6 868例新生兒疾病篩查濾紙片洗脫不全結(jié)果分析及原因探討

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(四川省婦幼保健院，四川 成都 610045)

新生兒疾病篩查是指對某些危害嚴重的先天性遺傳性代謝疾病采用快速、敏感、簡單的檢驗方法在新生兒期進行篩查，其目的是在臨床癥狀未表現(xiàn)之前，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，避免因患兒臟器發(fā)生不可逆的損害所導(dǎo)致的生長發(fā)育、智力發(fā)育障礙甚至死亡[1]。血片采集是新生兒遺傳代謝病篩查技術(shù)流程中首個重要環(huán)節(jié)，標本合格與否，直接影響實驗室檢測結(jié)果。洗脫不全在不合格標本中，占了極大的比重[2]。本文對四川省婦幼保健院2008 年至2016年6 868例洗脫不全的標本檢測結(jié)果進行分析，找出其與正常樣本檢測結(jié)果的差異、發(fā)生的原因，并提出解決對策，減少不合格標本發(fā)生率，確保篩查結(jié)果的準確性與可靠性。

1資料與方法

1.1資料來源

將2008年1月至2016年12月在四川省新篩中心篩查血片中6 868例未洗脫樣本，與2015年至2016年在四川省新生兒疾病篩查中心進行檢測的550 664例合格樣本的檢測結(jié)果進行分析。

1.2標本采集和遞送

按照《2010年衛(wèi)生部新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》的要求，于新生兒出生72h后，于其足跟的內(nèi)、外側(cè)采血，滴于903特殊濾紙片上，待血斑自然晾干裝入塑料封口袋中密封，置于2℃～8℃ 冰箱保存，每周快遞到四川省新生兒疾病篩查中心實驗室檢測。

1.3儀器和試劑

試劑使用廣州豐華有限公司提供的TSH檢測試劑盒；儀器由芬蘭WALLAC公司提供Vitor2-1420型多標記分析儀，匯松PW-960全自動洗板機，1296-003DELFLA振蕩器。

1.4實驗方法和質(zhì)控

實驗方法為時間分辨免疫熒光分析法(DELFIA)；每批試劑盒均帶有低、中兩個水平的質(zhì)控樣品，質(zhì)控結(jié)果均符合要求。每年參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心干血片TSH 室間質(zhì)量評價，成績合格。

1.5統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0軟件對檢測數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采取卡方檢驗進行統(tǒng)計推斷，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1檢測結(jié)果分析

6 868例洗脫不全樣本的檢測結(jié)果與550 664例正常樣本，頻數(shù)分布有統(tǒng)計學意義(χ2= 2 665.026，P<0.05)，其中0～1.9，2.0～3.9這兩個數(shù)據(jù)段尤為明顯，見表1；正常樣本的初篩陽性率為1.40%，洗脫不全樣本的初篩陽性率為0.32%，前者的初篩陽性率明顯高于后者，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=57.821，P<0.05)。

表1 6 868例洗脫不全和550 664例新生兒足跟濾紙干血片TSH測定值頻數(shù)分布情況(n)

注：本中心的陽性切值為8mIU/L。

2.2兩組數(shù)據(jù)的統(tǒng)計性指標分析

6 868例洗脫不全樣本檢測結(jié)果與550 664例正常洗脫樣本進行統(tǒng)計學分析，各項指標見表2，兩組數(shù)值除最小值，其他各指標均是正常洗脫樣本高于洗脫不全的樣本，這也充分證明了是否正常洗脫直接影響了測定結(jié)果。

2.3洗脫不全與季節(jié)的關(guān)系

隨著氣溫的逐漸升高，洗脫不全的血片個數(shù)逐漸增加，見表3，其中7、8月由于是酷暑季節(jié)，洗脫不全例數(shù)為全年最高，這兩個月的例數(shù)占了全年的39.6%。

2.4洗脫不全樣本的罕見情況

洗脫不全樣本的頻數(shù)分布中可見6 868例洗脫不全的樣本，其中有22例結(jié)果是陽性，見表1，這在洗脫不全的樣本中是極其少見的。按照實驗原理來講，洗脫不全的樣本，其檢測值應(yīng)該很低，因為需要測定的成分幾乎沒有萃取，這在表2的統(tǒng)計數(shù)據(jù)中也有充分顯示，但是這22例陽性病例的存在，說明了并不是所有洗脫不全的樣本，其檢測值都低于正常值。

表2 TSH水平的統(tǒng)計學指標(mIU/L)

Table 2 Statistical indicators of TSH concentration (mIU/L)

統(tǒng)計學指標洗脫不全樣本正常洗脫樣本均值1.252.32中位數(shù)11.8最大值26.2604最小值00P751.52.8P902.24.1P952.95.3P995.58.8

表3 6 868例洗脫不全血斑與季節(jié)的關(guān)系

3討論

3.1洗脫不全的定義

洗脫不全，是指在實驗過程中，加入試劑后，試劑不變色，血斑不脫色，試劑未將血液從濾紙片上洗脫下來(TSH測定過程中能夠肉眼識別)，從而導(dǎo)致實驗測定的結(jié)果不準確，無法出具可靠的實驗報告[3-4]。傳統(tǒng)的觀念認為，洗脫不全的樣本檢測結(jié)果的數(shù)值都很低，但是根據(jù)本文表1數(shù)據(jù)的分析，洗脫不全的樣本也有陽性結(jié)果，雖然所占比例不高，但仍然是有陽性結(jié)果的。本實驗室對陽性的22例病人，重新采集血片召回復(fù)查，篩查結(jié)果均為陰性；隨后分別在3個月、半年對這些患者進行電話隨訪，尚未發(fā)現(xiàn)一例確診甲低。但是究竟是什么原因?qū)е逻@些洗脫不全樣本，測定結(jié)果為假陽性，尚未找到可靠的依據(jù)。

3.2洗脫不全樣本和正常樣本測定結(jié)果的比較

從表1、表2的結(jié)果分析可見，洗脫不全的樣本測定值是明顯低于正常樣本的，99%的可信限值僅為5.5。陽性率也低于正常樣本，見表1(洗脫不全樣本的陽性率為0.32%，正常樣本的陽性率為1.40%)。因此，對于這部分病人，應(yīng)該當作可疑陽性病人去管理，及時通知采血單位，加強追蹤，力爭在最短時間內(nèi)召回，避免因為洗脫不全導(dǎo)致TSH結(jié)果的偏低而產(chǎn)生假陰性，從而導(dǎo)致漏診。

3.3洗脫不全樣本與季節(jié)的關(guān)系

從表3中可以看出，隨著氣溫的升高，洗脫不全的樣本逐漸增多，5至9月洗脫不全的樣本占整體的79.6%，其中7、8月尤為突出，10月至次年4月僅占20.4%，這表明洗脫不全的現(xiàn)象大多發(fā)生于高熱酷暑季節(jié)[5]。在高溫情況下，采血員仍將干燥的血片放在室溫保存，使血片水分被抽干或者過度干燥，造成血斑固化，成為夏季洗脫不全的主要原因；另外遞送過程過長，血片未置于低溫環(huán)境，且氣溫高于其他季節(jié)，也會導(dǎo)致血液無法從血片中洗脫下來。所以在高溫的季節(jié)，血片自然晾干后，應(yīng)立即放入密封的袋子中冷藏保管，血片盡早遞送，遞送過程中，血片最好能存放在低溫容器中[6]。如果沒有低溫容器，也建議采用快遞的方式，將血片盡快郵寄到新篩實驗室，切忌使用平郵，拖延遞送過程，導(dǎo)致洗脫不全。

3.4洗脫不全的其他因素

從表3中可以看出，在最冷的幾個季節(jié)，也仍然有洗脫不全的血片，這就說明，洗脫不全的原因不是僅僅和氣溫有關(guān)，還存在著其他因素[7]。本中心每年均安排了2～3次到采血機構(gòu)，對新生兒疾病篩查工作進行質(zhì)量檢查。通過現(xiàn)場檢查、詢問的方式，綜合目前了解的情況，分析洗脫不全的原因如下：①過度干燥(血斑固化)，涉及太陽暴曬、暖氣烘干、空調(diào)吹干；②蛋白質(zhì)變性失活，涉及紫外線、消毒物品、化學試劑、裝修或新家具揮發(fā)出的甲醛等[5]；③其他污染，如被血清、尿、消毒劑、膠水、漿糊或其他液體污染；④蚊蟲叮咬或有蟲卵污染血片；⑤空白濾紙片保存不當，也會引起洗脫不全的現(xiàn)象，所以空白濾紙片安放應(yīng)和血斑一樣重視，妥善保管，保存在干燥通風的地方，同時防止各種污染；⑥最近發(fā)現(xiàn)，有單位將被水弄濕的血片，干燥后又寄到本中心，這樣的血片當然是不合格的，同時實驗結(jié)果顯示，也確實洗脫不下。

3.5質(zhì)量控制

血片洗脫不全是實驗中常見的問題，由于它不同于普通的不合格血片，光看血片無法辨別，只有在實驗過程中才能被發(fā)現(xiàn)，試劑已用，成本已投入，得到的結(jié)果卻不可信，也沒辦法出報告，需重新召回新血片，重新做實驗。而且如果沒解決基本問題，會連續(xù)性的出現(xiàn)，幾倍的成本，可能都得不到一次可信的結(jié)果。所以這種情況一旦發(fā)生，我們應(yīng)該第一時間與采血單位聯(lián)系，詢問是否有導(dǎo)致洗脫不全的因素，如果有，應(yīng)告知其改進方式；如果暫時未發(fā)現(xiàn)任何問題，在告知其所有注意事項后，觀察下一批血片是否仍然有相同情況出現(xiàn)，如果仍有，馬上安排現(xiàn)場檢查的方式，直到找到問題的根源，解決這種現(xiàn)象為止。同時對采血單位，要再次強調(diào)，被任何液體弄濕了的血片，應(yīng)該當作不合格血片處理，要求召回重新采血；而不是等其自然晾干后，再寄往新篩中心，應(yīng)嚴格杜絕這種自欺欺人的現(xiàn)象出現(xiàn)。

新生兒疾病篩查是一個多環(huán)節(jié)的系統(tǒng)工程，血片采集為篩查的第一步，從事篩查工作的每個人員，都必須強化質(zhì)量意識，增加責任心，嚴格按照規(guī)范進行采血及標本保存遞送，加強各篩查環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，以促進新篩工作有序開展。