梔子大黃湯不同配伍對綠原酸溶出的影響

任曉宇

摘 要：【目的】研究梔子大黃湯不同配伍方式中綠原酸的溶出度比較。【方法】采用高效液相色譜法對不同配伍方式中梔子大黃湯綠原酸含量的測定。色譜柱：C18（4.5mm × 250mm，5.0 μm）；流動相：（A）甲醇-（B）乙酸；梯度洗脫：0-20分鐘（5.0%-15.0% A），20～27分鐘（15.0%A），28～36分鐘（15.0%-25.0%A），36～41分鐘（25.0%- 30.0%A）；柱溫：35℃；流速：1.0 ml/min?！窘Y果】梔子大黃湯全方綠原酸溶出率較單味梔子溶出量降低21.2%；大黃梔子方綠原酸比單味梔子溶出量增加了33.3%?！窘Y論】綠原酸溶出量受方劑配伍影響，且較為明顯。

關鍵詞：梔子大黃湯；綠原酸；溶出度

“醫圣”張仲景的《金匱要略》中有一主治酒黃疸之方劑，名曰梔子大黃湯，組方：梔子、大黃（生）、枳實（生）、淡豆豉四味。經現代醫學臨床研究[1]證明梔子大黃湯可以用于治療酒精性肝損傷，對實驗用大鼠酒精肝有損傷修復作用。方中君藥梔子（Gardenia jasminoides Ellis）主要成分環烯醚萜類、酸類、黃酮類[2]，其中以酸類成分中的綠原酸含量最具有代表性，綠原酸是梔子大黃湯中抗菌、抗氧化、降血壓和保肝護肝的主要成分，根據等研究證明[3]，綠原酸對于小鼠體外抗氧化實驗結果證明，其抗氧化應激作用明顯優于橙皮苷。本文以研究梔子大黃湯不同配伍方式中綠原酸的溶出度的比較為研究目的，建立測定綠原酸含量的方法，為梔子大黃湯藥代動力學研究提供可靠的依據。

1 儀器與試藥

儀器：高效液相色譜工作站（日本島津LC-2016C）、分析天平（上海倫安生精密儀器有限公司，萬分之一）、高速離心機（上海美曼特化學儀器有限責任公司）；中藥飲片：大黃（世一堂中藥飲片廠，20170612）、梔子（同仁堂中藥飲片廠，20170520）、炒淡豆豉（世一堂中藥飲片廠，20170808）、麩炒枳實（世一堂中藥飲片廠，20170112），本研究中藥飲片均經我廠中藥鑒定專家鑒定合格；試藥：甲醇（色譜純，山東泰尚松化學試劑有限公司）、綠原酸標準品（南京利民生物科技有限公司，20171212）、無水乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸（湖南廣要道化學制劑有限公司，均為分析純），本研究用水為我廠自制純化水。

2 方法與結果

2. 1 色譜條件

色譜柱：C18（4.5mm × 250mm，5.0 μm）；流動相：（A）甲醇-（B）乙酸；梯度洗脫：0-20分鐘（5.0%-15.0% A），20～27分鐘（15.0%A），28～36分鐘（15.0%-25.0%A），36～41分鐘（25.0%- 30.0%A）；柱溫：35℃；流速：1.0 ml/min；檢測波長：325.0 nm；進樣量：20.0μL。綠原酸色譜圖詳見圖1、2所示。

圖2梔子大黃湯中綠原酸高效液相色譜圖

2. 2 對照品制備

將6.60mg綠原酸標準品溶于50.0%甲醇溶液中，定容至10.0ml，搖勻備用。

2. 3 供試品制備

2.3.1方劑藥粉制備

原方組成[4]：大黃（3.0g）、梔子（9.0g）、淡豆豉（24.0g）、枳實（12.0g）。加水10倍量，溫浸半小時后煎煮40分鐘，過濾，反復3次后合并提取液，濃縮，得到流浸膏50.0ml，凍干處理得凍干粉。不同配伍方劑：①梔子（9.0g）、大黃（9.0g）；②梔子（9.0g）、大黃（9.0g）、枳實（12.0g）。將方①、②均加水500ml，余法與原方同，得①、②凍干粉。

2.3.2樣品制備

精密量取凍干粉0.0788g，置于10.0ml棕色量瓶中加水，定容。將樣品溶液1ml移至容量瓶，加入2.0 mol / L稀鹽酸條PH值到2.0，用相同體積的乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，40℃氮氣吹干，并用70.0%乙醇200.0μL溶解，離心處理十分鐘后取上清液，即得供試品。方①、②方法同。

2. 4 方法學考察

2. 4. 1 線性關系

移取綠原酸儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0ml，以50.0%甲醇為溶劑定容在10.0ml棕色定容瓶中，搖勻備用。綠原酸質量濃度（X）、色譜峰面積（Y）繪制標準曲線，綠原酸于6.60～132.01μg/m L范圍內線性關系良好，回歸方程：Y =168978 X -14985，r=0.9989。

2. 4. 2 精密度

綠原酸對照品溶液32.0μg/ml，在本研究色譜條件下進樣6次，結果加樣回收率RSD=0.782%。

2.4.3重復性

以2.3方法制得6份供試品，以2.1色譜條件分析，得綠原酸峰面積，加樣回收率RSD=0.143%，重現性良好。

2. 5 樣品含量測定

2.3方法制備方①、②供試品溶液，以2.1色譜條件分析，回歸計算出綠原酸溶出量，結果如表1。

3 討 論

3. 1制備方法與流動相的選擇

通常中藥材的處理采用水提醇沉，并將指定成分定量分析，綠原酸的含量本就不高，如果采用直接醇沉會影響樣品回收率且對色譜分析時的干擾較大，乙酸乙酯來替代乙醇可以顯著提高綠原酸的回收率且提高色譜分析準確率。綠原酸較弱在色譜分析時易拖尾，采用流動相為0.50%的冰醋酸時，吸收峰對稱性較好。

3. 3 溶出率

根據劉琳琪[5]等研究，大黃對梔子中的綠原酸溶出有促進作用，但是加入枳實后又會使綠原酸溶出率下降，當大黃梔子湯全方配伍后綠原酸溶出率進一步下降，對于溶出率的影響，中藥方劑研究的是在不同體外于體內過程的，本研究為體外研究梔子大黃湯的藥代動力學提供參考。

4.結論

方劑梔子大黃湯和其不同配伍方劑中的綠原酸溶出量受方劑配伍影響，且較為明顯。

參考文獻：

[1] 朱鶴云， 畢開順， 韓飛，等. 梔子大黃湯中活性成分在正常大鼠和酒精性肝損傷大鼠體內的藥動學比較[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2016，22（22）：177-181.

[2] 馮筱懿，錢當當. 中藥梔子及其成分梔子苷對腎臟毒性及機制初步研究[J]. 首都醫科大學學報（自然科學版）， 2016，22（12）：125-127.

[3] 黎文卓， 劉亞云， 陳勇. 高濃度綠原酸對L02細胞脂質堆積與氧化應激損傷的影響[J]. 中草藥， 2017， 48（21）：4471-4478.

[4] 任艷青， 甄亞欽， 李葆林，等. 淡豆豉與梔子配伍降低梔子肝臟毒性的研究[J]. 中藥藥理與臨床， 2017（4）：147-149.

[5] 劉琳琪， 譚向宇， 趙晨曦，等. 大黃-梔子藥對配伍比例和提取工藝對大黃中蒽醌類成分溶出的影響[J]. 中草藥， 2017， Vol.48Issue（2）：283-287.