針刺對血管性癡呆大鼠TNF-α水平及神經行為學的影響

楊 超，程紅亮，薛曉婕，殷恒斌，耿 飛，李 娜

（1.安徽中醫藥大學，合肥 230038；2.安徽中醫藥大學第二附屬醫院，合肥 230061）

血管性癡呆（VD）是由缺血性、出血性腦卒中或缺血缺氧性腦損害所引起的一種綜合征，其最主要的表現為認知障礙[1]。近年來，隨著社會經濟的飛速發展，人口老齡化進程不斷加快及環境污染問題日益加重，我國老年人群患上癡呆的概率急劇上升，并且有呈年輕化的趨勢[2]。而隨著近年來腦血管病發病率的逐年增高，血管性癡呆發病也在呈現逐年上升的趨勢。目前，已成為引起老年期癡呆中僅次于阿爾茨海默癥的第2大病因[3-4]。由于血管性癡呆主要以認知障礙為主要表現癥狀，患者通常會喪失日常生活能力。因此，往往給家庭和社會造成嚴重負擔[5]。但是到目前為止，在治療血管性癡呆的藥物當中還沒有哪種藥物能達到令人滿意的療效。血管性癡呆與阿爾茲海默癥不同，它是一種完全可以預防、改善甚至可逆的病癥。血管性癡呆的預防與治療已越來越被人們所重視。本研究通過復制血管性癡呆的模型，治療予以針刺百會、四神聰、大椎等穴位，通過檢測血管性癡呆大鼠血清中的TNF-α含量和對各實驗組大鼠進行神經行為學評分，來闡明針刺對血管性癡呆的作用效果。以期為針灸在防治血管性癡呆中提供更為豐富和堅實的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 選取4月齡SPF級Wistar健康雄性大鼠90只。

1.2 造模 將4月齡Wistar大鼠采用頸總動脈結扎反復缺血再灌注法制備模型[6]，將大鼠放于電子秤上稱重，按體質量以0.3 mL/100 g計算10%水合氯醛用量，

腹腔注射麻醉，待大鼠完全麻醉昏迷后，將大鼠放置于大鼠固定板上，仰臥，四肢頭部固定，剃毛后皮膚消毒，采取頸正中切口，使用鈍性玻璃分針，將雙側頸總動脈分離，并使用動脈夾夾閉兩側頸總動脈，以阻斷血流20 min，同時在尾部放血0.3 mL，放血完畢后熱凝止血，松開動脈夾以恢復血流10 min，然后再次夾閉血管阻斷血流20 min，如此重復3次，待第3次血流再灌注后30 min，觀察大鼠的呼吸、心跳是否正常，如若正常，則在切口處注入適量的慶大霉素以預防感染。皮膚縫合后消毒切口，大鼠保溫處理，待大鼠蘇醒后放于鼠籠中常規飼養。

1.3 分組 將90 只Wistar雄性大鼠按電腦隨機數字法隨機分成正常對照組24只，其余66只進行血管性癡呆模型的復制，由于麻醉過量、頸動脈分離失敗等原因在造模復制中死亡18只，將剩余的48只隨機分為VD模型組和針刺治療組。每組24只。

1.4 治療方法 針刺治療于造模5 d后即開始進行。按照《實驗針灸學》[7]穴位的標準定位選取百會、大椎、四神聰[8]。操作方法：將大鼠放置于鼠板上，四肢固定，頭部用特制的大鼠頭部固定器進行固定，保持其清醒狀態下，常規消毒，用0.25 mm×25 mm天協牌毫針針刺四神聰、百會，平刺0.25 cm，大椎斜刺0.5 cm。施以捻轉手法，持續3 min。1次/d，30 min/次。正常對照組不做任何處置，模型組與針刺組平行，但模型組只綁于固定臺上而不做其他處理。

1.5 神經行為學評分 在造模完成后于第4天進行神經行為學評分，以鑒定造模是否成功。并于治療結束后第3天開始進行神經行為學評分，評分標準按Longa E Z等[9]制定的 5 級評分法改進：無神經功能喪失為0 級，評分為0 分；右前肢或左前肢不能充分伸展評為1級，評分為1 分；大鼠向右或向左環行運動評為2 級，顯示輕度局灶神經功能喪失，評分為2 分；若大鼠向右側或向左側傾倒則評為3 級，顯示中度局灶神經功能喪失，評分為3 分；大鼠不能自然行走，喪失行走能力的評為4級，重度局灶神經功能喪失，評分為4 分。評分需要達到 1～4 分才能鑒定模型為成功。

1.6 大鼠血清中TNF-α含量的測定 選取開始治療后第6、12、18天 3 個時間點，分別對3個實驗組大鼠經心臟取血，取血后放置于無菌干燥的試劑管內靜置2 h，高速離心2 500 r/min，離心 10 min，待試管內3組大鼠血清完全分離后，放置于恒溫為- 20 ℃的冰箱中備檢。大鼠血清中TNF-α的含量檢測采用酶聯免疫吸附測定法（Elise）[10]。

1.7 統計學方法 采用國際通用統計軟件SPSS 22.0對數據進行分析處理，各實驗組所得的結果均使用均數±標準差來表示（x±s），數據要先進行方差齊性檢驗，取齊性檢驗水平α = 0.10。同一試驗組的各不同時間點的數據比較采用單因素方差分析，不同實驗組的同一時間點數據比較選用t檢驗，結果顯著性水平均取 α = 0.05。

2 結果

2.1 神經行為學評分

2.1.1 造模后第4天各組神經行為學評分比較 見表1。

表1 造模后第4天各組神經行為學評分比較（x± s ，n = 24） 分

從表1中可以看出，造模結束4 d后，模型組和針刺組神經行為學評分明顯高于對照組，且模型組與針刺組行為學評分差異無統計學意義（P＞0.05），表明血管性癡呆大鼠模型制作成功。

2.1.2 治療結束后第3天各組大鼠神經行為學評分比較 見表2。

表2 治療結束后第3天各組大鼠神經行為學評分比較（x± s，n = 24） 分

結果如表2所示，針刺組在治療結束3 d后的神經行為學評分明顯低于治療前（P＜0.05），且治療結束3 d后針刺組與模型組相比神經行為學評分顯著降低（P＜0.01）。表明針刺治療能顯著改善大鼠神經功能。

2.2 治療后不同時間點各組大鼠血清 TNF-α含量變化比較 見表3。

表3 治療后不同時間點各組大鼠血清 TNF-α含量變化比較（x± s，n = 24） ng/L

3 討論

血管性癡呆病位在腦，督脈與腎、腦、心等臟器及膀胱經、腎經、心經、任脈等經絡密切相關[11-14]。百會、大椎均為督脈穴位，其中大椎為三陽、督脈之會，百會為督脈、足太陽之會，四神聰位于頭部，百會四方，具有健腦調神，醒腦開竅的作用，針刺諸穴能貫通督脈，開竅醒腦，引氣血上行，既能醒腦養神，又可通絡化瘀，故治療血管性癡呆可收到標本兼治之效。

現代研究[15-17]表明，腦缺血后炎癥反應是造成腦缺血后遺癥的重要原因之一。缺血性癡呆作為腦缺血后遺癥之一，其發生與炎癥反應密切相關。TNF-α作為腦缺血后重要炎性因子之一[18-19]，在腦缺血后，其含量在機體血清中迅速升高，而控制并降低TNF-α含量可有效改善并防治血管性癡呆。本研究通過采用頸總動脈結扎反復缺血再灌注法制備血管性癡呆模型，給予針刺百會、大椎、四神聰治療，以各組大鼠血清中TNF-α含量高低，揭示針刺對TNF-α的影響。在表1和表2中可見，對照組的神經功能評分為0，這是由于對照組的大鼠未有腦血管損傷，而模型組和針刺組皆有神經功能缺損的癥狀，但在表2中針刺組通過針刺治療后2組的神經功能評分存在明顯差異，因此，神經功能評分不僅能鑒定血管性癡呆模型是否制作成功，還能通過神經行為學評分表明針刺對血管性癡呆大鼠神經功能的改善作用。結果表明，針刺可以有效降低腦缺血后血清中TNF-α的含量，改善血管性癡呆的神經精神癥狀，促進神經功能的恢復。