黑靈芝多糖對運動大鼠抗疲勞和抗氧化作用

莫雙瑗，梁 健

（1.廣西科技大學 體育學院，廣西 柳州 545006；2.廣西科技大學 鹿山學院體育教學部，廣西 柳州 545006）

黑靈芝（Black Ganoderma lucidum）在真菌界具有重要的地位，其中含有重要的活性因子，具有明顯的藥理功能，其價值含量高，品種多，包括黑靈芝、白靈芝、紫芝等[1-3]。研究表明，靈芝多糖是從靈芝中提取出的具有極高價值的成分，其具有很強的生理活性，能夠降血糖、降血壓、調節血脂等功能，尤其是黑靈芝多糖更被廣泛應用[4-5]。運動專家提出，經過過度的運動不僅對機體不利，而且還會產生大量的自由基損壞機體，從而能夠引起機體相關功能發生障礙，線粒體功能下降，呼吸變慢，使得機體加快疲勞，如果不除掉這些自由基，則導致運動力降低，影響機體健康[6-8]。本文作者意在檢測正常大鼠、運動疲勞后大鼠以及力竭休息后大鼠肝組織和線粒體，研究黑靈芝多糖對大鼠抗疲勞，增強機體運動能力和提高機體運動后恢復能力的影響。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

健康Wistar雄性大鼠100只，質量為150～180 g，取自吉林大學動物中心。黑靈芝，安國市健仁藥材有限公司產品；SOD、GSH-Px、—SH、MDA、NOS、NO、Ca2+/Mg2+-ATPase、Na+/K+-ATPase試劑盒， 齊一生物科技有限公司產品。

1.2 儀器與設備

RE型蒸發器，上海越眾儀器設備有限公司產品；UV7502PCS型分光光度計，深圳市佳博特實驗設備有限公司產品；TD型離心機，常州市萬豐儀器制造有限公司產品；GM-33A型真空抽濾泵，廈門森態儀器儀表有限公司產品；TL96-2型超聲波粉碎機，江蘇天翎儀器有限公司產品；HH-4型恒溫水浴鍋，常州市鴻科儀器廠制造。

1.3 方法

1.3.1 黑靈芝多糖的制備 取一定量的黑靈芝子實體，將其洗凈，40℃烘干，粉碎至160目，采用體積分數為95%的乙醇進行脫脂，加入純凈水，100℃下浸提2 h，過濾，濃縮。然后加入乙醇置于4℃的冰箱中沉淀多糖，離心30 min，采用Sevag法除蛋白質，進行濃縮并凍干，備用[9-11]。

1.3.2 動物分組及灌胃 隨機抽取Wistar雄性大鼠，將大鼠隨機分為5組，每組20只：模型組（A）、力竭組（B）、力竭休息組（C）、黑靈芝多糖力竭組（D）、黑靈芝多糖力竭休息組（E）。黑靈芝多糖組（D組、E組）每天灌胃多糖水溶液 4 mL/d，A、B、C組均灌胃生理鹽水4 mL/d，連續灌胃30 d，末次灌胃30 min再檢測。

1.3.3 運動模型的建立 隨機抽取大鼠，使其做30 d跑臺訓練，方案根據Bedford模型（見表1），訓練之前應先進行準備活動，速度為15 m/min。按照1.3.2方法對大鼠灌胃生理鹽水和黑靈芝多糖4 mL/d。30 d后，將A組于安靜時處死，做對照組；B、D組大鼠運動至力竭并處死，作為對照；C、E組力竭并恢復12 h后處死[12-14]。

1.3.4 樣品的制取 大鼠進行處理前必須禁止飲食，時間為8 h，被處理大鼠應及時檢測，取適量肝組織于燒杯中，進行剪碎處理，得肝勻漿，并于4℃、2 000 r/min條件下離心20 min，清除下沉部分，進一步對上清液處理，離心速度為3 000 r/min，時間為20 min，沉淀為肝組織，應用超聲波將其破碎，備用[15-16]。

表1 大鼠運動方案Table 1 Rats exercise program

1.3.5 指標的測定 力竭時間的測定應從開始運動開始計時，直至力竭不動之后所用的全部時間。判斷是否力竭的原則為觀察運動時，大鼠速度降低，臀部在籠體后壁，后肢體隨皮帶自然轉動達30 s，利用刺激手段進行作用沒有效果，即為力竭。GSH-Px、NOS、—SH、MDA、NO、SOD、Ca2+/Mg2+-ATPase、Na+/K+-ATPase的測定都參照說明書進行。

2 結果與分析

2.1 黑靈芝多糖對大鼠抗氧化能力的影響

SOD和GSH-Px是極其重要的抗氧化酶類，可清除自由基等物質。—SH作為體內重要物質，可維持機體基本能力，并能夠有效地防止自由基對機體的損害。MDA濃度的多少可代表機體內物質氧化程度。由表2可以得出，運動力竭后，B組動物肝組織中GSH-Px活力、SOD活力和—SH摩爾質量顯著比A組低 （P＜0.05），MDA濃度比A組顯著提高（P＜0.05）。 C 組肝組織中 GSH-Px活力、SOD 活力和—SH摩爾質量同樣也比A組低 （P＜0.05），MDA濃度比A組高（P＜0.05）。根據D組實驗結果，同B比較，各項指標有明顯恢復，但比對照組略差，E組抗氧化指標要比B、C組有顯著提高，與對照組相當。故由結果可知，黑靈芝多糖能夠增強肝組織抗氧化能力，并能加快運動疲勞后的恢復。

表2 各組大鼠肝組織抗氧化能力的比較（x±s，n＝20）Table 2 Antioxidant capacity of hepatic tissue in the rats from each group（x±s，n=20）

2.2 黑靈芝多糖對大鼠NO-NOS、ATPase活性的影響

NO可加強機體內血管的舒張能力，改善機體組織代謝，可加強體內物質的輸送能力。由表3可得出，大鼠力竭后，肝組織NOS活力及NO摩爾質量、肝線粒體活力顯著下降；休息12 h，肝組織中NOS活力及NO摩爾質量、肝線粒體活力加強，但仍不能恢復原始狀態。服用黑靈芝多糖大鼠力竭后，肝組織中NOS活力及NO摩爾質量、線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力與 A比較要低（P＜0.05），比 B 組高（P＜0.05）；休息 12 h 后，肝組織中NOS活力、NO摩爾質量和線粒體指標達到A組水平，和 B 組相比顯著升高（P＜0.01），和 C、D 組相比顯著升高（P＜0.05）。根據結果可知，黑靈芝多糖可提高機體運動能力，加強機體物質的輸送，促進機體代謝，同時可增強對機體的恢復能力。

2.3 黑靈芝多糖對耐力訓練大鼠跑臺運動力竭時間的影響

由表4可得出，黑靈芝多糖力竭組D服用黑靈芝多糖大鼠運動后力竭時間明顯比力竭組B要高，而且時間上延長23%，具有統計學意義（P＜0.05）見表4。由實驗結果可知，大鼠服用多糖后力竭時間顯著延長，故黑靈芝多糖可增強運動能力，延緩運動疲勞，能夠延長運動時間。

表3 各組大鼠肝組織NO-NOS和肝線粒體ATPase活性的比較（x±s，n＝20）Table 3 NO-NOS in hepatic tissue and ATPase activity in hepaticmitochondria of rats（x±s，n=20）

表4 大鼠力竭時間比較（x±s，n＝20）Table 4 Rats exhaustive time（x±s，n=20）

3 結語

由實驗結果可知，大鼠服用黑靈芝多糖后，GSH-Px活力、SOD活力和—SH摩爾質量有顯著提高，MDA濃度明顯降低，故黑靈芝多糖可增強機體抗氧化能力。肝組織線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力明顯提升；恢復12 h后，肝組織中NOS活力、NO摩爾質量達到原水平，說明服用黑靈芝多糖可增強機體的恢復能力。服用多糖后大鼠力竭時間顯著延長，說明黑靈芝多糖具有延緩疲勞，延長運動時間的作用。