日本鰻鱺γ-干擾素誘導的溶酶體巰基還原酶(GILT)基因的克隆鑒定與表達分析

陳 姍，張芳芳，黃 貝，黃文樹，3*

(1.集美大學水產(chǎn)學院，2.鰻鱺現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術教育部工程研究中心(集美大學)，3.福建省海洋生物資源開發(fā)利用協(xié)同創(chuàng)新中心，福建 廈門 361021)

γ-干擾素誘導的溶酶體巰基還原酶(interferon-γ-inducible lysosomal thiol reductase，GILT)最初在人的單核細胞系U937中被發(fā)現(xiàn)[1]，它首先被合成為一個35 ku的蛋白前體，然后通過甘露糖-6-磷酸受體(mannose 6-phosphate receptor)運輸?shù)桨掏分衃2-4]，被溶酶體中的蛋白酶將其N端和C端前肽切除，形成一個30 ku的成熟肽[5-6].GILT的前體和成熟肽都具有還原二硫鍵的作用，且在pH 4.5～5.5的酸性條件下可發(fā)揮最佳效果[2-3，7].脊椎動物GILT蛋白的典型特征包括1個CQHGX2ECX2NX4C特征序列、1個CXXC活化位點、1個以上天冬氨酸殘基連接的糖基化位點(Asn-linked glycosylation site)和10～11個保守的半胱氨酸殘基[8-10].

GILT在大多數(shù)的抗原遞呈細胞(如單核/巨噬細胞、B細胞、骨髓樹突狀細胞)中呈組成型表達，而在其他細胞(如成纖維細胞、表皮細胞、角化細胞)中可被γ-干擾素誘導[1-3，8，10].除了與抗原遞呈有關，GILT也與負調(diào)控T細胞活化、中和胞外病原和清除細菌感染所造成的細胞碎片有關[11-12].此外，還有研究發(fā)現(xiàn)除了γ-干擾素，在PMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)和脂多糖(LPS)的誘導作用下可促使THP-1細胞分泌促炎癥細胞因子和趨化因子，其中包括GILT[12-13].

目前GILT基因在無脊椎動物和脊椎動物中均有報道.有研究顯示，在魚類中GILT基因主要在脾臟和腎臟中表達量最高，且經(jīng)LPS或細菌刺激后其mRNA表達水平上調(diào)，這表明GILT可能在對細菌感染后宿主的免疫應答中有重要作用[14-15].日本鰻鱺(Anguillajaponica)是世界性的經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類，但在其養(yǎng)殖過程中，細菌、寄生蟲、真菌和病毒性疾病的發(fā)生會給鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的損失[16].GILT是與免疫相關的基因，但鰻鱺中對其特征和功能卻未有報道.本研究克隆了日本鰻鱺GILT基因(AjGILT)的基因組和啟動子序列，并通過生物信息學方法分析了其編碼蛋白的序列特征；在此基礎上，進一步研究了其在日本鰻鱺不同組織中的表達情況，以及LPS、聚肌胞苷酸(PolyI：C)刺激和遲緩愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)感染不同時間后在不同組織中的表達變化，以期為了解AjGILT的功能奠定基礎.

1 材料與方法

1.1 材 料

日本鰻鱺，體質(zhì)量為(200±53) g，來源于福建省廈門市集美大學水產(chǎn)養(yǎng)殖基地；遲緩愛德華菌為集美大學水產(chǎn)學院實驗室保存菌種.

1.2 AjGILT基因的cDNA序列克隆

用Trizol?RNA提取試劑提取總RNA，經(jīng)無RNase的DNaseⅠ處理后，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒GoScriptTMReverse Transcription System(Promega，美國)制備cDNA模板，用SMART RACE試劑盒(Clontech，美國)制備5′-和3′-cDNA末端快速克隆(RACE)模板.設計RACE PCR引物(表1)，分別擴增AjGILT-1和AjGILT-2的5′-和3′-端序列.PCR擴增條件為：第一輪94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min.第二輪94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，64 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，38個循環(huán)；72 ℃延伸10 min.用引物AjGILT-1fl-F、AjGILT-1fl-R和AjGILT-2fl-F、AjGILT-2fl-R(表1)進行PCR擴增，分別驗證AjGILT-1和AjGILT-2的開放閱讀框(open reading frame，ORF)序列.PCR擴增條件為：94 ℃預變性3 min；然后94 ℃變性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，38個循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min.擴增所得的PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%(質(zhì)量分數(shù))瓊脂糖凝膠電泳檢測，E.Z.N.A凝膠回收試劑盒(Omega，美國)回收目的條帶，然后連接到pMD19-T載體(TaKaRa，日本)上，并通過熱激轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(Escherichcoli)DH5α感受態(tài)細胞中，最后篩選陽性克隆并通過測序驗證.

1.3 AjGILT的基因組和啟動子序列克隆

取日本鰻鱺肌肉組織100 mg，經(jīng)酚/三氯甲烷/異戊醇法提取基因組DNA.以基因組DNA為模板，用引物AjGILT-1fl-F、AjGILT-1fl-R和AjGILT-2fl-F、AjGILT-2fl-R(表1)分別擴增AjGILT-1和AjGILT-2的基因組序列.PCR擴增條件為：94 ℃預變性1 min；98 ℃變性10 s，62 ℃退火10 min，30個循環(huán)；72 ℃延伸10 min.

以日本鰻鱺基因組DNA為模板，用引物AjGILT-1pF、AjGILT-1pR和AjGILT-2pF、AjGILT-2pR(表1)分別擴增AjGILT-1和AjGILT-2的啟動子序列.PCR擴增條件為：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，60/58 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，38個循環(huán)；72 ℃延伸10 min.

1.4 AjGILT基因的表達分析

樣品采集[17]：日本鰻鱺經(jīng)丁香酚及冰水麻醉后，斷尾取血于加有肝素鈉的離心管中，混勻，800g離心20 min，收集下層細胞，-80 ℃保存?zhèn)溆茫蝗缓蠼馄什杉闻K、脾臟、腸、皮膚、胃、頭腎、中腎、鰾和鰓等組織/器官，分別于液氮冷凍后-80 ℃保存.

誘導表達實驗：分別設置磷酸鹽緩沖液(PBS)對照組、LPS(Sigma，美國)刺激組(劑量為1 mg/100 g)、Poly I：C(Sigma，美國)刺激組(劑量為1 mg/100 g)、遲緩愛德華氏菌感染組(劑量為107cfu/100 g，cfu表示菌落形成單位)，腹腔注射.注射8，16，24和72 h后采樣，每組每個時間點各采集6尾.

實時熒光定量PCR(qRT-PCR)：根據(jù)已獲得的AjGILT-1和AjGILT-2的cDNA序列和基因組序列比對結果，設計跨內(nèi)含子區(qū)域的AjGILT-1和AjGILT-2擴增引物，分別為qAjGILT-1F、qAjGILT-1R和qAjGILT-2F、qAjGILT-2R(表1);同時以β-actin(GenBank：GU001950.1)為內(nèi)參基因，設計引物Actin178F2和Actin178R2(表1).以日本鰻鱺cDNA 為模板，PCR擴增AjGILT-1、AjGILT-2以及β-actin基因片段，回收目的片段進行連接、轉(zhuǎn)化和克隆鑒定后測序;再將測序正確的菌液擴大培養(yǎng)提取質(zhì)粒，測定質(zhì)粒濃度并以其為原液用滅菌水進行10倍稀釋，用LightCycler?480 SYBR Green試劑盒(Roche，德國)擴增，繪制標準曲線;然后在每塊96孔板中加入4～5個已知拷貝數(shù)的質(zhì)粒樣品，剩余孔加入未知樣品.PCR程序為：95 ℃ 10 min；95 ℃ 20 s，62 ℃ 20 s，72 ℃ 25 s，共40個循環(huán).AjGILT-1和AjGILT-2的采集點溫度分別為83和81 ℃.反應結束后計算未知樣品的拷貝數(shù).

表1 本研究中使用的引物

Tab.1 Primers used in this study

引物名稱序列 (5'→3')用途UPMCTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTRACENUPMACTCTGCGTTGATACCACTGCTTAjGILT-1F1GGTTCTGAAGCAGTGTATGGAGCAjGILT-1的3'-RACEAjGILT-1F2ATGTGACGGTTGGGCTGTACTATGAGAGAjGILT-1R1GCTACAGACCAGGGTGAAGAGAGATGACAjGILT-1的5'-RACEAjGILT-1R2TGGTCTCCCACTTCACAGAAGGAGCATAAjGILT-1fl-FTACGCAGTTGGGAGCTAAAjGILT-1序列驗證AjGILT-1fl-RGGATGCCATAGGAGACAGACAAjGILT-2F1ACGGAATGGTGTAGGACTCAAGAGATCGAjGILT-2的3'-RACEAjGILT-2F2CCAGCATGGAGAAGAGGAATGTTTGGGAjGILT-2R1GGCAGCAGGCTTGGGTCCCTTATACAAjGILT-2的5'-RACEAjGILT-2R2CACGTACTTGTGCGGCGGGTTCAAjGILT-2fl- FGAGCTAAGCAGTCTATAGCCAjGILT-2序列驗證AjGILT-2fl- RGTCAGTGATAGTGTTGGTGGATAjGILT-1pFAACCCTATCTAGTTCAAGAG啟動子序列擴增AjGILT-1pRGCATTCCATAGCTATTTCCAjGILT-2pFAGCAGGGTTGTGTTCATGACAjGILT-2pRGCATTCTCTGGCGATCTCqAjGILT-1FAACGCCGAGGAGACCGAGCqRT-PCRqAjGILT-1RCTCCGTGTGCTCCCCATTGATGqAjGILT-2FGGGTTGAGAAGTATTGCCTGGAqAjGILT-2RGAGGACACACGCCTCGATCATAActin178F2TCACCACCACAGCCGAAAGGActin178R2CGCAGGATTCCATTCCCAGGA

1.5 序列分析和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

在NCBI網(wǎng)站(http：∥blast.ncbi.nlm.nih.gov/)進行序列比對分析；用ExPASy工具(http：∥web.expasy.org/)翻譯氨基酸序列和分析蛋白質(zhì)功能域；用SignalP 4.1 Server (http：∥www.cbs.dtu.dk/services/SignalP)分析信號肽序列；用NetNGlyc 1.0 Server (http：∥www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc)分析糖基化位點；用NNPP工具 (http：∥www.fruitfly.org/seq/tools/promoter.html)預測基因調(diào)控區(qū)域；用Promoter 2.0 (http：∥www.cbs.dtu.dk/services/Promoter/)預測轉(zhuǎn)錄起始位點；用調(diào)控元件結合位點分析網(wǎng)站 (http：∥www.gene-regulation.com/pub/programs/alibaba2/index.html)分析基因啟動子序列中潛在的轉(zhuǎn)錄因子結合位點；用ClustalW 1.83和MEGA 5.0軟件比較氨基酸序列同源性和構建系統(tǒng)進化樹.數(shù)據(jù)用Excel 2010進行計算，用單因素方差分析法(one-way ANOVA)進行統(tǒng)計分析，并用Dunnettt-檢驗(雙尾)進行多重比較.所有數(shù)據(jù)均用平均值±標準差的方式表示，p<0.05表示差異顯著，p<0.01表示差異極顯著.用GraphPad Prism v5.0軟件作圖.

虛線表示預測的信號肽序列，橢圓框表示活性位點CXXC，陰影表示保守的半胱氨酸殘基，方框表示糖基化位點，單下劃線表示特征序列CQHGX2ECX2NX4C，雙下劃線表示終止信號(AATAAA).圖1 AjGILT-1(a)和AjGILT-2(b)的cDNA及預測的氨基酸序列Fig.1 cDNA and predicted amino acid sequences of AjGILT-1(a) and AjGILT-2(b)

2 結果與分析

2.1 AjGILT基因的鑒定及特征分析

如圖1所示：AjGILT-1和AjGILT-2的cDNA序列全長分別為840 bp和1 110 bp，編碼蛋白分別含260和255個氨基酸殘基，預測其分子質(zhì)量大小分別為29.11和28.15 ku，等電點分別為5.56和6.31.其中AjGILT-2含有保守的終止信號(AATAAA)和polyA序列.氨基酸序列分析結果顯示AjGILT-1和AjGILT-2均含有特征序列CQHGX2ECX2NX4C，分別位于124～139位和117～132位氨基酸殘基；活性位點CXXC，分別位于79～82和72～75位氨基酸殘基；2個糖基化位點，分別為N58、N68和N51、N135；11個保守的半胱氨酸殘基，預測可形成5個二硫鍵；N端分別含有21和22個氨基酸殘基組成的信號肽.

克隆獲得AjGILT-1和AjGILT-2的基因組序列全長分別為4 657 bp和4 452 bp.與AjGILT-1和AjGILT-2的cDNA序列進行比對，發(fā)現(xiàn)AjGILT-1和AjGILT-2基因組序列均含有7個外顯子和6個內(nèi)含子(圖2),與其他脊椎動物(人、鼠、斑馬魚、大黃魚等)的GILT基因結構[18]相似.

線條表示內(nèi)含子，方框表示外顯子，數(shù)字表示各外顯子起止堿基的位置.圖2 AjGILT-1(a)和AjGILT-2(b)的基因組序列結構Fig.2 The genomic sequence structures of AjGILT-1(a) and AjGILT-2(b)

2.2 AjGILT氨基酸序列比對和系統(tǒng)進化樹分析

將AjGILT-1和AjGILT-2與其他物種GILTs的氨基酸序列進行多重比對，結果表明它們在蛋白特征結構上高度保守(附錄圖S1，http：∥jxmu. xmu.edu.cn/upload/html/20180408.html).AjGILT-1與所比對的其他物種GILTs的氨基酸序列相似性為31%～63%，其中與大西洋鮭(Salmosalar)的相似性最高;而AjGILT-2與所比對的其他物種GILTs的氨基酸序列相似性為29%～62%，其中與虹鱒(Oncorhynchusmykiss)的相似性最高.系統(tǒng)進化樹分析顯示：所選的GILT家族蛋白被分為脊椎動物和無脊椎動物兩大類，且在進化過程中來源于一個共同的祖先；其中AjGILT-1與AjGILT-2聚為一支，兩者又與大西洋鮭和虹鱒的GILTs聚為一支，表明親緣關系較近(圖3).

2.3 AjGILT啟動子序列分析

AjGILT-1與AjGILT-2啟動子分析結果表明兩者均存在多個轉(zhuǎn)錄因子結合位點，包括γ-干擾素活化序列(γ-interferon activation site，GAS)、特化蛋白1(specificity protein 1，Sp1)、轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強子結合蛋白(CCAAT enhancer binding protein，C/EBP)等.不同的是AjGILT-1啟動子區(qū)存在多個核因子-1(nuclear factor-1，NF-1)、激活蛋白-1(activator protein-1，AP-1)結合位點及干擾素刺激反應元件(interferon stimulation reaction element，ISRE)，而在AjGILT-2啟動子區(qū)未發(fā)現(xiàn)(圖4).

2.4 AjGILT基因在不同組織/器官中的表達

利用qRT-PCR檢測AjGILT-1和AjGILT-2在健康日本鰻鱺的肝臟、脾臟、胃、血液、頭腎、中腎、鰓、腸、心臟、尾鰭、性腺、鰾、肌肉和皮膚共14個組織/器官中的表達情況，結果顯示(圖5)：AjGILT-1和AjGILT-2在所檢測的組織/器官中均有表達；AjGILT-1在鰓和腸中表達量最高，其次為頭腎、中腎、鰾、皮膚、血液、性腺及肌肉，在肝臟、尾鰭和胃中的表達量極低；而AjGILT-2在性腺、頭腎和脾臟中表達量最高，其次為鰓、中腎、肌肉和心臟，在尾鰭和胃中表達量最低；此外，在性腺、脾臟、鰓、中腎、肝臟和胃中AjGILT-2的表達量都顯著高于AjGILT-1.

2.5 LPS、PolyI：C刺激及E.tarda感染后AjGILT基因的表達變化

通過qRT-PCR檢測LPS、PolyI：C刺激以及E.tarda感染8，16，24和72 h后，AjGILT-1和AjGILT-2在日本鰻鱺的鰓、頭腎和中腎中的表達情況，結果如圖6所示.

AjGILT-1和AjGILT-2用▲標記，物種名后為各GILT對應的GenBank登錄號.圖3 采用鄰接法構建的AjGILT-1、AjGILT-2與其他物種GILTs的系統(tǒng)進化樹Fig.3 Phylogenetic tree of AjGILT-1，AjGILT-2 and other GILTs using neighbor joining method

圖4 AjGILT-1(a)和AjGILT-2(b)的啟動子序列分析Fig.4 Analysis of promoter sequences of AjGILT-1(a) and AjGILT-2(b)

同一組織/器官中兩基因比較，*p< 0.05，**p<0.01(下同).圖5 AjGILT-1和AjGILT-2在日本鰻鱺不同組織/器官中的表達譜Fig.5 Expression profile of AjGILT-1 and AjGILT-2 in different tissues/organs of A. japonica

在LPS刺激后，鰓中AjGILT-1的表達量在刺激8 h后有一定程度上調(diào)，之后恢復，但均無顯著性差異；AjGILT-2的表達量在刺激24 h后有一定程度上調(diào)，但在72 h后又顯著下調(diào).頭腎中AjGILT-1和AjGILT-2的表達量在刺激8 h后均顯著下調(diào)，之后維持在較低水平.中腎中AjGILT-1的表達量在刺激8 h后顯著下調(diào)，之后逐漸恢復；而AjGILT-2的表達量在刺激8 h后無顯著變化，但在16 h后顯著下調(diào)，之后維持在較低水平.

在PolyI：C刺激后，鰓中AjGILT-1的表達量僅在刺激24 h后顯著下調(diào)，而AjGILT-2的表達量僅在刺激16 h后顯著上調(diào).頭腎中AjGILT-1的表達量在刺激24 h后顯著下調(diào)，但在72 h后又有一定程度上調(diào)；而AjGILT-2表達量在刺激16 h后有一定程度上調(diào)，但在72 h后顯著下調(diào).中腎中AjGILT-1和AjGILT-2的表達量均在刺激24 h后顯著下調(diào)，之后恢復.

在E.tarda感染后，鰓中AjGILT-1的表達量在感染8 h后有一定程度下調(diào)，16 h后有一定程度上調(diào)，之后恢復，但均無顯著性差異；而AjGILT-2的表達量僅在感染16 h后顯著上調(diào).頭腎中AjGILT-1的表達量在感染24 h后顯著下調(diào)，之后維持在較低水平；而AjGILT-2的表達量在感染16 h后有一定程度上調(diào)，但在72 h后又顯著下調(diào).中腎中AjGILT-1的表達量在感染16 h后顯著下調(diào)，AjGILT-2的表達量在感染24 h后顯著下調(diào)，之后均維持在較低水平.

3 討論與結論

本研究在日本鰻鱺中克隆獲得AjGILT-1和AjGILT-2基因，cDNA序列全長分別為840 bp 和1 110 bp，編碼蛋白均含有GILT家族的特征序列CQHGX2ECX2NX4C、活性位點CXXC、2個糖基化位點及11個保守的半胱氨酸殘基.其中活性位點CXXC是使巰基還原酶有活性和維持GILT結構和功能所必需的，且CXXC中任何一個半胱氨酸殘基的突變均可使GILT的巰基還原酶失活[2].AjGILT的2個N-連接糖基化位點可能由甘露糖-6-磷酸衍生而來，其在酸性條件下對GILT前體轉(zhuǎn)運到溶酶體中是必需的[19].此外，保守的半胱氨酸殘基可形成二硫鍵，Collins等[6]提出在含有高濃度半胱氨酸的條件下，可最大程度催化溶酶體中二硫化物的還原.因此，AjGILT的功能可能涉及高濃度半胱氨酸的二硫鍵還原，進而在調(diào)節(jié)抗原遞呈和表位選擇中發(fā)揮作用[5].

γ-干擾素發(fā)揮作用是在JAK-STAT信號通路中形成STAT1磷酸化同源二聚體，然后進入細胞核并通過結合目的基因啟動子區(qū)的GAS來激活目的基因的轉(zhuǎn)錄[9].目前研究表明人類黑素瘤中γ-干擾素誘導的GILT基因表達取決于STAT1的活化，活化的STAT1通過結合GILT啟動子中的GAS進而調(diào)節(jié)GILT基因表達[20].在斑節(jié)對蝦GILT基因的研究中，發(fā)現(xiàn)其通過JAK-STAT信號通路參與調(diào)節(jié)病毒感染后的一部分免疫應答[21].本研究結果顯示AjGILT-1和AjGILT-2啟動子區(qū)均含有GAS，因此推測AjGILT-1和AjGILT-2在病毒感染后的免疫應答中也可能通過JAK-STAT信號通路發(fā)揮作用.

圖6 LPS、PolyI：C刺激及E.tarda感染后鰓、頭腎和中腎中AjGILT-1(a)和AjGILT-2(b)的表達變化Fig.6 The expression changes of AjGILT-1(a) and AjGILT-2(b) after LPS，PolyI：C stimulation and E. tarda infection in gill，head kidney and middle kidney

目前在大黃魚[9]、斜帶石斑魚[22]、斑馬魚[23]、加州鱸[14]、暗紋東方鲀[18]、虹鱒[24]、金魚[15]、鱖魚[25]中檢測GILT基因的組織表達，結果顯示其均在脾臟和腎臟中表達最高；在文昌魚中，GILT基因在消化系統(tǒng)中表達最高[10].在皺紋盤鮑中，GILT基因在鰓、外殼膜和消化道組織中呈組成型表達[19].在合浦珠母貝中，GILT基因在鰓和消化腺中表達最高[26].本研究中AjGILT-1和AjGILT-2在檢測的14個組織中均有表達，AjGILT-1在鰓和腸中表達量最高，而AjGILT-2在性腺、頭腎和脾臟中表達量最高.這表明GILT基因在不同物種中的組織表達水平上存在差異.

本研究結果顯示：LPS刺激后，鰓中AjGILT-1的表達量無顯著變化，而AjGILT-2在刺激72 h后顯著下調(diào)；頭腎和中腎中AjGILT-1和AjGILT-2的表達量均顯著下調(diào).PolyI：C刺激后，鰓中AjGILT-1和AjGILT-2表達量在刺激16 h后有一定程度上調(diào)；頭腎中AjGILT-1的表達量在刺激24 h后顯著下調(diào)，AjGILT-2的表達量在刺激72 h后顯著下調(diào)；中腎中AjGILT-1和AjGILT-2的表達量均在刺激24 h后顯著下調(diào).E.tarda感染后，鰓中AjGILT-1和AjGILT-2的表達量在16 h后上調(diào)；頭腎中AjGILT-1的表達量在24 h后顯著下調(diào)，AjGILT-2的表達量在72 h后顯著下調(diào)；中腎中AjGILT-1的表達量在16 h后顯著下調(diào)，AjGILT-2的表達量在24 h后顯著下調(diào).從結果來看，整體上AjGILT-1和AjGILT-2在鰓中表達僅有少數(shù)變化，而在頭腎和中腎中整體表達變化更明顯.這可能是因為腎臟是先天性和適應性免疫的主要反應位點，也是淋巴細胞和巨噬細胞存在的主要組織，活化的淋巴細胞和直接刺激的巨噬細胞可誘導γ-干擾素，從而引起GILT基因表達的上調(diào)；而鰓是非淋巴組織，雖然巨噬細胞在鰓中也可以被γ-干擾素刺激，但GILT表達在鰓中變化不明顯，暗示巨噬細胞在非淋巴組織中可能是參與先天性免疫而非適應性免疫[9].

綜上，本研究克隆了AjGILT-1和AjGILT-2兩個基因及其啟動子序列，對其進行了序列和結構分析.qRT-PCR結果表明AjGILT-1在鰓和腸中表達量最高，而AjGILT-2在性腺、頭腎和脾臟中表達量最高.此外，AjGILT-1和AjGILT-2在病毒和細菌感染后的免疫應答中可能有重要作用，這為日本鰻鱺的病害防治提供了一定的理論基礎.