UPLC-Triple TOF MS∕MS技術分析打箭菊總黃酮部位的化學成分

澤仁達瓦林朝展

（1.西藏藏醫學院，西藏拉薩850000；2.廣州中醫藥大學臨床藥理研究所，廣東 廣州 510405）

藏藥“阿夏塞爾郡”又名打箭菊，為菊科匹菊屬植物川西小黃菊 Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling的干燥花序，主產于中國青海、四川、云南和西藏等地，是藏族常用藥，具有活血散瘀、祛風除濕、消炎止痛的功效，臨床上常用于治療頭痛、頭傷、跌撲損傷、濕熱、瘡瘍、傷口流黃水、黃水瘡、肝炎等［1-2］。打箭菊具有抗缺氧［3］、保肝［4］、抗炎鎮痛［5］等藥理活性，目前報道較多的成分主要是黃酮類化合物，建立打箭菊總黃酮部位化學成分的分析方法對于其質量檢測和控制具有重要的意義。

1 儀器與試劑

AB Sciex Triple TOF5600+（美國Sciex公司），Peak View數據處理系統。乙腈為色譜純（德國Merck公司），甲酸為色譜純（北京Dikma公司），實驗用水為超純水。打箭菊于2014年6月采自西藏林芝地區，并經西藏藏醫學院康薩·索朗其美教授鑒定為菊科匹菊屬川西小黃菊Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling，憑證標本（PT-201406）現保存于廣州中醫藥大學臨床藥理研究所。

2 方法與結果

2.1 樣品提取

取打箭菊藥材粗粉2.0 kg，依次加入20倍量和15倍量80%乙醇，加熱回流提取兩次，合并提取液，減壓回收至無醇味，濕法上樣于4.0kg大孔樹脂柱（內徑15cm，裝柱高35cm，柱體積約3L），水洗6個柱體積后用30%乙醇洗脫，洗脫至流出液澄清，收集30%乙醇洗脫液，回收溶劑，冷凍干燥備用，用紫外分光光度法［6］測定總黃酮純度為65.94%.

取30%乙醇洗脫部位適量，加甲醇溶解，配置成10μg∕mL的供試品溶液，待測。

2.2 色譜及質譜條件

色譜條件：phenomenex Luna 5μm C18（2）100A 150mm×2.0mm色譜柱；流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫程序：0-5 min，80%A 20%B；5-10 min，70%A 30%B；10-15 min，60%A 40%B；15-20 min，40%A 60%B；20-25 min，20%A 80%B；25-30 min，0%A 100%B 保持 5 min。流速 0.5 ml∕min；進樣量：5 μl，柱溫：25 ℃。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），負離子掃描模式；噴霧電壓為4500 V；干燥器溫度：500℃，干燥氣流速：5 L∕min；霧化氣壓力：45 psi；毛細管電壓：3500 V；碎裂電壓：100 V；一級碰撞能量：5 V，二級碰撞能量：45 V。質譜掃描范圍為m∕z 100-1000。

2.3 UPLC-Triple TOF MS∕MS分析

打箭菊總黃酮部位的UPLC-Triple TOF MS∕MS分析的總離子流色譜圖如圖1所示，18個主要的色譜峰得到較好的分離。由于打箭菊中主要的化學成分是黃酮類化合物，用負離子電噴霧做質譜檢測所得的總離子流圖有較好的信噪比，對應化合物的一級質譜圖都呈現出很強的準分子離子峰。根據一級質譜給出的準分子離子峰信息，和二級質譜的結構碎片信息，并結合UPLC的保留時間以及參考文獻報道，共推測出了13個化學成分的可能結構，這些成分在打箭菊及菊科植物化學成分分析中都曾有報道［7-12］。其中通過與對照品的保留時間、一級質譜和二級質譜信息進行比對，5號、6號、9號、10號、15號和18號峰得到了確證，分別是7，8-二羥基香豆素、咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、木犀草素或山奈酚，對照品色譜圖見1，圖2為6個對照品的質譜圖。其余推測化合物信息見表1。表1給出已鑒定和已推測的化合物的保留時間、一級質譜、二級質譜和分子式信息。

表1 打箭菊總黃酮的化學成分分析

3 討論

打箭菊是藏藥中最常用的藥材之一，其黃酮類成分是其主要藥效成分類群之一，實驗研究了打箭菊總黃酮的化學成分，建立了UPLC-Triple TOF MS∕MS分析打箭菊總黃酮的方法。UPLC-Triple TOF MS∕MS聯用方法能夠在線獲得準確的分子量信息和化合物的結構信息，從而能快速、準確對打箭菊藥材進行成分分析檢測，為該藥材的進一步研究提供了參考依據。

圖1 總離子流色譜圖

圖2 對照品質譜圖