急性腦梗死早期外周血淋巴細胞亞群的變化及其意義

羅煥，蔣超，朱麗，左方芳，田寧，孫璐

鄭州大學第五附屬醫院神經內科，河南鄭州 450052

腦卒中是一種高致殘率、高死亡率的急性腦血管事件[1]，在我國以及世界范圍都已成為人類死亡和致殘的重要病因之一，危害人類生命健康，降低生活質量，對患者家庭以及整個社會造成沉重負擔。據全球疾病負擔調查分析，卒中是全球范圍內生命損失第三大原因[2]。

腦卒中主要包括缺血性卒中和出血性卒中兩種，其中缺血性卒中占所有腦卒中患者的70%～80%。缺血性腦卒中又稱“腦梗死”，腦梗死不僅導致神經元死亡、顱內炎癥反應，還能引起機體免疫系統改變[3]。淋巴細胞是機體的主要免疫細胞，在細胞免疫應答中發揮重要作用，可輔助體液免疫應答。腦梗死的發生發展過程與免疫系統之間關系的研究正在逐步展開，但各研究結果不盡相同，且對Th17細胞、Treg細胞研究較少。為探討淋巴細胞亞群（如Th細胞、Tc細胞、NK細胞、B細胞、Th17細胞、Treg細胞）在急性腦梗死早期中的變化及其意義，該院于2016年6月—2017年6月收集急性腦梗死患者的外周血，進行淋巴細胞亞群測定，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該病例對照研究連續納入了入住該院的急性腦梗死患者50例作為研究對象，均符合2010年中國急性缺血性腦卒中診治指南[4]，選取同時期門診健康體檢者50名作為對照組。其中男女比例均為1:1，年齡均大于40歲，兩組病例的一般臨床資料特點見表1。入選標準：急性腦梗死發生12 h之內入院且NIHSS評分≥4分（出血性卒中動物實驗模型顯示腦損傷體積影響細胞和體液免疫[5]）。剔除標準：入院時伴有感染癥狀，伴有實驗室檢查指標（如血尿常規、ESR等）異常，惡性腫瘤，近期服用抗炎及免疫抑制劑等藥物。50名健康體檢者在此前的體格檢查和常規實驗室檢查均屬于健康狀態，同樣按照上述納入標準和剔除標準篩選。該項檢測經倫理委員會認可，所有研究對象及其家屬均簽署知情同意書，所有操作均符合無菌操作原則。

1.2 檢測方法

所有研究對象均于入院首個清晨空腹靜脈取血等5 mL。淋巴細胞亞群檢測：應用該院檢驗科提供的美國BD公司的FACSCalibur流式細胞儀及美國BD公司生產的抗體：總淋巴細胞（CD45），Th細胞（CD3、CD4）、Tc 細胞（CD3、CD8）、NK 細胞（CD16、CD56）、B細 胞 （CD19）、Th17 細 胞 （CD4、IL17A）、Treg 細 胞（CD4、CD25、FoxP3）。測定結果采用 CellQuest功能軟件進行數據獲取與分析。

1.3 統計方法

采用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗進行分析，計數資料以百分比（%）表示，采取χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 比較兩組一般臨床資料

腦梗死組年齡（57.43±16.72）歲，對照組（60.67±10.45）歲（t=0.726，P＞0.05），兩組一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表 1。

2.2 比較兩組淋巴細胞亞群的比例

比較兩組外周血中淋巴細胞亞群Th細胞、Tc細胞、NK細胞、B細胞、Th17細胞、Treg細胞占總淋巴細胞的百分比（%），對照組總外周血淋巴細胞數為5.23×109/L，腦梗死組總外周血淋巴細胞數為11.96×109/L。腦梗死組較對照組Th細胞、Tc細胞、NK細胞、B細胞比例降低，差異有統計學意義（P＜0.05）,Th17細胞、Treg細胞比例升高，差異有統計學意義 （P＜0.05）。 見表 2。

表1 兩組病例一般資料特點的比較

表2 兩組病例外周血淋巴細胞亞群占總淋巴細胞比例的比較[（±s），%]

表2 兩組病例外周血淋巴細胞亞群占總淋巴細胞比例的比較[（±s），%]

組別Th Tc NK B Th17 Treg腦梗死組（n=50）對照組（n=50）t值P值18±8.05 28±5.64 1.89 0.040 27±3.09 31±3.88 1.86 0.046 14±4.87 18±2.35 1.94 0.040 14±2.59 16±3.21 1.86 0.043 1.3±0.54 0.9±0.44 1.86 0.019 5.8±2.01 3.2±1.18 1.94 0.014

3 討論

研究發現腦卒中可導致神經-免疫系統紊亂，1974年Orra等[6]報導了腦卒中后免疫抑制，1977年Beseclovsky等[7]提出神經-內分泌-免疫網絡假說，神經、內分泌和免疫系統之間的相互關系的研究越來越多。Barclay Sd等[8]研究認為，T細胞上CD3+分子的減少可降低對抗原提呈細胞上的主要組織兼容性復合體抗原決定簇識別能力，從而減弱機體的免疫功能。目前，急性腦梗死與免疫系統的關系尚不明確，該研究旨在通過分析急性腦梗死早期患者外周血淋巴細胞亞群的變化，來探索腦梗死后免疫系統的變化。

免疫系統是由多種免疫器官、免疫細胞和全身各級淋巴管構成，免疫應答可分為體液免疫應答和細胞免疫應答2種。在正常免疫應答過程中，淋巴細胞群及其亞群之間相互作用，從而完成對抗原物質的識別、免疫應答和清除，從而維持機體正常的免疫系統的穩定。淋巴細胞是機體免疫系統的主要免疫細胞，不僅參與體液免疫應答，而且在細胞免疫應答中發揮重要作用。在外周血中淋巴細胞約占白細胞的20%～45%。淋巴細胞可分為T細胞、B細胞、NK細胞等，并可以進一步分為若干亞型。CD3+T是總T淋巴細胞，它主要分為兩個亞群，即CD3+CD4+T（Th）細胞和CD3+CD8+T（Tc）細胞。Th細胞又可分為Th1細胞、Th2細胞、Th3細胞、Th17細胞等。近年來，又命名了一種新的具有免疫抑制作用的Th細胞，即調節性T細胞（Treg細胞）。NK細胞是自然殺傷細胞，參與固有免疫應答，能直接殺傷靶細胞，此外尚具有免疫調節功能[9]。

淋巴細胞及其亞群在免疫應答反應中起重要作用，目前Treg細胞在腦卒中中的變化及作用存在爭議[10-11]。與前人的動物實驗研究相似[10]，該次發現急性腦梗死患者外周血 Th17 細胞[（1.3±0.54）%vs （0.9±0.44）%]、Treg 細胞[（5.8±2.01）%vs （3.2±1.18）%]的比例較正常對照組升高了，然而Th細胞（18±8.05）%vs（28±5.64）%、Tc 細胞[（27±3.09）%vs （31±3.88）%]、NK 細胞[（14±4.87）%vs （18±2.35）%]、B 細胞[（14±2.59）%vs （16±3.21）%]的比例降低了。這說明了急性腦梗死早期存在機體免疫系統的紊亂，淋巴細胞亞群數量有所變化。據報導，在炎癥反應中Th細胞能夠加劇炎癥反應，而Treg細胞發揮炎癥抑制作用[12-13]；在腦梗死后Th17細胞的數量與比例均明顯升高，加重腦組織損傷[12,14]；在腦血管病相關炎癥反應過程中若Treg細胞缺如或功能受到抑制則能夠促進腦損傷相關的炎癥反應，并能夠加重神經功能的缺損程度[15]。該實驗研究結果結合上述研究報導說明在急性腦梗死后Th17細胞數量增加，可促進腦卒中后炎癥反應，而Treg細胞數量有所增加，能夠抑制腦卒中后炎癥及免疫反應，抑制神經功能缺損。B細胞主要參與體液免疫反應，該研究中B細胞較對照組有所減少，可能是急性腦梗死后體液免疫反應受到抑制所致；NK細胞是自然殺傷細胞，該研究中NK細胞較對照組有所減少，說明急性腦梗死后可能發生了自然殺傷作用或者免疫調節作用；Tc細胞是細胞毒性細胞，該研究中Tc細胞較對照組有所減少作用,說明在急性重癥腦梗死時可能產生細胞毒性作用殺傷靶細胞，或者細胞毒性作用被抑制，這可能與機體感染和神經保護機制有關。

綜上所述，急性腦梗死患者早期免疫功能的變化與腦卒中患者發病及病情變化相關。急性腦梗死早期患者免疫系統受到抑制，這可能是由于腦組織缺血缺氧受損后，神經-內分泌-免疫網絡紊亂，使機體細胞免疫和體液免疫受到抑制，從而發生卒中后免疫抑制綜合征。也可能與腦卒中后外周血Th17細胞、Treg細胞的比例變化相關。免疫因素在急性腦梗死早期中的作用及其相互作用機制還有待進一步探討。

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