免疫球蛋白對嬰兒痙攣癥患兒免疫指標影響及臨床療效分析

周小琳 李棟方 李平甘 何展文 羅向陽

中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院小兒神經(jīng)內(nèi)分泌專科，廣東廣州 510120

嬰兒痙攣癥又稱West綜合征，是一種復雜的癲癇綜合征。好發(fā)于4 ～ 7個月的嬰兒，發(fā)病率約為（2 ～ 5）/10000，男性多見。主要臨床特征為痙攣發(fā)作及腦電圖的高峰節(jié)律紊亂，常伴有精神運動發(fā)育遲緩[1-2]。嬰兒痙攣癥發(fā)病原因未明，一些已知的因素如新生兒窒息，腦膜腦炎，腦發(fā)育不全和先天性代謝疾病等可能會引起嬰兒痙攣癥[3]。隨著免疫學的深入研究，發(fā)現(xiàn)機體免疫功能紊亂可能參與嬰兒痙攣癥的發(fā)病過程。有學者使用免疫抑制劑如促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）治療嬰兒痙攣癥取得良好療效[4]，免疫調(diào)節(jié)治療可能為嬰兒痙攣癥臨床治療提供新的思路。本研究觀察嬰兒痙攣癥患兒外周血T、B淋巴細胞亞群的表達水平，探討大劑量靜脈注射免疫球蛋白對嬰兒痙攣癥患兒免疫功能的影響及臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例組30例患兒選自2015年1月～2017年10月于孫逸仙紀念醫(yī)院兒科確診的嬰兒痙攣初發(fā)病例，嚴格參照國際抗癲癇聯(lián)盟制定的診斷標準，腦電圖檢查結(jié)果及臨床特征均符合嬰兒痙攣癥的診斷標準。入院后經(jīng)詳細嚴格的相關檢查，排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染及其他系統(tǒng)疾病，未接受抗癲癇藥物及丙球等免疫治療。其中男16例，女14例，年齡1 ～ 18個月之間。健康對照組選自孫逸仙紀念醫(yī)院體檢中心健康體檢的30名兒童，近期無感染、自身免疫疾病及其他系統(tǒng)疾病，年齡、性別構(gòu)成比例與病例組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

病例組30例患兒治療前均經(jīng)家屬同意并簽署知情同意書。經(jīng)靜脈注射大劑量免疫球蛋白400mg/（kg·d）×5d，總量 2g/kg。

1.3 免疫指標檢測

病例組30例患兒于治療前及治療結(jié)束4周后，于清晨空腹用EDTA抗凝管抽靜脈血2mL，最好于6h內(nèi)處理血標本，制備成單細胞懸液后上機檢測CD19+、CD20+、CD4+、CD8+表達水平，CD4+/CD8+比例由CD4+、CD8+檢測值計算。健康對照組于病例組治療開始前抽血1次即可，采用FACSCalibur型流式細胞儀（美國BD公司）檢測淋巴細胞亞群。

1.4 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)處理采用SPSS21.0 軟件分析，所有計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前病例組、健康對照組外周血淋巴細胞亞群水平比較

病例組治療前與健康對照組患兒相比，CD19+B淋巴細胞、CD20+B淋巴細胞比例明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；病例組CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比例較健康對照組明顯升高，CD8+T淋巴細胞比例較健康對照組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組外周血淋巴細胞亞群水平比較（ ± s，%）

表1 兩組外周血淋巴細胞亞群水平比較（ ± s，%）

組別 n CD19+ CD20+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+病例組 30 31.89±9.35 31.90±8.76 29.00±3.41 28.50±3.35 1.03±0.15健康對照組 30 16.15±3.51 15.95±3.43 33.21±5.80 22.27±5.98 1.60±0.48 t 8.30 8.93 2.74 3.95 4.57 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 病例組治療前后外周血淋巴細胞亞群表達水平比較

大劑量丙種球蛋白治療后，病例組外周血CD19+B淋巴細胞、CD20+B淋巴細胞比例較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但治療前后病例組T淋巴細胞亞群指標CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 病例組治療前后外周血淋巴細胞亞群表達水平比較（ ± s，%）

表2 病例組治療前后外周血淋巴細胞亞群表達水平比較（ ± s，%）

組別 n CD19+ CD20+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+治療前 30 31.89±9.35 31.90±8.76 29.00±3.41 28.50±3.35 1.03±0.15治療后 30 21.50±4.59 21.07±4.06 29.39±3.68 28.51±3.47 1.04±0.14 t 4.89 5.55 0.99 0.08 0.82 P＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.3 大劑量免疫球蛋白治療嬰兒痙攣患兒的臨床療效

大劑量免疫球蛋白治療后，30例嬰兒痙攣患兒中有25例完全停止抽搐或者抽搐次數(shù)明顯減少，其中5例抽搐情況無明顯好轉(zhuǎn)，有效率達83%，用藥期間所有患兒均未出現(xiàn)不良反應。

3 討論

嬰兒痙攣癥是一種難治性的癲癇性腦病，傳統(tǒng)抗癲癇藥物治療效果欠佳，預后不良，多數(shù)患兒都有智力運動發(fā)育落后[5]。嬰兒痙攣癥發(fā)病機制雖未完全清楚，但相關免疫研究證明大腦免疫功能紊亂及炎癥反應損傷可能為發(fā)病因素之一，許多臨床和實驗數(shù)據(jù)強烈支持免疫機制在兒童癲癇發(fā)病中的重要作用[6-7]。國內(nèi)外學者都認為嬰兒痙攣癥患兒同時存在神經(jīng)功能與免疫狀態(tài)紊亂，兩者相互影響在癲癇發(fā)病過程起著重要作用[8]。外周血T淋巴細胞亞群反映人體細胞免疫功能，CD4+T細胞是一種輔助性T淋巴細胞，可以釋放多種細胞因子參與免疫反應，CD4+T細胞比例下降說明T免疫細胞功能受抑制導致機體致病[9]。CD8+T細胞是一種抑制性T淋巴細胞，在機體感染、損傷等情況下發(fā)揮特異性殺傷靶細胞的功能，CD8+T淋巴細胞若過度激活將導致免疫反應亢進，易造成機體損傷最終致病。本研究小組前期實驗發(fā)現(xiàn)，癲癇模型鼠或者臨床癲癇病人的外周血淋巴細胞亞群均有一定程度改變，免疫球蛋白可以通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)細胞因子或免疫指標減輕癲癇發(fā)作程度，免疫調(diào)節(jié)治療對癲癇有良好的臨床療效[10-11]。嬰兒痙攣癥作為一種難治性的癲癇性腦病，本研究發(fā)現(xiàn)其亦存在明顯的免疫功能異常。首先我們發(fā)現(xiàn)，嬰兒痙攣癥患兒外周血T淋巴細胞CD4+T細胞比例明顯降低，CD8+T細胞比例明顯升高，導致CD4+/CD8+比值降低，這與以往學者研究癲癇T淋巴細胞亞群改變的結(jié)果相符[12-14]，這說明T淋巴細胞免疫功能紊亂可能參與了嬰兒痙攣癥致病過程。另外，我們還發(fā)現(xiàn)嬰兒痙攣癥患兒同時存在B淋巴細胞免疫功能紊亂。在各種神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病中B淋巴細胞都起著重要作用，B淋巴細胞可以分泌調(diào)節(jié)性細胞因子，向T細胞呈遞抗原。CD19+B淋巴細胞是免疫球蛋白超家族成員之一，CD20+是B淋巴細胞特異性膜表面分化抗原，兩者在B淋巴細胞的增殖分化、活化過程起著重要的作用[15-16]。病例組嬰兒痙攣癥患兒治療前CD19+B淋巴細胞、CD20+B淋巴細胞比例明顯升高，明顯高于健康體檢兒童。由此可推測，嬰兒痙攣癥患兒同時存在T、B淋巴細胞免疫功能紊亂，細胞免疫功能異常可是嬰兒痙攣癥發(fā)生發(fā)展的一個重要因素。可見，在臨床上檢測外周血CD19+B、CD20+B及CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+等淋巴細胞亞群有一定臨床指導意義。

免疫球蛋白是一種免疫調(diào)節(jié)劑，有文獻報道靜脈注射免疫球蛋白治療癲癇有一定效果[17]，但免疫球蛋白通過什么機制發(fā)揮抑制癲癇抽搐發(fā)作尚未明了，臨床上采用免疫球蛋白治療癲癇的適應證也無規(guī)范統(tǒng)一的認識。本研究使用大劑量免疫球蛋白（2g/kg）治療嬰兒痙攣癥患者發(fā)現(xiàn)，其臨床有效率高達83%，且用藥期間所有患兒均未出現(xiàn)不良反應，說明耐受性良好。免疫球蛋白治療后，B淋巴細胞亞群CD19+B淋巴細胞、CD20+B淋巴細胞比例較治療前明顯降低，大劑量免疫球蛋白對B淋巴細胞亞群有良好的調(diào)節(jié)作用。但免疫球蛋白治療后，T淋巴細胞亞群指標CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+比例與治療前相比，差異并無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。免疫球蛋白治療嬰兒痙攣癥效果確切，有可能通過抑制體內(nèi)過度活化的免疫功能尤其是B淋巴細胞免疫，從而控制嬰兒痙攣癥發(fā)作。也有研究顯示免疫球蛋白有保護神經(jīng)、減低神經(jīng)元死亡率的作用[18]，所以對一些反復發(fā)作可能導致腦神經(jīng)損傷的難治性癲癇，若合并外周血淋巴細胞亞群免疫功能紊亂，可以考慮使用大劑量免疫球蛋白治療。

綜上所述，嬰兒痙攣癥患兒同時存在T、B淋巴細胞免疫功能紊亂，監(jiān)測外周血淋巴細胞亞群可方便觀察嬰兒痙攣癥患兒免疫功能狀態(tài)的變化。但淋巴細胞免疫功能狀態(tài)與嬰兒痙攣患兒病情變化之間存在怎樣的聯(lián)系及具體機制，仍需更深入的研究。免疫球蛋白應用于嬰兒痙攣癥患兒效果確切，副作用少，耐受性良好，不失為臨床治療的一個較好選擇。但免疫球蛋白屬于血制品，潛在一定的風險，且價格相對昂貴，大規(guī)模在臨床上應用還有一定困難。本研究為免疫球蛋白應用于嬰兒痙攣癥提供了一定的實驗室理論依據(jù)，對臨床用藥有一定指導作用。