宮內慢性缺氧對子代大鼠心肌內皮素—1和去甲腎上腺素表達的影響

徐潔歡 李耀軍 夏小艷

摘要 目的：探討產前宮內慢性缺氧對予代大鼠心肌內皮素-1、去甲腎上腺素表達的影響。方法：將30只SD懷孕大鼠隨機分為早孕期缺氧組、中孕期缺氧組、晚孕期缺氧組、整個孕期缺氧組和對照組，各6只。檢測子代大鼠心肌ET-1、NE的表達。結果：與對照組比較，缺氧組3個月齡和6個月齡子鼠ET-1表達均升高（P<0.01），缺氧組6個月齡子鼠NE表達升高（P<0.01）。結論：產前宮內慢性缺氧可引起子代大鼠心肌ET-1、NE表達升高，其中妊娠早中期缺氧雄性子鼠受的影響最大。

關鍵詞 宮內缺氧；內皮素-1；去甲腎上腺素；心?。蝗焉?；大鼠

足夠的氧供是胎兒正常生長發育及耐受分娩的必要條件，涉及母體、胎盤和胎兒自身，任何環節出現障礙，均可導致胎兒宮內缺氧[1，2]。本課題主要研究宮內慢性缺氧對子代大鼠心肌內皮素-l和去甲腎上腺素表達的影響，通過免疫組化加HE染色方法檢測子代大鼠心肌內皮素一l、去甲腎上腺素的表達，探討產前慢性缺氧是否影響子代大鼠成年期慢性高血壓、冠心病等疾病的發生。

資料與方法

實驗動物：SPF級SD雄性大鼠30只（4個月齡大鼠，體重330一450g），雌性SD大鼠30只（2個月齡大鼠，體重200一280g），無交配史，大鼠飼養于屏障獨立通風籠盒（IVC）動物房中。

雄、雌大鼠自由交配，托盤陰栓檢查法確定妊娠[3]，發現陰栓當天為孕Od。SD大鼠孕鼠隨機均分為4個宮內慢性缺氧組（I組）和正常對照組（D組）。其中各缺氧組分別于孕1～ 21 d，l～7 d，8～14 d，15～21d缺氧（I1、I2、I3、I4組），出生子代大鼠分別于1個月齡、3個月齡、6個月齡每組隨機各取雌、雄子鼠5只作為研究對象（雌鼠為H。、雄鼠為H，）。

方法：30只雌性SD大鼠（260g）與30只雄性SD大鼠（430g）隨機交配，見陰栓記為孕0 d；然后于缺氧組進行不同孕期缺氧（缺氧濃度10%土2%，根據孕期每天定點缺氧5 h），參考應紅安等建立的慢性宮內缺氧模型建立本研究大鼠缺氧模型。對照組放入缺氧箱，但不予缺氧。每組出生子代大鼠分別于1個月齡、3個月齡、6個月齡每組隨機各取雌、雄子鼠5只，用免疫組化加HE染色方法檢測子代大鼠心肌內皮素-1（ET-1）、去甲腎上腺素（NE）表達。 觀察指標：取子代大鼠心肌組織石蠟包埋連續切片4張，采用放射免疫法和HE染色法，ET-1試劑盒由美國Proteintech公司提供，NE試劑盒由英國Abcam公司提供，分別按ET-1試劑盒及NE試劑盒說明書進行操作；ET-1、NE各免疫組化染色l張，用PBS代替一抗的空白對照l張，另一張行HE染色。 統計學方法：使用SPSS 18.0統計軟件進行分析。計量資料以（-±s）表示，采用t檢驗及方差分析進行比較，P< 0.05為差異有統計學意義。結果

不同時間缺氧組與對照組1個月齡子代大鼠的心肌ET-1免疫組化加HE染色表達差異無統計學意義（P>0.05）；不同時間缺氧組3個月齡、6個月齡子代大鼠（除妊娠晚期缺氧組）心肌ET-1免疫組化加HE染色表達明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.01），且雄鼠高于雌鼠，妊娠早期和中期缺氧升高最為顯著。

不同時間缺氧組1個月齡、3個月齡子代大鼠的心肌NE免疫組化加HE染色表達與對照組差異無統計學意義（P>0.05）；不同時間缺氧組與對照組6個月齡子代大鼠心肌ET-1免疫組化加HE染色表達明顯高于對照組，差異有統計學意義fP<0.01）。

討論

ET-1有豐富的生物學活性，包括強效的調節血管收縮、參與血管重塑、血管生成和細胞外基質合成，在心血管系統組織中含量尤為豐富，在生理和病理過程中發揮著重要作用。去甲腎上腺素預處理對缺血再灌注心肌具有保護作用，其機理是微量的去甲腎上腺素誘導機體內源性保護物質產生或使保護機制加強。

本課題通過免疫組化加HE染色檢測ET-1、NE的表達。結果顯示，與對照組比較，缺氧組3個月齡和6個月齡子鼠ET-1表達均升高，差異有統計學意義（P<0.Ol），以早孕期缺氧組和中孕期缺氧組的雄性子代升高最為顯著。與對照組比較，缺氧組6個月齡子鼠NE表達升高，差異有統計學意義（P<0.Ol），以中孕期缺氧組的雄性子代升高最為顯著。因此，產前宮內慢性缺氧可引起子代大鼠心肌ET-1、NE表達升高，與子代成年后易患高血壓、冠心病等心臟疾病有一定關聯。

參考文獻

[1]徐潔歡，李耀軍，葉楓，等，產前慢性缺氧對子代大鼠各器官組織影響的研究進展[J].中國衛生產業，2017，14（19）：189-190.

[2]李彥清，邵龍江，李森.大鼠陰栓的實驗觀察和孕鼠模型鑒定方法的比較[J].中國比較醫學雜志，2002，12（1）：17-20.

[3]應紅安，洪衛文，童鴻，等.產前慢性缺氧對子代大鼠血壓的影響[J].嶺南心血管病雜志，2012，18（3）：298-302.