凌崗 程小兵 袁樹忠

摘 要：該研究以酚菌酮、氯化銅和氨水為主要原料，合成了酚菌酮銅絡(luò)合物，收率97.6%；采用生長速率法（平皿法）研究酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌生長抑制作用。結(jié)果表明，酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌有較高的毒力，使用濃度以400～500mg/L為宜。

關(guān)鍵詞：酚菌酮；銅；蘋果；斑點(diǎn)落葉病菌

中圖分類號(hào) S436.611 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2018）10-0070-02

蘋果斑點(diǎn)落葉病又稱褐紋病，主要危害葉片，造成早落，也危害新梢和果實(shí)，影響樹勢(shì)和產(chǎn)量，而且侵害果實(shí)，降低果品質(zhì)量，在各蘋果產(chǎn)區(qū)都有發(fā)生，成為蘋果生產(chǎn)上的重大病害之一。酚菌酮是騰龍公司的專利產(chǎn)品，其用于水稻稻瘟病[1]、紋枯病[2]以及小麥白粉病[3]的防治已有文獻(xiàn)發(fā)表，但沒有用于防治其他病害的報(bào)道。銅化合物是重要的農(nóng)用殺菌劑，無機(jī)銅制劑在果樹和作物的花期及幼果期使用易產(chǎn)生藥害，有機(jī)銅制劑殺菌譜廣、低殘留、污染小、安全可靠，并與環(huán)境相容性好、親和性好，可以與其他作用的農(nóng)藥相混用。目前有機(jī)銅制劑主要有：噻菌銅（龍克菌）（20%SC）、喹啉銅、松脂酸銅、壬菌銅、腐殖酸銅等[4]。本研究首次合成了酚菌酮銅絡(luò)合物，合成路線如圖1所示。采用生長速率法對(duì)抑制蘋果斑點(diǎn)落葉病菌生長進(jìn)行了試驗(yàn)，旨在為該化合物進(jìn)一步應(yīng)用開發(fā)提供可靠的依據(jù)。

圖1 酚菌酮銅絡(luò)合物合成路線

1 合成實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑 儀器：Bruker AC-400型核磁共振儀（以CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)）；x一4數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀，溫度未校正；液相色譜Agilent 1100。試劑：酚菌酮（江蘇騰龍生物藥業(yè)有限公司技術(shù)中心提供），其余試劑市售，氨水（25%～28%）。

1.2 合成工藝 向裝有排空冷凝器、溫度計(jì)、攪拌棒的500mL四口燒瓶中加入氯化銅21.3g（0.125mol）和去離子水250mL，攪拌滴加氨水40g（25%～28%）（0.588mol）控制溫度在40℃左右，滴完保溫?cái)嚢?h。滴加43.6g95%酚菌酮原油控制溫度在50℃以下，同時(shí)滴加32%液堿31.3g（0.28mol），滴完保溫3h，降溫過濾，水洗、烘干得產(chǎn)品47.4g，經(jīng)液相檢測(cè)，歸一純度為95%，收率為97.6%（mp：133～135℃）。1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：6.71～7.82（m，CH2，苯環(huán)），6.383（t，2H，CH2），2.042（m，5H，CH2），1.038（t，2H，CH3）。

2 活性測(cè)定部分

2.1 試驗(yàn)靶標(biāo) 供試病原真菌為蘋果斑點(diǎn)落葉病菌（Alternaria alternate f.sp.mali），菌株由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)殺菌劑實(shí)驗(yàn)室提供。

2.2 儀器與試劑 電子天平（感量0.0001g），生物培養(yǎng)箱，蒸汽滅菌鍋，干熱滅菌烘箱，超凈工作臺(tái)，直徑90mm培養(yǎng)皿，移液器，接種針，打孔器（內(nèi)徑6mm），卡尺。N，N-二甲基甲酰胺（DMF）（國藥集團(tuán)），吐溫-80（國藥集團(tuán)）。

2.3 培養(yǎng)條件 生物培養(yǎng)箱內(nèi)（25±1）℃。

2.4 毒力測(cè)定方法 參照NY/T1156.2-2006標(biāo)準(zhǔn)推薦的平皿法，步驟如下：（1）病菌準(zhǔn)備：室內(nèi)培養(yǎng)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌，備用。（2）酚菌酮銅絡(luò)合物測(cè)試濃度藥液的配制：先用精密電子天平精確稱取酚菌酮銅絡(luò)合物原藥0.2000g 于10mL容量瓶中，用DMF溶解并定容，得20000mg/L的酚菌酮銅絡(luò)合物溶液，將此溶液用滅菌的0.1%吐溫-80水溶液稀釋，根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，藥劑測(cè)定濃度設(shè)為15.63、31.25、62.5、125、250、500mg a.i./L，以添加等量0.1%吐溫-80水溶液為對(duì)照。所有處理重復(fù)4次。（3）藥劑處理：在無菌條件下，將配制的各處理藥液，分別加到預(yù)先融化開的PSA培養(yǎng)基中，充分搖勻后，平均傾入4個(gè)培養(yǎng)皿中，冷卻后制成含藥培養(yǎng)基平板，并且以不加藥為對(duì)照處理。（4）接種與培養(yǎng)：將預(yù)先培養(yǎng)好的蘋果斑點(diǎn)落葉病菌，在無菌條件下，用直徑6mm的打孔器在菌落邊緣打取菌絲塊。在無菌操作條件下，將菌絲塊移入含藥培養(yǎng)基平板中央，每皿放1個(gè)，菌絲面朝下，蓋上皿蓋，然后將培養(yǎng)皿倒置放入25℃生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d。（5）結(jié)果調(diào)查：培養(yǎng)結(jié)束后，用卡尺測(cè)量各處理培養(yǎng)皿中病菌菌落直徑（mm），十字形交叉各測(cè)量一次，取平均值即為菌落直徑（D）。（6）數(shù)據(jù)處理方法：用Excel計(jì)算菌菌生長直徑和生長抑制率，公式如下：

生長直徑D1=菌落直徑D-菌絲塊直徑D0；

生長抑制率（%）=[對(duì)照的生長直徑-處理的生長直徑對(duì)照的生長直徑×100]

用DPS6.55軟件對(duì)藥劑的處理濃度與生長抑制率進(jìn)行回歸分析，計(jì)算毒力回歸方程，求取抑制中濃度（IC50）、抑制生長90%濃度（IC90）及其95%置信限。

2.5 試驗(yàn)結(jié)果 測(cè)定結(jié)果表明，酚菌酮銅絡(luò)合物的濃度在15.63～500mg/L時(shí)，對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的生長抑制率達(dá)到6.43%～98.57%，用毒力回歸方程的方法對(duì)藥劑濃度與抑制率進(jìn)行轉(zhuǎn)換、線性回歸，得到回歸方程如表1所示。從回歸方程中，計(jì)算得到，酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌菌絲生長的抑制中濃度（IC50）為90.5615mg/L，IC90為316.7680mg/L。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌有較高的毒力，IC50為90.5615mg/L，與段俊飛等報(bào)道的藥劑活性相比，酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的活性高于75%百菌清WP（IC50=122.8875mg/L[5]，下同）、65%代森鋅WP（124.1855mg/L[5]），明顯高于50%醚菌酯WG（743.0596mg/L[5]）和80%多菌靈WP（1665.8480mg/L[5]）。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，酚菌酮銅絡(luò)合物對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌菌絲生長抑制率為90%的濃度理論值316.7680mg/L，實(shí)際試驗(yàn)中500mg/L的抑制率達(dá)到98%以上，因此，在防治蘋果斑點(diǎn)落葉病時(shí)，建議酚菌酮銅絡(luò)合物的濃度為400～500mg/L。

參考文獻(xiàn)

[1]陳高祥，王太高.40%酚菌酮EW等防治水稻稻瘟病田間藥效試驗(yàn)[J].大麥與谷類科學(xué)，2010，01：50.

[2]梅桂芳，章玉琴，孟愛中，等.40%酚菌酮水乳劑防治水稻紋枯病田間藥效試驗(yàn)初報(bào)[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，18（04）：69-70.

[3]季文祥，王玉國，皋古西，等.40%酚菌酮水乳劑防治小麥白粉病田間藥效試驗(yàn)報(bào)告[J].農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備，2013，06：55，103.

[4]劉艷，王振軍.有機(jī)銅類化合物殺菌劑的發(fā)展現(xiàn)狀與展望[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)通訊，2015，01：177-179.

[5]段俊飛，趙緒生，胡同樂，等.幾種殺菌劑對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的室內(nèi)毒力及田間防效[J].中國植保導(dǎo)刊，2012，23（8）：53-57.

（責(zé)編：張宏民）