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CdTe量子點與微囊藻毒素-LR抗體的偶聯(lián)及其相互作用的研究

2018-08-20 06:57:30孫嘉笛孫秀蘭張銀志
食品與生物技術學報 2018年5期

李 瑩,孫嘉笛,孫秀蘭*,,張銀志

(1.江南大學 食品學院,江蘇 無錫 214122;2.食品科學與技術國家重點實驗室,江南大學,江蘇 無錫 214122)

量子點(Quantum dots,QDs)是一類由 II-VI族(如 CdSe、CdTe、ZnSe、CdS 等)或 III-V 族(如 InAs、InP等)以及Si等元素組成的均一或核殼結(jié)構的納米顆粒,是近年發(fā)展起來的一種新型納米材料,它具有激發(fā)光譜寬,發(fā)射光譜窄,光穩(wěn)定性好等眾多優(yōu)點[1-3],自從有學者將量子點與生物分子成功偶聯(lián)之后,量子點就逐漸開始被應用于熒光標記、免疫測定等生物學領域。然而量子點的熒光特性在生物環(huán)境下易猝滅[4],從而限制了量子點的生物應用范圍。所以作者在制備量子點-抗體熒光探針的同時,也對量子點與抗體之間的相互作用機理進行了研究。

作者首先合成了CdTe量子點,接著采用純化后的量子點與微囊藻毒素-LR抗體進行偶聯(lián),分別研究了不同條件對偶聯(lián)效果的影響,然后通過紫外-可見吸收光譜、熒光光譜對比了偶聯(lián)前后的光譜變化,借助聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE凝膠電泳)來鑒定偶聯(lián)產(chǎn)物。與此同時,結(jié)合經(jīng)驗公式,深入分析了QDs與抗體的相互作用機理。通過這些研究,為今后量子點在生物學領域方面的推廣應用提供了一些參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、巰基乙酸、十二烷基磺酸鈉、丙烯酰胺、N-N亞甲基雙丙烯酰胺、TEMED、過硫酸銨、考馬斯亮藍R-250、甲醇、甘氨酸、氯化鈉等,均購自國藥集團;微囊藻毒素-LR(MC-LR)抗體為實驗室免疫所得;所用試劑均為分析純,實驗用水為超純水。

1.2 儀器

GRP-9050型隔水式恒溫培養(yǎng)箱,上海森信實驗儀器有限公司產(chǎn)品;F-7000型熒光分光光度計,日立高新技術公司產(chǎn)品;UV-1800型紫外-可見分光光譜儀,日本島津產(chǎn)品;DYCZ-24D垂直板電泳槽,北京六一儀器廠制造;Tanon GLS-2010凝膠成像儀,上海天能科技有限公司產(chǎn)品;5424冷凍離心機,德國Eppendorf公司產(chǎn)品;TecnaiG2F20s-TWIN透射電鏡,美國FEI公司產(chǎn)品;PB-10C標準pH計,上海精密科學儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 實驗方法

1.3.1 CdTe量子點的制備 將0.12 g硼氫化鈉溶于5 mL超純水中,在氮氣的保護下加入30 mg碲粉,常溫磁力攪拌反應直至黑色碲粉完全溶解,反應液為無色 (或粉紅色)透明,即得到碲氫化鈉(NaHTe)溶液,備用。 稱取一定量的 CdCl·2.5H2O,用超純水溶解于三口燒瓶中,加入適量巰基乙酸(TGA),用0.1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值至最佳,通氮氣20 min左右,排出體系中的氧氣,然后在磁力攪拌以及氮氣的保護下迅速加入新鮮制備的碲氫化鈉溶液,100℃加熱回流一定時間。避光冷卻至室溫,即可得到澄清透明的CdTe量子點(CdTe QDs)溶液[5]。

1.3.2 CdTe量子點熒光探針的制備及純化 以巰基乙酸(TGA)為修飾劑所制備的CdTe QDs,表面有羧基覆蓋,在縮合劑EDC的作用下能與微囊藻毒素-LR抗體(MC-LR)的氨基反應,從而實現(xiàn)量子點與抗體的共價偶聯(lián)。由于量子點的粒徑要遠遠小于抗體,所以對偶聯(lián)物進行超濾離心,截留下與抗體偶聯(lián)成功的量子點。具體操作如下[6]:在2 mL CdTe量子點溶液中,加入30 μL EDC,37℃反應30 min,使量子點充分活化,然后加入30 μL MC-LR抗體,37℃反應一定時間,反應體系中,QDs∶MC-LR抗體∶EDC的摩爾比為1∶15∶200,最后加入終質(zhì)量濃度為0.1 mg/dL的BSA進行封閉。將溶液放入10×104的超濾離心管中,10 000 r/min離心10 min,截留物復溶于PBS中(pH7.4),即得到純化后的QDs-MC-LR抗體。

1.3.3 量子點及量子點-抗體偶聯(lián)結(jié)果的分析 分別測定CdTe QDs的紫外可見吸收光譜和熒光光譜,并借助透射電鏡表征其形貌。

分別測定CdTe QDs與 QDs-Ab的紫外可見吸收光譜和熒光光譜,對比偶聯(lián)前后光譜變化。

以QDs為對照,采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定偶聯(lián)物。

1.3.4 量子點與抗體的光譜分析 在不同溫度下,固定微囊藻毒素抗體的濃度,向其中加入不同濃度的CdTe量子點,分別測定體系的吸收光譜和熒光光譜。對光譜進行分析,從而對量子點與抗體之間的相互作用有進一步了解。

2 結(jié)果與分析

2.1 CdTe量子點的表征

量子點的粒徑對其熒光,吸收光譜和熒光光譜都有著很大的影響,制備過程中,改變制備條件,就可以得到不同粒徑的量子點,粒徑從小到大,熒光依次從綠到紅,吸收光譜和熒光光譜也隨之改變。本文中以回流3 h所制備的CdTe量子點為例,對其進行表征。

2.1.1 外觀 觀察CdTe量子點在日光下(左)和紫外燈下(右)時的圖片,由圖1可知,在日光下,量子點為橘紅色澄清透明的溶液,在紫外燈下可發(fā)出強烈的黃色熒光。

圖1 日光和紫外光下的CdTe量子點Fig.1 CdTe quantum dots in daylight and ultraviolet light

2.1.2 紫外-可見吸收光譜和熒光光譜 取適量量子點,分別進行紫外掃描分析和熒光光譜分析,其中熒光光譜的激發(fā)波長為380 nm,激發(fā)狹縫和發(fā)射狹縫均為5 nm。如圖2所示分別為量子點的紫外吸收光譜(a)和熒光光譜(b),由圖可知,量子點在較寬范圍內(nèi)有連續(xù)的吸收,最大吸收波長在520 nm左右,根據(jù)經(jīng)驗公式[7]:D=(9.812 7×10-7)λ3-(1.714 7×10-3)λ2+1.006 4λ-194.84(λ 為最大吸收波長),可計算出量子點尺寸約為2.81 nm。由熒光光譜可知,最大發(fā)射峰的位置在560 nm左右,半峰寬較窄,說明了所制備的量子點粒徑分布范圍比較小。

圖2 為量子點的紫外可見吸收光譜和熒光光譜Fig.2 Absorption and fluorescence spectra of CdTe quantum dots

2.1.3 電鏡圖 本方法所制備的CdTe量子點形狀呈類球狀,尺寸較為均一且分散性良好,粒徑大小也與根據(jù)經(jīng)驗公式所推算出的結(jié)果基本吻合,見圖3透射電鏡圖。

圖3 CdTe量子點的透射電鏡圖Fig.3 TEM image of CdTe QDs

2.2 偶聯(lián)條件的優(yōu)化

量子點與抗體的偶聯(lián)效果會因偶聯(lián)條件的不同而有所變化,本文中分別比較了不同pH、溫度、時間及離子強度下,QDs-Ab的熒光發(fā)射光譜,從而選擇最優(yōu)的偶聯(lián)條件。

2.2.1 pH 分別配制不同 pH 值(5.5,6.0,6.8,7.4,8.0,8.8,9.5)的 PBS溶液作為量子點與抗體偶聯(lián)的反應體系,然后測量偶聯(lián)物的熒光強度。如圖4所示,當溶液pH值偏酸或偏堿性時,偶聯(lián)物的熒光強度比較低,一方面可能是由于在不適宜的pH下量子點會出現(xiàn)熒光猝滅現(xiàn)象,另一方面是溶液的pH值會引起抗體的活性降低,使其與量子點的偶聯(lián)率下降,削弱了它對量子點表面的包覆修飾作用,促使熒光強度的減小。當pH值為7.4時,抗體的活性最佳,與量子點的偶聯(lián)率增加,熒光強度也達到最大值。

圖4 酸堿度對偶聯(lián)物熒光強度的影響Fig.4 Effect of pH on the fluorescence intensity of conjugates

2.2.2 溫度和時間 在4,25,37℃,分別測定不同時間體系熒光強度的變化。如圖5所示,在2 h之內(nèi)的不同溫度下,反應體系的熒光強度都在隨著時間的延長而增加,其中,37℃的反應體系熒光強度要顯著高于4℃和25℃的反應體系,這也是由于反應速度會隨著溫度的升高逐漸加快,熒光強度也就隨之增大。但2 h之后,37℃的反應體系熒光強度開始下降,這是由于隨著反應時間的延長,抗體的活性會逐漸下降,甚至最終會低于其他溫度下的反應體系。但是考慮到抗體在37℃下活性較高,并且此溫度下反應速度快,省時,所以最終選定的反應溫度和時間為37℃、2 h。

圖5 溫度和反應時間對偶聯(lián)物熒光強度的影響Fig.5 Effect of temperature and time on the fluorescence intensity of conjugates

2.2.3 離子強度 不同濃度氯化鈉對QDs-Ab偶聯(lián)物熒光強度的影響,如圖6所示,少量氯化鈉的加入可以抑制QDs-Ab形成靜電雙電層,減少靜電排斥,從而增強QDs-Ab的活性。但過量的氯化鈉會增強蛋白質(zhì)的水合作用,同時抑制偶聯(lián)物的親和力[8]。所以本實驗最終選擇的氯化鈉終濃度為0.2 mol/L。

圖6 離子強度對偶聯(lián)物熒光強度的影響Fig.6 Effect of quality of sodium chloride on the fluorescence intensity of conjugates

2.3 偶聯(lián)結(jié)果的鑒定

2.3.1 偶聯(lián)前后光譜的變化 量子點與抗體偶聯(lián)前后的紫外吸收曲線并沒有發(fā)生明顯的位移,如圖7(a)所示,說明偶聯(lián)后量子點的大小和形貌并沒有發(fā)生明顯的改變,但偶聯(lián)后的熒光強度略有增強(圖7(b)),原因可能是抗體將量子點表面包覆后,對量子點的表面起到了鈍化作用,有效去除量子點表面缺陷,降低了無輻射躍遷的幾率[9],使熒光強度有所提高。此外,由于量子點經(jīng)EDC與抗體偶聯(lián)之后,一個蛋白可能結(jié)合多個量子點,拉近量子點之間距離,導致量子點之間的偶極相互作用增強[10],使其斯托克斯位移增大,熒光發(fā)射峰的峰位發(fā)生輕微的紅移[11]。

圖7 量子點與量子點-抗體偶聯(lián)物的紫外吸收光譜和熒光光譜Fig.7 Absorption spectrum and fluorescence spectrum of QDs and QDs-Ab

2.3.2 電泳鑒定 對QDs-Ab偶聯(lián)物進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,各道上樣的樣品及上樣量分別是:1泳道為 10 μL標準蛋白 Marker,2泳道為 10 μL量子點,3泳道為10 μL微囊藻毒素抗體,4泳道為 10 μL QDs-Ab 偶聯(lián)物,5 泳道為 20 μL QDs-Ab偶聯(lián)物。電泳結(jié)束后,用凝膠成像儀對其進行透射拍照,獲得圖8(a)。然后將凝膠經(jīng)過染色、脫色處理后,再用成像儀對凝膠再次進行拍照,獲得圖8(b)。

未標記的抗體(或Marker)不會產(chǎn)生熒光,透射拍照也就不會產(chǎn)生亮帶。而量子點有熒光,所以在紫外照射下會有條帶,如圖8(a)所示,2、4、5 泳道都有亮光,并且QDs-Ab偶聯(lián)物(4,5泳道)亮光的強度會隨著上樣量的增加而增強。在考馬斯亮藍染色之后,圖8(b)中所示,QDs(2泳道)無條帶,Marker,抗體及QDs-Ab均有明顯的條帶,表明QDs與Ab偶聯(lián)成功。

圖8 偶聯(lián)物透射電泳圖和偶聯(lián)物照射電泳Fig.8 Transmission electrophoresis of QDs-Ab conjugations and the exposure electrophoresis of QDs-Ab conjugations

2.4 量子點與抗體相互作用的研究

2.4.1 量子點對抗體吸收光譜的研究 37℃(310 K)時,不同濃度的量子點(0,2×10-6,4×10-6,8×10-6,1×10-5,1.2×10-5,1.4×10-5,1.6×10-5,1.8×10-5,2×10-5mol/L)對抗體(濃度為1×10-5mol/L)吸收光譜的影響,如圖9所示,抗體本身的吸收峰較寬,最大吸收峰值在280 nm左右,隨著量子點濃度的增加,抗體的吸收峰逐漸增加,并發(fā)生輕微的藍移(從280 nm移動至278 nm),這表明了抗體結(jié)構發(fā)生一定的變化,由于動態(tài)猝滅不會引起吸收光譜的變化[12],因此可以進一步證明量子點與抗體之間的作用屬于靜態(tài)猝滅。除此之外,我們還可以依據(jù)公式(1)推算出量子點與抗體之間的表觀結(jié)合常數(shù)Kapp[13]。

其中A,A0,Ac分別代表加入不同濃度量子點時,不含量子點時BSA的吸光度以及混合物的吸光度。根據(jù)公式(1),計算 1/(A-A0),并與 1/[QDs],通過線性擬合,可以看出1/(A-A0)與量子點濃度的倒數(shù)呈線性關系(見圖9 插圖),其中斜率為 1/Kapp(Ac-A0),截距為 1/(Ac-A0),最終計算可知 Kapp大約為 3.37×104M-1(R2=0.990 6)

圖9 加入不同濃度的CdTe量子點,抗體吸收光譜的改變(插圖為1/(A-A0)與量子點濃度的線性關系)Fig.9 Absorption spectrum of antibody in the absence and presence of CdTe QDs at 310 K(The insert is the straight line dependence of 1/(A-A0) on the reciprocal concentration of CdTe QDs)

2.4.2 量子點對抗體熒光光譜的影響 熒光光譜是獲得蛋白構象及動態(tài)變化的一種有效方法,眾所周知,熒光猝滅通常是由2種因素引發(fā)的,一種由碰撞引起(動態(tài)猝滅),另外一種是猝滅劑與熒光物質(zhì)形成復合物引起的(靜態(tài)猝滅)[14]。因此我們通過研究QDs對抗體熒光光譜的影響可以判斷引發(fā)熒光猝滅的類型,并能對猝滅機制有進一步的了解。如圖10 所示,為不同溫度下(a:298 K,b:304 K,c:310 K),量子點對抗體熒光光譜的影響,其中抗體濃度固定為 1×10-5mol/L,QDs濃度(從 A 到 I)分別為 0、8.0×10-6、1.6×10-5、2.0×10-5、4.0×10-5、6.0×10-5、8.0×10-5、1.0×10-4、1.2×10-4mol/L。如圖所示,抗體的最大發(fā)射波長在340 nm左右,隨著QDs濃度的增加,抗體的熒光強度顯著下降,不同溫度下,熒光強度的下降程度也有所不同,量子點對抗體熒光強度的猝滅,可通過Stern-Volmer公式進行計算[15]:

其中,F(xiàn)0,F(xiàn)分別代表沒有QDs存在,以及有QDs存在時抗體的熒光強度;[Q]為量子點的濃度;KSV為Stern-Volmer猝滅常數(shù)。從圖10插圖可以看出,在量子點較低濃度范圍內(nèi) (2×10-6~2×10-5mol/L),F(xiàn)0/F與濃度的關系與Stem-Volmer公式比較吻合。因此,在低濃度范圍,將不同溫度下F0/F與量子點的濃度進行線性擬合。

圖10 不同溫度下,加入不同濃度的量子點,抗體熒光光譜的變化 (插圖為量子點溶液對抗體相對應的Stem-Volmer猝滅曲線)Fig.10 Fluorescence spectra of antibody in the presence of different concentrations of QDs at different temperature,and the inset corresponds to Stern-Volmer plots of the quenching of the fluorescence of antibody by QDs

如圖11所示,為不同溫度下,量子點對抗體熒光猝滅的Stem-Volmer曲線,結(jié)果表明,量子點對抗體熒光猝滅的Stem-Volmer曲線具有良好的線性關系,且該猝滅曲線與溫度相關。表1列出了不同溫度下的Stem-Volmer猝滅常數(shù)KSV,隨著溫度的升高,KSV反而會下降。由于動態(tài)猝滅依賴于擴散,而擴散系數(shù)會隨著溫度的升高而增加,因此動態(tài)猝滅常數(shù)一般也會隨著溫度的升高而增大,然而對于靜態(tài)猝滅來說,形成的復合物的穩(wěn)定性會隨著溫度的升高而下降,因此,靜態(tài)猝滅常數(shù)就會與溫度呈負相關[16],所以進一步說明了量子點與抗體之間的相互作用屬于靜態(tài)猝滅,雙分子猝滅公式如下:

式中,Kq為雙分子速率常數(shù),τ0為無猝滅劑時熒光物質(zhì)的平均壽命,對于生物大分子,通常τ0=10-8S。根據(jù)公式(3)可計算出不同溫度下的Kq,結(jié)果列于表1。熒光猝滅劑對生物大分子的擴散碰撞猝滅常數(shù),最大時通常為1010M-1·S-1[17],量子點對抗體猝滅實驗所得的Kq遠遠大于擴散碰撞猝滅常數(shù),結(jié)果也同樣表明量子點對抗體的猝滅方式為靜態(tài)猝滅。

由于前面的研究表明,量子點對抗體的猝滅機制為靜態(tài)猝滅,因此需要用修正的 Stem-Volmer公式(4)來計算猝滅參數(shù)[12]。

其中,△F為猝滅劑(量子點)不存在時和存在時,抗體熒光強度的差值;fa為可被熒光猝滅劑接近的發(fā)色基團的摩爾百分比;[QDs]為量子點的濃度;Ka為有效猝滅常數(shù)。以F0/△F與1/[QDs]作圖(圖12所示),經(jīng)線性擬合后,斜率為 1/(faKa),截距為 1/fa,不同溫度下的Ka的計算結(jié)果列于表1,結(jié)果表明Ka也會隨溫度的的升高而下降,這一變化趨勢與KSV一致,這一特性符合靜態(tài)猝滅機制。

圖11 不同溫度下,量子點溶液對抗體的Stem-Volmer猝滅曲線(插圖為Stern-Volmer猝滅常數(shù)KSV與溫度的關系)Fig.11 Stern-Volmer plots for the quenching of antibody by QDs at different temperatures.The inset shows the relationship of the Stern-Volmer quenching constants KSVand temperature

表1 不同溫度下,CdTe量子點溶液與抗體相互作用的Stem-Volmer公式和修正的Stem-Volmer公式的猝滅常數(shù)Table 1 Stern-Volmer and modified Stern-Volmer quenching constantsoftheQDs-antibody system at different temperatures

圖12 不同溫度下,量子點溶液對抗體的修正的Stem-Volmer猝滅曲線(插圖為修正的Stern-Volmer猝滅常數(shù)Ka與溫度的關系)Fig.12 Modified Stern-Volmer plots for the quenching of antibody by QDs at different temperatures.The inset shows the relationship of the modified Stern-Volmer quenching constants Kaand temperature

2.4.3 結(jié)合位點n和結(jié)合常數(shù)K 由于量子點對抗體的熒光猝滅屬于靜態(tài)猝滅,因此,它們之間應該存在結(jié)合位點,之前的研究,結(jié)合位點可以通過公式(5)來進行計算[18]

其中,K是結(jié)合常數(shù);n為結(jié)合位點的個數(shù)。以lg[(F0-F)/F]與 lg[QDs]作圖(圖10 所示),通過線性擬合,可以得到不同溫度下的結(jié)合常數(shù)K和結(jié)合位點n,計算結(jié)果列于表2,結(jié)果表明隨著溫度的升高,結(jié)合常數(shù)K會不斷減小,和修正的Stem-Volmer猝滅常數(shù)Ka有相同的變化趨勢。由于有效猝滅常數(shù)Ka可以近似的認為是猝滅劑和受體體系中的表觀結(jié)合常數(shù)[19]。將結(jié)合常數(shù)K的值和表觀結(jié)合常數(shù)的值相比較發(fā)現(xiàn),結(jié)合常數(shù)均在同一個數(shù)量級上,因此,可以斷定量子點和抗體之間的結(jié)合常數(shù)約104M-1[20]。此外,我們發(fā)現(xiàn)不同溫度下量子點和抗體的結(jié)合位點均接近于1,表明兩者僅有一個結(jié)合位點。

2.4.4 熱力學常數(shù)△H,△G和△S 通常,內(nèi)源性或外源性配體與生物大分子之間的作用力包括靜電相互作用、氫鍵、范德華力、疏水相互作用等。為了進一步研究量子點與抗體之間的作用,我們需要了解兩者之間作用的熱力學參數(shù)△H,△S和△G。其中焓變(△H)是反應過程中分子內(nèi)鍵能交換的結(jié)果;熵變(△S)是反應體系中混亂度變化的指標;自由能(△G)的變化可以判斷反應是否自發(fā)進行。

圖13 不同溫度下,量子點溶液與抗體相互作用時log[(F0-F)/F]對 log[QDs]時的曲線Fig.13 Plot of log [(F0-F)/F]versus log [QDs]for antibody with QDs at different temperature

在實驗溫度范圍內(nèi),△H受溫度影響不大,則△H和△S我們可以通過van’t Hoff公式(6)出計算熱力學常數(shù)

其中,K為結(jié)合常數(shù);△H,△S分別代表反應的標準焓變和熵變;R 為氣體常數(shù) (8.314 J/(mol·K));T為溫度(單位為K)。如圖14所示,lnK與1/T具有良好的線性關系,R2=0.997 78,△H和△S可通過斜率和截距求得,自由能△G可根據(jù)公式(7)進行計算,計算結(jié)果全部列于表2中,

圖14 量子點與抗體相互作用的Van't Hoff關系圖Fig.14 Van't Hoff plots of QDs-antibody system

之前的研究表明[21]疏水作用會對體系的△H>0和△S>0產(chǎn)生貢獻,△H<0,則反應主要為靜電作用,△S<0,起主要作用的可能是氫鍵和范德華力,如表2所示,在不同溫度下,△G<0,表明量子點與抗體的結(jié)合是自發(fā)進行的,△H(<0)和△S(>0)表明在這個結(jié)合反應中,量子點與抗體之間的作用力是靜電相互作用為主,此外氫鍵、范德華力也會起一定的作用。

表2 不同溫度下,量子點溶液與抗體相互作用的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點數(shù)及熱力學參數(shù)Table 2 Thermodynamic parameters and the number of binding sitesofQDs-antibody atdifferent temperatures

3 結(jié)語

試驗優(yōu)化了熒光探針的制備條件,結(jié)果表明在pH為7.4,37℃反應2 h,離子濃度為0.2 mol/L時,制備的熒光探針效果最好,然后通過電泳對偶聯(lián)結(jié)果進行鑒定。此外,選取298 K、304 K、310 K作為實驗條件,對量子點與抗體的相互作用進行了深入的研究,根據(jù)公式(1—7),可以分別得到量子點與抗體的表觀結(jié)合常數(shù)Kapp,熒光猝滅常數(shù)KSV,結(jié)合常數(shù)K,結(jié)合位點n,以及熱力學參數(shù)△H(<0)△G(<0)△S(>0)等,結(jié)果表明,量子點對抗體具有熒光猝滅作用,猝滅方式屬于靜態(tài)猝滅,即量子點是與抗體形成某種特定結(jié)構的配合物而引起的熒光猝滅。量子點與抗體的結(jié)合起主要作用的是靜電相互作用,同時氫鍵、范德華力也會起一定的作用。

隨著量子點的應用越來越廣泛,如何實現(xiàn)量子點與抗體等物質(zhì)的偶聯(lián),同時還能保持它們的生物活性,也是推動量子點在生物標記,免疫學檢測等方面應用的一個重要環(huán)節(jié),通過本文作者這一系列的研究,我們對量子點與抗體之間的作用有了更深入的了解,這也為熒光探針的制備以及量子點在免疫學方面的應用提供一些理論支持。

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