以藥測證法對大鼠寒凝血瘀證關鍵證素的研究

徐小薈，熊麗輝

（長春中醫藥大學，長春 130117）

寒凝血瘀證主要原因是寒邪侵襲，損傷陽氣；寒性凝滯，陽虛不運，導致氣血運行不暢，瘀血內生，從而形成寒凝血瘀證。寒凝血瘀證是臨床中血瘀證常見的亞型之一，存在于多種疾病中[1-6]，多涉及內、外、婦、兒、腫瘤等各科疾病，尤其以東北寒冷的氣候條件下，該證較多。臨床以冷痛、腫塊、顏色紫暗、脈沉遲或沉澀等為主要表現，治療以溫陽活血行氣為主，但三者的權重鮮有提及。在健康需求日益提高的今天，人們的要求不僅是治好病，而是要以最小的投入獲得最大的治療效果。為此，本研究以證素的權重為切入點，探討寒凝血瘀證的關鍵病機，為準確治療提供依據。

藥物的篩選以古籍整理的結果為線索，通過對《中華醫典》（5版）的檢索，篩選出治療寒凝血瘀證的高頻藥物，前3味藥物分別為：附子（溫陽）、當歸（活血）、香附（行氣）；以3味藥及其不同組合對大鼠寒凝血瘀證的不同療效，從而判斷寒凝血瘀證的關鍵證素。

1 材料與方法

1.1 藥物 當歸、香附、附子藥物均購于長春中醫藥大學附屬醫院農本方顆粒藥房。將藥物分別加10倍量沸水浸泡，制成1 g/mL生藥量，自然涼后置于冰箱保存[2]。1.2 動物 Wester雌性大鼠60只，體質量（200±10）g，由長春市億斯實驗動物技術有限公司提供。在長春中醫藥大學動物實驗室內適應性飼養7 d，室溫22～25 ℃。1.3 方法

1.3.1 分組 大鼠隨機分為6組，分別是正常對照組、病理模型組、附子組、香附附子組、當歸香附組、香附當歸附子組，每組10只。

1.3.2 造模方法 本實驗根據中醫的病因病機冷凍致寒凝建立寒凝血瘀證的動物模型[7-8]。正常對照組大鼠正常飼養，其他組均采用冰水冷凍法造模[9-10]，每天（于每晚6: 00 — 7: 00）將大鼠全身置于0 ℃冰水中10 min，持續刺激30 d，直到大鼠出現明顯“寒凝血瘀”表征，每早8: 00去觀測大鼠的活動度、飲水量、心率、二便情況等，具體表現為：蜷縮少動、反應遲鈍、喜扎堆、呼吸微弱、唇周發黑、耳色暗紅、爪尾部紫暗、舌暗紅、被毛蓬松豎立無光澤、心率減慢、飲水量少、小便色清、大便濕爛等癥狀；出現蜷縮少動、反應遲鈍、皮毛無光澤、耳廓紫暗或紫黑、皮膚呈現青紫瘀斑等癥狀，確定造模成功（該寒凝血瘀模型為感寒致瘀的實證模型）[11]。

1.3.3 實驗過程 所有大鼠進行3 d的適應性喂養，第3天測量每組大鼠體質量，第4天開始造模，每天（于清晨7: 00—8: 00）對大鼠進行觀測，觀察大鼠的狀態、皮毛顏色、耳廓顏色、爪甲顏色、二便情況；測量大鼠的活動度、飲水量、心率，活動度以cm為單位，測量時間為15 s，每早8: 00把每組灌滿水的水瓶進行稱重，晚上6: 00再進行稱重，每天把早晚水瓶的重量做差；心率每天7: 30進行測量，做好記錄。每天（于每晚6: 00—7: 00）將大鼠全身置于0 ℃冰水造模實驗，除正常組大鼠不進行冰泳造模外，其他6組大鼠都進行冰泳造模實驗，將大鼠全身置于0 ℃冰水中10 min，持續刺激30 d，觀測大鼠10 d后逐漸出現寒凝血瘀表征，測量每組大鼠活動度、飲水量、心率，30 d后大鼠寒凝血瘀證的表征明顯，表明造模成功。造模成功后的第2天對各組大鼠進行灌胃（除正常組與病理組外），第3組大鼠用附子灌胃，第4組用附子當歸灌胃，第5組用附子香附灌胃，第6組用附子當歸香附灌胃。每天早晚7: 00進行灌胃1次，持續15 d，觀察各個不同給藥組大鼠的表征變化及量化指標的改變。

1.3.4 檢測指標 觀察并測量表征指標及量化指標的變化，包括大鼠活動度、皮毛色澤、毛發形態、耳廓邊緣血管顏色、爪子顏色、二便、舌質顏色、心率、飲水量、TNF-α、IL-1β 等。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計分析軟件，計量資料以均數±標準差（x± s ）表示，進行方差齊性檢驗，組間比較采用χ2分析。

2 結果

2.1 大鼠造模前后定量表征情況比較 從活動度、皮毛色澤、周身有無紫斑、耳廓顏色等幾個方面進行定量及定性評價。其中，活動度以每次在大鼠籠里（545 cm×395 cm×200 cm）的爬行距離（cm）為指標，每天測量3次取平均值；皮毛光澤分有光澤（皮毛光亮柔順）、少澤（毛色暗，尚柔順）、無光澤（毛色暗滯，成穗）3個等級；檢測每只大鼠心率取平均值；定性指標的判斷以每組發生率在60%以上者為陽性，用“有”“無”描述。結果見表1。

表1 大鼠造模前后定量表征情況比較（x± s ，n = 10）

第1天2組在活動度、心率、飲水量、耳廓顏色方面比較，差異無統計學意義（P＞0.05），第15、30天2組在活動度、心率、飲水量方面比較，差異有統計學意義（P＜0.05），表明造模成功。

2.2 各組大鼠給藥后定量表征情況比較 見表2。

2.3 大鼠給藥結束后各組TNF-α、IL-1β情況比較 見表3。

3 討論

寒凝血瘀證是由于寒邪所引起的血脈不通、血行遲緩澀滯、血液壅阻于脈中或離經停聚的病理狀態，表現為“血凝而不流，氣血不至，血不歸經，血瘀滯不行，血泣不通”，是多種疾病的發病基礎或病變結果，并且也成為了近代醫學研究活躍的領域之一[12-13]。

寒凝血瘀證在胸痹中出現的比率相對較高，許多學者[14-20]認為，西醫的急性冠脈綜合征屬于中醫的胸痹心痛，為本虛標實證，其中血瘀為主要標實證，血清中TNF-α、IL-1β參與機體的炎癥反應，值的高低與寒凝血瘀證的輕重有密切聯系，寒凝血瘀證越重TNF-α、IL-1β的值越高，反之越低。

表2 各組大鼠給藥后定量表征情況比較（x± s ，n = 10）

表3 大鼠給藥結束后各組TNF-α、IL-1β情況比較（x± s ，n = 10）

從實驗中大鼠的表征和TNF-α、IL-1β值的高低來看，單味藥附子對大鼠的各個表征緩解效果最佳，TNF-α、IL-1β值最低，其次是附子香附組。因此，溫陽、行氣、活血三法中，應重用溫陽，或者可以理解為溫陽單法可能替代三法同用的效果，對臨床中減少不必要的投入提供了有益的啟示，說明寒凝血瘀證的關鍵證素為陽虛。結合《素問·調經論》的論述：“氣血者，喜溫而惡寒，寒則泣而不行，溫則消而去之”，由此也說明溫陽對治療寒凝血瘀證的重要性，這些研究結果能夠為臨床準確辨證提供有力的依據。本研究結果也為臨床不必要的投入提供了依據，為小投入大收益的健康治療原則研究探索了思路。