液相色譜-串聯質譜法測定臘肉制品中20種獸藥殘留量

◎ 仇志杰

（佛山市高明區農業技術服務推廣中心，廣東 高明 528500）

臘肉是指以鮮（凍）畜肉為主要原料，配以其他輔料，經腌制、烘干（或曬干、風干）、煙熏（或不煙熏）等工藝加工而成的非即食肉制品[1]。

臘肉的質量在很大程度上取決于原料鮮（凍）畜肉的質量。近年來，各地方對于病死牲畜的管理趨于規范，生鮮市場鮮有流入現象。各地對于病死牲畜的管理力度與當地財政收入的水平存在較大的關聯，部分欠發達地區并未建設無害化處理中心，對于病死牲畜的無害化處理補貼仍不理想，病死牲畜肉依然存在流入食品行業的可能，其中用于臘肉制作更是其中一個較大的可能。

為令病死畜肉的賣相更為鮮艷并防治進一步腐化，往病死畜肉添加氟喹諾酮類磺胺類藥物、氟喹諾酮類藥物、抗生素等具有殺菌效果的獸藥令臘肉制品依然存在不安全的食用因素。

依據《動物性食品中獸藥最高殘留限量》（農業部235號公告）[2]，肌肉中磺胺類總量限量為100 μg/kg，氟喹諾酮類藥物單種限量為100 μg/kg，氯霉素為不得檢出。目前，國家標準中已建立相對完善的檢驗檢測標準[3-6]，但并無一個檢測方法能同時涵蓋這3類藥物。本文著眼于實際工作需要，建立臘肉制品中20種獸藥殘留量的液相色譜-串聯質譜分析方法，達到滿足工作的需求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器

液相色譜-串聯質譜儀TSQ ENDURA（美國Thermo）、冷凍臺式離心機ALLegraX-15R（美國Beckman）、渦旋混勻儀MS1（德國IKA）、電子天平AL204（瑞士Mettler Toledo）。

1.1.2 主要試劑

乙腈、甲酸、甲醇（質譜純，德國Merck），乙酸銨（色譜純，德國Merck），無水硫酸鈉（分析純，天當科密歐），DSPE凈化管（美國Agilent），0.2 μm濾膜（英國Whatman），超純水（美國Millipore AD10超純水系統制備），20種獸藥標準物質（德國Dr.Ehrenstorfer）。

1.2 方法

1.2.1 標準儲備液和標準使用液的配制

分別稱取20種獸藥標準品（精確至0.01 mg），用甲醇溶解，容量瓶定容，配制成濃度為1 mg/mL的標準儲備溶液。標準儲備溶液于-18 ℃下避光保存，保存期為6個月。

分別吸取適量標準儲備溶液，置于容量瓶中，用甲醇稀釋成濃度為1.00 μg/mL的混合標準溶液。混合標準溶液于4 ℃下避光保存，保存期為1個月。

1.2.2 液相色譜條件

色譜柱：Poroshell 120，EC-C18柱（2.1×100 mm，2.7 μm）；柱溫40.0 ℃；進樣量：8 μL；流速：0.4 mL/min；流動相和梯度洗脫條件見表1。

表1 流動相及梯度洗脫參考條件表

1.2.3 質譜條件

電離方式：電子噴霧離子源（H-ESI），采用正負離子模式切換采集數據；電噴霧電壓：正離子模式3 500 V，負離子模式3 000 V；鞘氣：27 Arb；輔助氣：2 Arb；吹掃氣：0 Arb；離子傳輸管溫度：270 ℃；噴針溫度：300 ℃；掃描方式：SRM模式（即選擇反應監測模式，Selected Reaction Monitoring）。

1.2.4 樣品前處理方法

準確稱取勻漿狀樣品6.00 g于50 mL具塞塑料離心管中，加入6.0 mL乙酸銨緩沖液（pH=3.0），渦旋混合30 s，避光超聲提取10 min。再加入4 g無水硫酸鈉、0.1 mL甲酸、10.0 mL乙腈，渦旋混合2 min，以10 000 r/min離心5 min，吸取上清液于50 mL棕色梨形瓶中。往離心管中加入10.0 mL乙腈，重復提取1次，合并提取液于50 mL棕色梨形瓶中。

提取液于40 ℃旋轉蒸發至小于5 mL，轉移并定容至5 mL，加入到DSPE凈化管中，用1 mL乙腈潤洗容量瓶，同時轉移至DSPE凈化管中，渦旋混合1 min，5 000 r/min離心5 min，吸收上清液1 mL，60 ℃氮氣吹至近干，用1 mL流動相（0.2%甲酸+79.8%水+20%乙腈）溶解，經0.2 μm濾膜過濾，供高效液相色譜三重串聯四級桿質譜測定。

1.2.5 方法有效性考察

1.2.5.1 線性關系考察

采用空白基質提取液配制標準曲線定量，配制成10、20、50、100 μg/L和200 μg/L共5個濃度點，以進樣濃度X(μg/L)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，計算線性回歸方程。

1.2.5.2 靈敏度的考察

將加標濃度為30 μg/L的20種混合標準溶液進行測定，以色譜圖中3倍信噪比（S/N=3）為方法檢出限（LOD），以10倍信噪比（S/N=10）為方法定量限（LOQ）。

對每種化合物分別采用正、負離子模式進行優化后，20種化合物經優化后的質譜參數見表2。

1.2.5.3 精密度與加標回收率的考察

在空白基質中以50、100、150 μg/L 3個不同濃度點添加20種混合標準溶液，冷凍存放24 h，解凍后按

1.2.4 的方法進行加標回收實驗，按1.2.2和1.2.3的儀器方法進行儀器分析，每個水平重復進樣6次。

2 結果與分析

2.1 SRM模式優化結果

表2 20種獸藥的保留時間、質量分析參數表

上接表2

2.2 方法有效性考察

2.2.1 線性關系考察

按1.2.5.1方法操作，計算線性回歸方程，結果表明，20種獸藥組分在10～200 μg/L范圍內有良好的線性關系，其相關系數均大于0.995。

2.2.2 靈敏度的考察

按1.2.5.2方法操作，結果表明，20種獸藥組分的定量限（LOQ）在0.08～2.15 μg/kg范圍內，每種化合物具體的定量限見表3。

表3 20種獸藥的定量限、平均回收率、精密度表（n=6）

2.2.3 精密度與加標回收率的考察

經添加回收實驗，20種獸藥組分中3個加標濃度點的加標回收率為71.5%～92.3%，相對標準偏差（RSD）為3.5%～11.3%，具體見表3。

從表3可看出，本實驗分析方法的準確度、精密度、靈敏度均滿足國內外對多獸藥殘留分析測定的要求。

3 結論

本實驗利用高效液相色譜-質譜聯用儀測定臘肉制品中的20種獸藥殘留，通過酸性條件下避光提取及使用DSPE凈化管進行凈化，采用選擇反應監測（SRM）方式進行數據采集，建立了同時檢測20種獸藥組分殘留的方法，做到了一次提取同時檢測磺胺類、氟喹諾酮類、抗生素類藥物殘留，從而提高了檢測效率與準確度，滿足實際工作分析測定的需求。