食品中副溶血性弧菌檢測能力驗證分析

◎ 楊穗珊，謝作蓉，林寶英

（海南省食品檢驗檢測中心，海南 海口 570311）

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性桿菌，是一種嗜鹽性細菌。含有該菌的食物可導致食物中毒，常見于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品及鹽漬食品中，自1951年藤野等報告該菌以來，許多國家相繼有病例報道，至今已成為許多沿海國家重要食物中毒重要病原菌之一，在中國位居食源性疾患的前3位[1]。

能力驗證是證明實驗室能力的一種有效技術手段，是對實驗室技術能力和管理狀況的客觀的考核方法，是實驗室內部質量控制的有效補充方式。通過參加能力驗證，對實驗室質量控制情況和實驗人員水平技能進行考核和判定，能最有效地消除偏差，提高檢驗人員檢測水平，保證檢測數據達到檢驗質量標準[2]。海南省食品檢驗檢測中心實驗室于2018年5月參加了FAPAS組織的盲樣編號為M230d21的副溶血性弧菌能力驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

FAPAS發來的2個魚肉盲樣，編號分別為M230d21A和M230d21B。

1.2 主要培養基和試劑

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3%氯化鈉堿性蛋白胨水、TCBS、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂、氧化酶試紙、副溶血性弧菌生化鑒定盒，采購自環凱微生物科技有限公司。弧菌顯色培養基，采購于上海欣中生物公司。副溶血性弧菌核酸檢測試劑盒、細菌基因組DNA快速提取試劑盒，購自廣州迪澳生物科技有限公司。GN細菌鑒定卡，采購于生物梅里埃。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品來源

依據FAPAS作業指導書要求，在每個盲樣中加入20 mL 3% NaCl堿性蛋白胨水作為25 g待測原樣。

1.3.2 副溶血性弧菌檢驗

按照國家標準GB 4789.7-2013《食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》[3]對兩個樣品進行檢測。取GB 4789.7-2013步驟中3%氯化鈉堿性蛋白胨水，（36±1）℃培養8～18 h后的培養物進行副溶血性弧菌環介導等溫擴增實驗。

2 結果與分析

樣品在經過增菌培養后轉種于TCBS培養基和弧菌顯色培養基，M230d21A不生長。M230d21B在弧菌顯色培養基上有淡紫色典型可疑菌落生長，TCBS培養基上呈現圓形表面光滑的綠色菌落，分別挑取3個可疑菌落進行純化，并對純化后的可疑菌落進行革蘭氏染色，染色結果顯色為革蘭氏陰性，無芽孢。

2.1 初步鑒定結果

氧化酶試驗結果顯示為陽性。3%氯化鈉三糖鐵瓊脂穿刺反應顯示底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變，有動力。

2.2 確定鑒定結果

用梅里埃全自動微生物生化鑒定儀VITEK2鑒定出的結果為副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Probability:99%）。用副溶血性弧菌生化試劑盒鑒定的結果見表1，鑒定結果為副溶血性弧菌。

表1 樣品M230d21B副溶血性弧菌干制生化試劑盒鑒定結果表

2個樣品增菌物的環介導等溫擴增的結果見圖1，M230d21A號樣品未檢出副溶血性弧菌，M230d21B號樣品增菌物檢出副溶血性弧菌。

圖1 副溶血性弧菌環介導等溫擴增結果圖

3 討論

本次能力驗證采用了常規國家標準方法和環介導等溫擴增的快速檢測方法，兩種方法檢出的結果一致，國家標準方法時間較長操作較為繁瑣，人為影響因素也較大，生化鑒定易出現假陰性的結果[4]。環介導等溫擴增法較為靈敏，時間短，節省人力，可考慮作為大型會議保障的快速篩查的檢測手段。海南島是國際旅游勝地，大型會議較多，海產品豐富，副溶血性弧菌作為一種海洋食源性致病菌，近年來已成為我國沿海地區的首要食源性致病菌。通過參加此次FAPAS的能力驗證，不但提高了實驗室市場競爭力，更進一步加強了實驗人員對副溶血性弧菌的檢驗技能，促進實驗室檢驗能力的不斷提升，同時也是對實驗室內部質量控制程序的一種補充。