血液中乙醇濃度測定方法及影響因素的探究

李春麗，韓文軍，李學博，李亮亮

(山東政法學院司法鑒定中心，山東 濟南 250014)

酒后駕車是導致交通事故的重要因素之一?！缎谭ㄐ拚浮?2011年)將醉酒駕駛機動車納入刑事犯罪，新《道路交通安全法》也規定，測定血液中乙醇的濃度含量是認定車駕駛人員是否飲酒的重要依據?！盾囕v駕駛人員血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗》中規定，駕駛人員血液中的乙醇含量大于或者等于20 mg/100 mL，小于80 mg/100 mL的行為，為飲酒駕車；駕駛人員血液中的乙醇含量大于或者等于80 mg/100 mL的行為，為醉酒駕駛。因此，做好對血液中乙醇濃度的測定，在實際案件中具有重要作用。

乙醇俗稱酒精，分子式為CH3CH2OH，無色易燃易揮發，具有特殊的芳香氣味。酒精進入空胃后， 0.5～1.5 h內，血液中酒精濃度值 (blood alcohol concentration，BAC)會達到峰值[1]。酒精為揮發性極強的物質，隨著時間的延長，在血液中的濃度會快速下降，一般8～10 h后，基本無法再測定出血液中酒精的含量[2]。在眾多的酒駕判定中，血液中乙醇的濃度最能正確反應是否酒駕。本文簡述常用的血液中乙醇濃度的測定方法，綜述其利弊，并根據實際情況，分析影響測定血液中其濃度的因素。

1 血液中乙醇濃度測定方法

隨著科學技術的不斷發展，血液中乙醇濃度的測定方法不斷進步，目前，應用比較多的方法有定性化學法、定量化學法、乙醇脫氫酶法、頂空氣相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法、近紅外光譜法等[3]。

1.1 定性化學法

定性化學法最常見的是碘仿反應法。乙醇與碘與氫氧化鉀反應，最終生成黃色的碘仿沉淀。此方法靈敏度可達1:1000，但反應具有非特異性。除此之外，定性化學法還可用苯酰氯反應來測定。

1.2 定量化學法

常用的主要有酸性重鉻酸鹽氧化分光光度法。原理是乙醇在酸性條件下容易被重鉻酸鹽氧化，可以測定重鉻酸鹽溶液的吸光度來計算乙醇的含量。除此之外Widmark法也可用于乙醇濃度測定。

1.3 乙醇脫氫酶法

在高氯酸的作用下，血樣中的蛋白質沉淀，取其上層液加入緩沖液(緩沖液中含有乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶)，產生原型輔酶(NADH)，測定原型輔酶在340 nm處的吸光光度值，進而測定乙醇的含量[4]。除此之外，可利用乙醇脫氫酶把乙醇轉化為乙醛，利用分光光度計測定其340 nm處的紫外吸收值，繪制標準曲線，進而測定血液中的酒精濃度。

1.4 頂空氣相色譜法

氣相色譜法原理是根據醇類具有易揮發的特性，用氫火焰離子化測定器(FID)進行監測，與標準品進行比較，利用內標法對峰面積進行定量，以保留時間進行定性。常見的有直接進樣法和頂空氣相色譜法。直接進樣法最低檢出限為10μL/mL，而頂空法最低出限為1μL/mL。頂空氣相色譜法具體操作為在含有酒精的血樣里，加入叔丁醇，在特定條件下，酒精和叔丁醇揮發，進入瓶子頂空部，當達到氣-液平衡時，氣體中二者含量與檢材中二者含量成正比。抽取氣體，進行氣相色譜分析，根據色譜峰的峰面積確定酒精的含量。頂空氣相色譜法是公安部發布的兩個行業標準(GA/T 842-2009 血液酒精含量的檢驗方法和GA/T 1073-2013生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法) 的首選方法，也是司法部司法鑒定技術規范SF/Z JD0107001-2016血液中乙醇的鑒定頂空氣相色譜法中規定的方法[5]。

1.5 氣相色譜-質譜聯用法

氣相色譜-質譜聯用法主要是利用GC/MS儀的特點。GC/MS儀具有高效的分離能力和準確的鑒定能力。氣相色譜分離出來的物質，在質譜儀作用下發生電離，經過加速電場時，形成粒子束，進入分析器。通過測定離子核質比來確定乙醇的含量。相關研究報道其相對標準偏差可保持在7%[6]。

1.6 近紅外光譜法

在700～2500 nm的近紅外波長范圍內，含有C-H，O-H，N-H和S-H化學鍵的化合物會產生吸收。不同波段產生不同的諧波，這些諧波組成吸收譜圖-指紋圖。相同的譜圖一定是相同物質得到的。近紅外光對生命組織的穿透深度可達5 mm。相關實驗已經證明了本試驗方法的可行性[7]。

2 不同測定方法的優缺點

化學法、乙醇脫氫酶法、頂空氣相色譜法、氣相色譜-質譜法和近紅外光譜法曾經或正在作為血液中乙醇含量測定的重要方法。它們在不同發展階段和不同實驗室發揮了不同的作用。下面總結以上幾種方法的優缺點見表1。

表1 血液中乙醇含量的不同測定方法的優缺點

3 血液中乙醇濃度測定的影響因素

3.1 樣本采集過程中的影響因素

采集部位：一般選擇體表淺靜脈血，如果選擇其他部位的血，可能會影響血液中乙醇的測定結果；采集處理：采集樣品時，如果使用含有乙醇成分的消毒棉球，就會污染采集樣本，進而影響測定結果，因此應該選擇不含醇類的消毒棉球消毒；

樣本抗凝：抽取的樣本應該添加抗凝劑或使用抗凝管，否則血液凝固后會影響測定結果[8]。

3.2 樣本保存過程中的影響因素

采集后樣本的保存至關重要，樣本的穩定性會直接影響測定結果的準確性。保存不佳的樣本，其中的乙醇可能會氧化或揮發，血液可能會因為腐敗而產生更多的乙醇。一般認為，含乙醇的血樣應該保存在0～4℃條件下，并于24 h內送檢。如果不能按時送檢，應該保存在-20℃條件下[9]。如果樣本需要較長時間的保存，但又沒有冷藏條件，可在樣本中加入1%的防腐劑(例如，氟化鈉)。相關研究也表明，水平位放置的血漿中酒精濃度明顯低于直立位放置的血漿中酒精濃度，而對于血清卻沒有太大影響[10]。

3.3 樣本測定過程中的影響因素

在眾多的測定方法中，首推頂空氣相色譜法，本方法的測定結果可以直接作為法庭證據。本節內容僅介紹影響頂空氣相色譜法的因素，首先應該保證血液樣本新鮮，保存完好，送檢樣本應該盡快完成測定；其次應該確定儀器設備完好，氣相色譜儀和頂空進樣器都在標準條件下工作；確定乙醇和叔丁醇應該為色譜純，不可用分析純替代；除此之外，確保樣本未被交叉污染，確保實驗過程的環境條件符合標準，應該建立專門的檢材保管制度等。

3.4 尸體樣本血液乙醇濃度的影響因素

尸體腐?。焊瘮〉氖w可以產生新的乙醇，某些微生物可以分解尸體內存在的乙醇，從而造成血液中乙醇濃度降低。尸體保存在0～4℃條件下，將不會出現明顯乙醇生成現象，再此，通過測定正丙醇的含量可以判斷死后是否有新乙醇產生[10-11]；

尸體樣本采集：采集尸體血液樣本時，應該避免乙醇彌散作用。所以，對于一般非腐敗檢材，應該選擇遠離胃部及腸道的外周靜脈血。

其它因素：死者生前患病、服用藥物，或者救治過程中使用甘露醇，或者尸體停放在具有氣霧劑等的地方，都會對酒精濃度測定產生影響。

綜上所述，血液樣本的采集、保存、運輸、測定等都有影響樣本中酒精濃度的因素，因此，在實際操作中，為了準確客觀反應當事人樣本中酒精的濃度，應該注意避免各種因素造成的影響。

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