彌漫性毒性甲狀腺腫患兒血清IL-12、IL-10水平變化及臨床意義

吳瓊,陳鳳儀,王薇

(宜昌市第一人民醫院,湖北宜昌443000)

彌漫性毒性甲狀腺腫(GD)是兒科臨床常見的自身免疫性疾病，其發病機理主要包括遺傳因素和主要組織相容性復合體有關的刺激性T細胞功能缺陷等免疫功能紊亂現象，臨床癥狀主要表現為甲狀腺功能亢進,甲狀腺組織破壞特征不顯著[1,2]。隨著生活環境的變化，GD的發病率逐年升高，高達1%，甚至在某些地區更高，因此尋找GD的具體發病機制對于改善患者的生活質量具有重要意義[3]。近年研究發現,細胞因子在自身免疫性疾病的發生及發展過程中發揮重要作用，細胞因子作為免疫細胞生成的具有生物活性的肽類物質，通過與靶細胞表面相應的抗體結合而發揮不同的生物學效應[2]。甲狀腺細胞可以表達細胞因子受體，而且可合成多種細胞因子，進而影響甲狀腺細胞免疫相關因子的表達而調節GD的病理過程[4]。本研究通過探討GD患兒血清白細胞介素(IL)-12和IL-10水平變化及其臨床意義，旨在為臨床闡明GD的具體發病機制提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2017年9月宜昌市第一人民醫院兒科收治的GD患兒60例(研究組)，均符合諸福棠實用兒科學第8版中的相關規定[5]：具有甲狀腺功能亢進癥狀，彌漫性甲狀腺腫及相關甲狀腺激素滴度下降。納入標準：①患兒年齡≤14歲；②所有患兒的臨床資料完整，且依從性高；③經患兒家長同意，并簽署知情同意書。排除標準：①合并患有心、肝、腎等重大臟器病變；②合并患有其他自身免疫性疾?。虎垩仔约膊?；④有甲狀腺病史及遺傳史；⑤入組前半個月使用免疫抑制劑。入組患兒中男17例、女43例，年齡8～13(10.87±1.23)歲，病程1～8(5.12±0.63)個月，體質量指數16.0～18.4(17.18±0.65)kg/m2。按照發病及治療的不同階段[5]分為新發病組(n=19)、未緩解組(n=25)和緩解組(n=16)。新發病組：臨床表現為典型的甲狀腺功能亢進癥狀，如多汗、食欲增加、大便次數增加等，血清中游離甲狀腺素(FT4)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)水平升高或促甲狀腺激素(TSH)降低，同時甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)、甲狀腺微粒體抗體(TMAb)及促甲狀腺素受體抗體(TRAb)陽性。未緩解組：采用抗甲狀腺藥治療1～4個月，臨床癥狀緩解，甲狀腺功能發生好轉，但是并未恢復至正常。緩解組：采用抗甲狀腺藥治療1～6個月，臨床癥狀消失，甲狀腺功能恢復正常。另外選擇于我院進行體檢的健康兒童32例作為對照組，男10例、女22例，年齡9～13(10.62±1.35)歲，體質量指數16.4～18.7(17.21±0.71)kg/m2。各研究組基本資料差異無統計學意義(P均>0.05)。對照組與研究組性別、年齡及體質量指數有可比性。

1.2 治療方法 患兒均采用抗甲狀腺藥物治療，給予甲硫咪唑15～60 mg/d，口服，3次/d，根據患兒的病情調整給藥量，將其劑量減少至5～30 mg/d，維持治療3個月。

1.3 血清IL-12和IL-10水平的檢測 受試兒童均于清晨空腹抽取外周靜脈血3 mL，置于不含肝素鈉的采血管中，室溫下靜置20 min，以3 000 r/min離心10 min，離心半徑為3 cm，分離上清液，即得血清。采用酶聯免疫吸附法檢測血清中IL-12和IL-10水平，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，嚴格按照試劑盒的說明書進行操作。

1.4 甲狀腺功能相關指標檢測 取部分血清檢測兩組受試兒童游離甲狀腺功能指標(FT3、FT4和TSH)和甲狀腺自身抗體(TMAb、TGAb和TRAb)。采用化學發光法測定FT3、FT4和TSH水平，試劑盒購自德國拜爾公司；采用放射免疫分析法測定TMAb和TGAb水平，試劑盒購自中國原子高科核技術應用股份有限公司；采用酶聯免疫吸附法檢測TRAb水平，試劑盒購自天津醫科大學藥廠。嚴格按照試劑盒的說明書進行操作。

2 結果

2.1 兩組血清IL-12、IL-10水平及甲狀腺功能相關指標比較 與對照組比較，研究組血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均升高，而血清TSH水平降低(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組血清IL-12、IL-10水平及甲狀腺功能相關指標比較

2.2 不同病情GD患兒血清IL-12、IL-10水平及甲狀腺功能相關指標比較 新發病組患兒血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于未緩解組和緩解組，而血清TSH水平低于未緩解組和緩解組；未緩解組血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于緩解組，而血清TSH水平低于緩解組(P<0.05)。見表2。

表2 不同病情GD患兒血清IL-12、IL-10水平及甲狀腺功能相關指標比較

注：與緩解組相比，*P<0.05；與未緩解組相比，#P<0.05。

2.3 GD患兒血清IL-12、IL-10水平與甲狀腺功能相關指標的相關性 GD患兒血清IL-12水平與TSH呈負相關(r=-0.709，P<0.05)，而與FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb無相關性(r分別為0.157、0.229、0.102、0.139、0.169，P均>0.05)；GD患兒血清IL-10水平與FT3、FT4呈正相關(r分別為0.714、0.721，P均<0.05)，而與TSH、TMAb、TGAb和TRAb無相關性(r分別為-0.173、0.228、0.117、0.192，P均>0.05)。

3 討論

GD發病癥狀不明顯，發展緩慢，患兒最初是情緒不穩定、多動、注意力不集中等輕微癥狀，隨后出現食欲增加、體質量下降、多尿、心悸、行為異常及學習成績下降等，患兒甲狀腺腫大，接近一半患兒伴隨出現非浸潤性突眼[2]。75%的兒童甲狀腺功能亢進病因是由GD誘發，兒童GD的發病率低于成年人，發病率隨著年齡的增加而升高，多數患兒均出現在青春期，女性的發病率約是男性的5倍，同時隨著加碘鹽的使用，發病率逐年升高[6]。研究發現，GD患兒的甲狀腺功能亢進癥狀與機體Th2細胞及其分泌細胞因子水平密切相關，其發病機制主要與自身免疫功能紊亂有關[2,4]。細胞因子種類眾多，通過與特定受體結合而發揮不同的生物學效應，同時可以銜接神經系統、內分泌系統和免疫系統；其可通過影響T淋巴細胞、B淋巴細胞的生長和分化而直接影響甲狀腺濾泡細胞，上調組織相容性復合物-Ⅱ分子和黏附分子的釋放；另外，其能夠改變甲狀腺濾泡細胞的功能[2]。因此，細胞因子網絡異?？捎绊慓D的發生及發展。

IL-12主要由Th1細胞產生，可增強自然殺傷細胞的毒性，從而激發遲發性超敏反應，主要介導細胞免疫應答；而IL-10主要由Th2細胞產生，促進多種免疫球蛋白的產生，主要介導體液免疫應答[7]。Th1和Th2細胞因子誘導的免疫反應相互影響，IL-12促進Th0分化為Th1細胞，而IL-10促進Th0轉化為Th2細胞，抑制Th1細胞分泌細胞因子，因此Th1和Th2細胞分泌的細胞因子維持Th1/Th2的平衡，激活免疫反應[7]。IL-12細胞因子家族由IL-12、IL-23、IL-27和IL-35組成，其中IL-12的特征為異質二聚體結構與其他成員的結構共享，由α和β兩個亞基組成，兩個亞基分別與IL-6和IL-6受體結構相似[8]，是調節免疫系統反應最重要的細胞因子。IL-12作為多活性的細胞因子，可平衡Th1/Th2的比例，進一步增強Th1的作用，并促進IL-2等細胞因子的產生[9]；同時誘導STAT4的磷酸化，增加干擾素-γ的產生量，并觸發T-bet的表達而上調Th1反應強度和干擾素-γ分泌量[8,10]；誘導自然殺傷細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞產生大量的腫瘤壞死因子-α，并增加靶細胞Fas分子的表達，從而通過Fas-FasL途徑殺傷靶細胞[11]。對比GD患兒與健康兒童血清IL-12和甲狀腺功能指標水平變化情況，結果發現研究組血清IL-12水平均高于對照組，同時研究組血清FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于對照組，而血清TSH水平低于對照組，不同病情GD患兒血清IL-12和甲狀腺功能指標之間的差異具有統計學意義。新發病組患兒血清IL-12、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于未緩解組和緩解組，而血清TSH水平低于未緩解組和緩解組；同時未緩解組血清IL-12、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于緩解組，而血清TSH水平低于緩解組；另外相關性分析結果發現GD患兒血清IL-12與TSH呈負相關，提示IL-12與GD的發生、發展及治療后的轉歸有關。GD患兒體內IL-12水平升高是由于高濃度甲狀腺激素長期刺激導致的[12]。

IL-10是分子量為35 000～40 000的酸敏感蛋白，作為抑制性淋巴細胞，主要由Th2細胞分泌，其基因定位于1號染色體上，并且由單核細胞、淋巴細胞、巨噬細胞產生，生物學活性多種多樣，是細胞免疫的負性調節因子[2]。IL-10影響自身免疫功能主要通過以下幾種方式發揮作用[3,8～13]：①抑制IL-12類淋巴因子的合成及活性；②降低相應抗原的遞呈能力；③通過減少干擾素-γ的產生而抑制自然殺傷細胞的活性；④抑制Th0轉化為Th1，抑制炎癥細胞的轉移；⑤通過刺激B淋巴細胞調節體液免疫；⑥與樹突細胞誘導Th2反應，促進Th0細胞轉化為Th2細胞，進而使得B淋巴細胞增殖、分化為漿細胞，增強機體的體液免疫。研究組血清IL-10水平均高于對照組，同時不同病情GD患兒血清IL-10的差異具有統計學意義；新發病組血清IL-10水平均高于未緩解組和緩解組，同時患兒未緩解組血清IL-10水平均高于緩解組，說明IL-10水平與GD患兒的病情有關。另外GD患兒血清IL-10水平與FT3、FT4呈正相關，提示IL-10水平升高參與GD病情的發展。其原因是IL-10誘導甲狀腺上皮細胞主要組織相容性復合體-Ⅱ類抗原表達異常，通過旁分泌和自分泌方式影響免疫功能，激活自身的T淋巴細胞和B淋巴細胞，加重刺激T細胞的損傷。另外，本研究中GD患兒血清IL-12水平與FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb無相關性；血清IL-10水平與TSH、TMAb、TGAb和TRAb無相關性，可能與選擇的病例數量過少及地域性有關。

綜上所述，GD患兒血清中IL-12和IL-10水平異常升高，并且與甲狀腺功能異常密切相關，能夠反映病情。