紫杉醇對乳腺癌腫瘤免疫逃逸干預(yù)作用的臨床研究

赤慶華 薛江楠

摘要 目的：探討紫杉醇對乳腺癌腫瘤免疫逃逸的干預(yù)作用。方法：收治行吡柔比星+環(huán)磷酰胺+紫杉醇化療方案治療的乳腺癌患者60例作為觀察組，門診體檢者40例作為對照組。檢測觀察組治療前、中、后及對照組外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平、血清Thl細(xì)胞因子（IL-12、IFN-γ）、Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）水平及IFN-γ/IL-4。結(jié)果：觀察組治療前、治療中外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平明顯高于對照組（P<0.05），觀察組治療后外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平較治療前、治療中明顯降低（P<0.05）；觀察組治療前、治療中Thl細(xì)胞因子（IL-12、IFN-¨表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4明顯低于對照組（P<0.05），而Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平明顯高于對照組（P<0.05），觀察組治療后Thl細(xì)胞因子表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4較治療前、治療中明顯升高（P<0.05），而Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。結(jié)論：紫杉醇可能具有抑制乳腺癌腫瘤免疫逃逸的作用機制。

關(guān)鍵詞 紫杉醇；乳腺癌；腫瘤免疫逃逸；抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

乳腺癌是常見于女性的惡性腫瘤，目前多采用乳腺癌根治術(shù)予以治療，術(shù)后多需實施化療方案進(jìn)行治療，但化療藥物可對患者免疫系統(tǒng)造成一定損傷和抑制作用，因此認(rèn)為化療可明顯抑制患者免疫系統(tǒng)功能。但近些年有研究發(fā)現(xiàn)，某些化療藥物可明顯增強腫瘤細(xì)胞的免疫原性，顯著促進(jìn)腫瘤細(xì)胞大量釋放內(nèi)源性危險信號，同時還通過抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）等作用機制介導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)[1.2]。紫杉醇是抗癌藥理效應(yīng)作用較強的藥物，可促進(jìn)白細(xì)胞介素（IL）-12的分泌，從而糾正腫瘤組織誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫系統(tǒng)功能失常現(xiàn)象[3]。

本研究擬探討紫杉醇對乳腺癌腫瘤免疫逃逸的干預(yù)作用，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

資料與方法

2016年2月-2017年10月收治術(shù)后行化療方案治療的乳腺癌患者60例，手術(shù)治療前行病理組織實驗室檢查均已確診。年齡37～62歲，平均（48.7±9.5）歲。選擇同期門診體檢者40例作為對照組，年齡35～60歲，平均（46.6±9.2）歲。均除外合并有自身免疫系統(tǒng)疾病、感染反應(yīng)等。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。所有患者和體檢者均簽署知情同意書。

治療方法：所有乳腺癌患者入院后均實施吡柔比星（ADM）+環(huán)磷酰胺（CTX）+紫杉醇化療方案進(jìn)行治療，ADMf治療劑量40 mg/m2），靜脈滴注，第1天；CTX（治療劑量600 mg/m2），靜脈滴注，第1天，21d為1個周期，連續(xù)治療4個周期。然后序貫紫杉醇（治療劑量175mg/m2），靜脈滴注3h，第1天，21d為1個周期，連續(xù)治療4個周期。

兩組CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平檢測：采用流式細(xì)胞儀檢測觀察組治療前、治療中、治療后及對照組外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平，外周血采用FACS緩沖液洗滌干凈后加入固定液，室溫條件下避光孵育作用20min，洗滌后將懸浮細(xì)胞置于FoxP3緩沖液中，室溫條件下避光作用15min，洗滌干凈后，分成5管，分別加入同型對照，F(xiàn)ITC-CDllb、PE-CDllb、APC-B220、APC-B220+FITC-CD4+PE-FoxP3各20uL，室溫條件下避光作用30min，使用染色緩沖液洗滌2次，上機進(jìn)行分析，確認(rèn)FoxP3的細(xì)胞，即認(rèn)定為CD4+CD25+Tr細(xì)胞比例。

兩組血清Thl、Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平檢測：所有乳腺癌患者治療前、治療中和治療后及對照組均抽取外周靜脈血液5mL，離心處理和分離血清，采用ELISA法檢測血清Thl細(xì)胞因子（IL-12、IFN-γ）和Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析本研究數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用t檢驗，計量資料比較采用X2檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

觀察組不同時間點及對照組外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平比較：觀察組治療前、治療中外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平明顯高于對照組（P<0.05），觀察組治療后外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平較治療前、治療中明顯降低（P<0.05），而與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表l。

兩組血清Thl、Th2細(xì)胞因子水平及Thl/Th2比較：觀察組治療前、治療中Thl細(xì)胞因子（IL-12、IFN-γ）表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4明顯低于對照組（P<0.05），而Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平明顯高于對照組（P<0.05）；觀察組治療后Thl細(xì)胞因子表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4較治療前、治療中明顯升高（P<0.05），而Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

討論

近些年臨床對腫瘤發(fā)病機制的深入研究發(fā)現(xiàn)腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展過程是腫瘤細(xì)胞和宿主細(xì)胞之間相互對抗的過程，兩者相互作用對于腫瘤組織發(fā)展、遠(yuǎn)處臟器組織轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)歸均發(fā)揮著十分重要的作用，而宿主免疫系統(tǒng)及其微環(huán)境也在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中占有重要地位[4]。

CD4+CD25+Tr細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)是近些年免疫學(xué)領(lǐng)域的重大突破，相關(guān)研究證實，CD4+ CD25 +Tr細(xì)胞可通過分泌TGF-B l、IL-10等免疫系統(tǒng)功能抑制細(xì)胞因子，從而在免疫系統(tǒng)抑制中發(fā)揮重要的作用。機體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)與腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展之間存在密切聯(lián)系，根據(jù)CD4+Th細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的差異性，分為Th0、Thl、Th2等T細(xì)胞亞型。正常狀態(tài)下，Thl與Th2淋巴細(xì)胞亞群水平處于平衡狀態(tài)，維持正常免疫系統(tǒng)功能[5.6]；惡性腫瘤患者Thl細(xì)胞受到明顯抑制，而Th2細(xì)胞占有優(yōu)勢地位，Thl/Th2向Th2方向發(fā)生漂移現(xiàn)象，使得機體抗腫瘤免疫監(jiān)視的生理功能明顯降低。IL-12細(xì)胞因子可促進(jìn)Th0分化為Thl，而Thl可大量分泌IFN-γ[7]。IL-12、IFN-γ均為Thl型細(xì)胞因子，可通過各種途徑起到抗腫瘤的生理學(xué)作用，最終加強免疫系統(tǒng)識別機體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的作用，殺滅腫瘤細(xì)胞等。IL-4是介導(dǎo)Th2細(xì)胞發(fā)育的重要因子，Th2細(xì)胞可分泌IL-4、IL-10等細(xì)胞因子，進(jìn)而抑制機體抗腫瘤免疫系統(tǒng)功能。

紫杉醇是從紫杉類或紅豆杉植物中分離產(chǎn)生的化療藥物，其主要通過促進(jìn)微管的形成過程，起到抑制腫瘤細(xì)胞有絲分裂和阻礙紡錘體的形成，最終使得腫瘤細(xì)胞大量死亡。此外，紫杉醇還具有免疫修飾的生理學(xué)作用，可明顯促進(jìn)白細(xì)胞介素及干擾素的大量釋放，起到殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞生長的藥理作用，目前紫杉醇已廣泛用于腫瘤疾病的治療[8]。既往研究中關(guān)于紫杉醇參與乳腺癌免疫逃逸的臨床文獻(xiàn)報道較為少見，有相關(guān)研究認(rèn)為，紫杉醇可有效抑制腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞免疫抑制作用，從而使得巨噬細(xì)胞恢復(fù)免疫細(xì)胞因子能力。

本研究結(jié)果顯示，觀察組治療前、治療中外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平、Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平明顯高于對照組fP<0.05），觀察組治療后外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平較治療前、治療中明顯降低（P<0.05），而與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；觀察組治療前、治療中Thl細(xì)胞因子（IL-12、IFN-¨表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4明顯低于對照組（P<0.05），觀察組治療后Thl細(xì)胞因子表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4較治療前、治療后明顯升高（P<0.05），與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。由此可知，紫杉醇可能具有抑制乳腺癌腫瘤免疫逃逸的作用機制。

參考文獻(xiàn)

[1] Lake RA，Robinson BW.lmmunotherapy andchemotherapy-a practical partnership[J].JNat Rev Cancer，2005，5（5）：397-405.

[2]Cattinoni L，Powell DJ， Rosenberg SA， etal. Adoptive immunotherapy for cancer：building on success[J].J Nat Rev Immunol，2006，6（5）：383-393.

[3]戚麟，高天慧，劉明月，等.紫杉醇酯質(zhì)體與普通紫杉醇治療胃癌療效比較[J].山東醫(yī)藥，201 1，51（16）：66-67.

[4] 閻永貞，那可，魏曉東，等.腫瘤免疫逃逸機制的研究進(jìn)展[J].復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2013，40（5）：619-624.

[5]吳春健，王佃云.初晶學(xué).乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞及Thl/Th2類細(xì)胞因子水平測定及意義[J].山東醫(yī)藥，2010，50（35）：20-22.

[6]丘嫦，陳前軍，戴燕，等.扶正益氣法對乳腺癌輔助化療患者Thl/Th2細(xì)胞漂移的影響研究[J].新中醫(yī)，2014，46（8）：139-142.

[7]王翠，張學(xué)敏，王勝林，等.107例乳腺癌患者靜滴紫杉醇的用藥觀察及護(hù)理[J].河北醫(yī)學(xué)，2010，16（5）：612-614.

[8]商紅云.乳腺癌根治術(shù)后應(yīng)用紫杉醇化療的護(hù)理[J].中國實用醫(yī)藥，2012，7（16）：226-227.