隨出現玻璃化現象，影響了組培苗的正常增殖，導致無效增殖芽過多，有效芽減少。由表5可以看出，增殖培養過程中最佳培養基是MS+BA 1.6mg/L+IBA 0.10mg/L。此狀態下黑枸杞有效增殖芽多且生長健壯。

表5 不同增殖培養基對黑枸杞組培苗增殖的影響

2.3 生根培養基的選擇

黑枸杞組培苗接入生根培養基約15d后芽基部開始有白色根長出，30d后統計生根率。每株組培苗的所有根總長超過2.0cm，即為合格生根苗。理想的生根苗應有超過3條根，每條根長度在1.0cm以上，3.0cm以下，過長則移栽過程中易斷裂，進而影響移栽成活率。從下表6可以看出，兩種激素配合使用具有協同作用，不但生根率高，而且單株組培苗的生根數量也多。因此黑枸杞最適生根培養基配方為1/2MS+NAA 0.2mg/L +IBA 0.6mg/L。

表6 不同生長素配比對黑枸杞組培苗生根的影響

3 結論

以黑枸杞當年生枝條腋芽為外植體，研究了外植體誘導、增殖及生根階段的最佳培養條件。通過研究，找出了黑枸杞組培育苗各個過程的最佳培養基配方，使黑枸杞組培苗外植體的誘導率達到了78%，有效芽增殖倍數可達到6.32倍，生根率達到92%以上。形成了較為完備的組培工廠化育苗技術，為黑枸杞良種苗木的大規模工廠化生產奠定了技術基礎。

[1]楊斌，王向未. 黑枸杞及其功能性成分在食品工業中的應用及開發進展[J].輕工科技，2014(10)：22-23.

[2]王艷輝，劉麗霞. 金葉復葉槭組培技術研究[J].遼寧林業科技，2014(04)：44-45.

[3]溫福欣.日本小菊組培技術的研究[J].中國林副特產，2017(04)：51-53.