血力口服液的毒理學(xué)安全性評價

姜濤　黃靜　彭曉輝　董婧婧　許冬瑾　樂智勇

【摘 要】目的：探討血力口服液的安全性。方法：以健康成年SPF級昆明小鼠、SD大鼠及鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型四株試驗菌株（TA97、TA98、TA100、TA102）為受試對象，進行急性經(jīng)口毒性實驗、三項遺傳毒性試驗及30天喂養(yǎng)實驗。結(jié)果：血力口服液對兩種性別的小鼠經(jīng)口MTD均大于15g/kgBW；三項遺傳毒性試驗結(jié)果均為陰性，在受試劑量范圍未見致突變活性；30天喂養(yǎng)試驗中受試大鼠各項生理、生化指標與對照組比較，無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論：血力口服液無明顯毒副作用。

【關(guān)鍵詞】血力口服液；急性毒性；遺傳毒性；30天喂養(yǎng)試驗

【中圖分類號】R285.5 【文獻標識碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）04--01

為確保其發(fā)揮藥效的同時兼顧安全性，本次試驗參考《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》[1]，對血力口服液進行了系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評價，為血力口服液的進一步開發(fā)提供安全性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試物 血力口服液（批號 20160404，20ml/瓶，每日推薦劑量為40ml/60kgBW），為滿足毒理實驗要求，將樣品濃縮8倍后進行后續(xù)實驗。

1.1.2 動物 SPF級昆明種小鼠，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001；SD大鼠，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0011。

1.1.3 試驗菌種 鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性試驗

選用昆明小鼠20只，雌雄各半，動物體重為18-22g。采用最大耐受量（MTD）法進行小鼠急性毒性試驗，設(shè)計劑量為25.00g/kg BW（相當(dāng)于人推薦日攝入量的240倍）。動物檢疫3d，試驗前動物禁食16h、自由飲水。樣品用無菌水配制，配制濃度為0.75g/mL，按最大灌胃量（20mL/kg BW），一次給樣，受試物給予劑量為25.00g/kg BW。給樣后連續(xù)觀察14d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。

1.2.2 三項遺傳毒性試驗

1.2.2.1 Ames試驗

選用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型試驗菌株（TA97、TA98、TA100、TA102），開展加與不加大鼠肝S9的平皿摻入法試驗。受試物配制及滅菌方法：稱取1g樣品加無菌水配制成20ml液體，于0.103MPa，滅菌20min，滅菌后對受試物進行無菌檢測，37℃培養(yǎng)24h，無菌生長，即得到最高工作濃度50mg/ml（5000μg/皿），其他濃度以此為基礎(chǔ)，依次用無菌水，5倍等比稀釋。共設(shè)5個劑量組，分別為5000、1000、200、40、8μg/皿，同時設(shè)未處理對照、溶劑（無菌水、無菌DMSO）對照和陽性對照組，不加S-9的陽性對照為敵克松（50.0μg/皿，適用菌株TA97、TA98、TA102）、疊氮鈉（1.5μg/皿，適用菌株TA100）；加S-9的陽性對照為2-氨基芴（10.0μg/皿，適用菌株TA97、TA98、TA100）、1，8-二羥蒽醌（50.0μg/皿，適用菌株TA102）。

1.2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗

選用體重25-30g小鼠50只，隨機分組，每組10只，雌雄各半。設(shè)計高、中、低劑量組分別為10.0g/kg BW、5.0g/kg BW、2.5g/kg BW，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的96、48、24倍。陽性對照組給予40mg/kg BW環(huán)磷酰胺，陰性對照組給予等體積蒸餾水，小鼠灌胃體積20mL/kg BW。采用30h給予受試物法，即兩次給受試物間隔24h，第二次給受試物后6h，頸椎脫臼處死小鼠，取胸骨骨髓材料制片、染色，雙盲法閱片。

1.2.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS11.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。對計量資料采用單因素方差分析，按方差分析的程序進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較，對方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，使其滿足方差齊性要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到方差齊，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析。對計數(shù)資料采用X2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗

染毒后14d內(nèi)，動物狀態(tài)正常，無中毒體征和死亡況，在第15d處死動物進行大體解剖檢查，主要器官未見明顯異常。受試物對兩種性別小鼠的經(jīng)口MTD大于25g/kg（>15g/kg），屬于無毒級

2.2 三項遺傳毒性試驗

2.2.1 Ames試驗：受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未超過溶劑對照組、未處理對照組回變菌落數(shù)2倍以上，無劑量-反應(yīng)關(guān)系，血力口服液在加與不加肝微粒體酶活化系統(tǒng)情況下，Ames試驗結(jié)果均為陰性。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗

各劑量受試物對兩種性別小鼠的骨髓細胞增殖無明顯抑制作用，低、中、高三個劑量組PCE/NCE比值說明受試物無細胞毒性。兩種性別小鼠各劑量組骨髓PCE微核率與溶劑對照組比較均無顯著性差異（P>0.05），說明在受試劑量范圍內(nèi)，血力口服液小鼠嗜多染紅細胞微核試驗陰性。

3 討論

血力口服液組方安全，其中阿膠及茯苓屬于《衛(wèi)生部關(guān)于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號）附件1《可用于保健食品的物品名單》中的品種，葡萄糖酸亞鐵為食品營養(yǎng)強化劑，收載在國家中醫(yī)藥管理局制定的《保健食品原料目錄（一）》（2016年第205號）中，其他原料黨參、白術(shù)、木香屬于《衛(wèi)生部關(guān)于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號）附件2《可用于保健食品的物品名單》中的品種。多項研究資料也證明了上述原料的安全性[2-5]。

參考文獻

保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S]，中華人民共和國衛(wèi)生部，2003，167-224.

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