ING4在子宮內膜癌中的表達及意義

郭玉霞,鄭繪霞

(1暨南大學第二附屬醫院-深圳市人民醫院婦科,深圳 518020；2山西醫科大學第一臨床醫院病理科;*通訊作者,E-mail:huixiazheng62@126.com)

子宮內膜癌是女性生殖系統中常見的惡性腫瘤,其中以子宮內膜樣腺癌較多見,子宮內膜癌是多因素共同作用的結果,然而具體致病因素目前尚無明確定論[1,2]。生長抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是生長抑制因子家族的一員,有大量研究表明ING4基因在多種腫瘤組織中表達下調[3-5],本研究通過免疫組化方法研究ING4基因與子宮內膜癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1 組織標本來源

選擇2006-01～2018-06深圳市人民醫院及山西醫科大學第一臨床醫院病理科存檔的子宮內膜樣腺癌75例,子宮內膜不典型增生20例。按照2009年國際婦產科聯盟標準,子宮內膜樣腺癌患者病理分期I-Ⅱ期44例、Ⅲ-Ⅳ期31例;無淋巴結轉移43例,有淋巴結轉移32例。隨機選擇同醫院同期的正常子宮內膜組織30例作為對照。取材前均未接受放療、化療或激素治療。

1.2 試劑

兔抗人ING4多克隆抗體購自Santa Cruz公司。

1.3 免疫組織化學

所有石蠟標本進行切片,切片厚度4 μm。采用SP法檢測ING4蛋白的表達情況,工作濃度是1 ∶100。以無菌PBS液代替一抗作為陰性對照,DAB顯色。

結果判定:ING4蛋白的陽性表達主要位于細胞核,以著色為棕黃色細顆粒狀為標準,每張切片隨機選取5個視野(×40),計數500個細胞,陽性細胞1%-25%為1分,25%-50%為2分,50%-75%為3分,76%-100%為4分。陽性強度:無色為0分,淡黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。二者之和0-2分為陰性,>2分為陽性[6,7]。

1.4 統計學分析

采用SPSS 19.0統計學軟件進行處理,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

ING4蛋白主要表達在胞核,出現黃色或棕黃色的細小顆粒著色為陽性細胞。本研究通過免疫組化方法檢測了ING4蛋白在不同子宮內膜組織中的表達情況,ING4在正常子宮內膜組織中高表達,在不典型子宮內膜增生組織和子宮內膜樣腺癌組織中表達下調,表達差異有統計學意義(90.0%vs70.0%vs37.3%,見圖1)。

A.正常子宮內膜 B.子宮內膜不典型增生 C.子宮內膜樣腺癌圖1 ING4蛋白在子宮內膜組織中的表達 (SP,×100)Figure 1 Expression of ING4 in endometrial carcinoma (SP,×100)

ING4蛋白在正常子宮內膜組織、子宮內膜不典型增生組織及子宮內膜樣腺癌組織中的表達呈下降趨勢,ING4蛋白在不同組別間的表達差異有統計學意義(P<0.05,見表1);ING4蛋白在子宮內膜癌組織中的表達與病理分期、組織學分級和肌層浸潤有關,差異有統計學意義(P<0.05),與淋巴結轉移情況無關(P>0.05,見表2)。

表1ING4在不同子宮內膜組織中的表達情況

Table1TheexpressionofING4indifferentendometrialcarcinoma

組織類型nING4+-χ2P正常子宮內膜3027326.1440.001子宮內膜不典型增生20146子宮內膜樣腺癌752847

3 討論

近年來發現一種腫瘤抑制因子為生長抑制因子家族,包括5個亞型:ING1、ING2、ING3、ING4、ING5[8]。ING4又稱為p21ING4,是研究最廣泛的基因,定位于染色體12p13.31,編碼249個氨基酸的蛋白質[9]。研究表明ING4能調控細胞的凋亡、增殖、轉移、侵襲、血管生成、缺氧適應等[10]。目前有大量研究表明ING4與多種腫瘤的發生發展有關,比如肺癌[3]、結腸癌[7]、胃癌[4]和頭頸鱗狀細胞癌[5]等。但在國內有關ING4與子宮內膜癌的研究還相對較少,因此,本研究通過免疫組化方法研究ING4對子宮內膜癌的作用,此外為子宮內膜癌提供新的治療靶點。

表2ING4在子宮內膜癌組織中與臨床參數的比較

Table2RelationshipsbetweentheexpressionofING4andclinicopathologicparametersinendometrialcarcinoma

臨床病理特征nING4+-χ2P病理分期13.4800.001 Ⅰ-Ⅱ期442420 Ⅲ-Ⅳ期31427組織學分級5.8140.016 高/中分化552530 低分化20317肌層浸潤6.4210.011 無或淺452223 深30624淋巴結轉移0.2090.648 無431726 有321121

曹芳等[11]通過實時熒光定量PCR檢測了3種乳腺癌細胞株中ING4 mRNA的表達情況,結果顯示3種乳腺癌細胞株中ING4的表達均明顯低于正常乳腺組織,說明ING4基因與乳腺癌的發生發展有關,能抑制乳腺癌腫瘤細胞的生長。張萌等[12]通過免疫組化法檢測了ING4在膀胱尿路上皮癌、癌旁組織及膀胱正常黏膜組織中的表達,結果顯示ING4在膀胱正常黏膜組織和癌旁組織中的表達高于膀胱尿路上皮癌,腫瘤分級及臨床分期越高,ING4表達水平下降,提示ING4與膀胱尿路上皮癌的發生發展相關。我們通過免疫組化方法對ING4蛋白對正常子宮內膜組織、子宮內膜不典型增生組織及子宮內膜樣腺癌組織中的表達情況進行了分析,結果發現,ING4在正常子宮內膜組織、子宮內膜不典型增生組織中呈現了明顯的細胞核的陽性表達,而在子宮內膜樣腺癌組織中的表達明顯下調,差異有統計學意義。ING4蛋白在子宮內膜樣腺癌組織中,腫瘤肌層浸潤越深,ING4的表達越低;低分化組較中高分化組的表達下降;Ⅲ-Ⅳ期較Ⅰ-Ⅱ期的表達下降,差異有統計學意義,而與淋巴結轉移情況無關。這些結果與ING4在乳腺癌和膀胱尿路上皮癌中研究結果一致,ING4在子宮內膜癌和不典型增生中的表達有不同程度的丟失,ING4的基因突變或表達異常甚至缺失可能參與了啟動子宮內膜癌的惡變過程。

關于ING4在子宮內膜癌中作用機制仍需進一步研究。進一步對ING4的相關信號傳導通路進行研究,有可能為子宮內膜癌的發病機制提供新的思路。ING4也有可能為子宮內膜癌早期診斷、早治療提供新的方向。