三陰性乳腺癌內臟轉移與KIAA1522蛋白表達的相關性

王 磊 張 潔 劉春玲

作者單位： 063001 河北省唐山市人民醫院病理科

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，不同的乳腺癌亞型在分子水平上具有不同的信號轉導通路、轉錄組和表觀遺傳組學特征[1]。三陰乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是乳腺癌的一種特殊的亞型，在我國，TNBC的發病率雖然只占乳腺癌的10%～20%，但TNBC易發生內臟轉移，尤其是腦轉移和肺轉移，惡性程度高、侵襲性強。這也是導致患者的主要死亡原因[2]。因此，尋找TNBC轉移的致病機制對患者診治具有重要的意義。KIAA1522是近年研究發現的一種細胞黏附連接蛋白，其異常表達與人類多種腫瘤的復發轉移關系密切[3-4]，但在TNBC患者內臟轉移的相關研究較少。本文主要研究KIAA1522蛋白在TNBC原發灶、癌旁組織及內臟轉移灶中的表達情況，分析其與內臟轉移的相關性，以期為TNBC的臨床診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月至2015年12月唐山市人民醫院通過乳腺穿刺活檢或改良根治術標本病理確診的TNBC患者119例為研究對象，所有患者均符合2012年乳腺腫瘤WHO分類中TNBC的診斷標準[5]。按是否發生內臟轉移分為轉移組(73例)和非轉移組(46例)。同時將入組119例患者的癌組織及對應的癌旁組織制成蠟塊，進行免疫組織化學染色分析KIAA1522蛋白的表達情況。119例患者均為漢族女性；年齡33～72歲，平均(47.00±12.53)歲；病理類型均為浸潤性導管癌；依據Nottingham聯合組織學分級標準[6]進行組織學分級：I級36例，II～III級83例。隨訪至2016年6月，隨訪時間為6～63個月。轉移組患者73例(單器官轉移21例，多器官轉移52例)，其中肺轉移49例，肝轉移28例，腦轉移1例，單純骨轉移1例，14例骨轉移同時合并實質性臟器轉移，34例同時合并局部區域復發。患者平均年齡(45.91±11.76)歲，平均隨訪時間為(48.53±19.72)個月，組織學分級I級為17例，II～III級為56例。非轉移組患者平均年齡(42.35±13.32)歲，平均隨訪時長(45.36±22.19)個月，組織學分級I級為19例，II～III級為27例。兩組患者一般資料差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

納入標準：①原發腫瘤經病理證實為TNBC；②患者在隨訪截止前有影像學資料證實遠處轉移者；③患者術前或穿刺前均未接受放療、化療或免疫治療等抗腫瘤治療；④具有完整的臨床資料。

1.2 方法 采用免疫組織化學方法比較兩組患者KIAA1522陽性表達率，分析KIAA1522蛋白與三陰乳腺癌內臟轉移的相關性。

1.2.1 KIAA1522蛋白免疫組織化學檢測方法 KIAA1522兔抗人多克隆抗體(HPA032050，美國Sigma公司)，即用型二抗試劑盒及酶底物顯色劑(北京中杉金橋生物技術有限公司)。KIAA1522免疫組化實驗稀釋比為1∶ 200。免疫組織化學方法嚴格按照說明書進行操作。組織進行常規脫蠟、水化后，采用枸櫞酸鹽緩沖液高壓修復抗原，3%過氧化氫室溫孵育15 min。滴加KIAA1522一抗，濕盒中4℃孵育過夜，隨后滴加生物素標記羊抗兔/小鼠IgG的即用型二抗，室溫孵育30 min。二氨基聯苯氨(diaminobenzidin，DAB)顯色，蘇木素復染，封片。

1.2.2 結果判定 以TNBC患者的腫瘤細胞質中出現棕黃色顆粒為KIAA1522表達陽性，由2名病理醫師采用雙盲法獨立進行評分。依據物鏡下腫瘤細胞的染色范圍及強度分級[3]：細胞陽性率≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；依據對每張切片陽性細胞的染色強度進行評定：不著色為0分，淡黃色細顆粒狀為1分，棕黃色顆粒狀為2分，棕褐色粗顆粒狀為3分，將兩分數相乘得到的表達強度作為染色結果的評判標準：≥3分者為陽性，<3分者為陰性。

1.3 統計學方法 采用SPSS 22.0軟件對數據進行統計分析，計量資料采用率表示。組間率比較采用χ2檢驗，對轉移組患者的臨床和病理指標進行單因素分析，根據單因素分析結果，將存在統計意義的影響因素納入logistic多因素回歸分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者KIAA1522表達水平的比較 癌組織中，KIAA1522的陽性表達率為73.11%(87/119)；在對應的癌旁組織中，KIAA1522蛋白陽性表達48例(40.34%，48/119)，兩組間差異有統計學意義(χ2=26.034，P<0.001)；73例轉移組癌組織中，KIAA1522蛋白在轉移組中的陽性表達率為82.19%(60/73)，非轉移組患者KIAA1522在癌組織中的陽性表達率為58.70%(27/46)，轉移組中的陽性率高于非轉移組中陽性表達率，差異有統計學意義(χ2=7.924，P=0.007)。

2.2 TNBC患者內臟轉移影響因素的單因素分析 單因素分析結果顯示，TNBC內臟轉移與淋巴結轉移、組織學分級及KIAA1522蛋白表達水平有關，與患者年齡、腫瘤直徑無關。詳見表1。

2.3 患者內臟轉移的logistic多因素回歸分析結果比較 以內臟轉移作為因變量，以可能影響內臟轉移的因素：淋巴結轉移(無=0，有=1)、組織學分級(I級=0， II～III級=1)、KIAA1522蛋白表達(陰性=0，陽性=1)為自變量，進行多元logistic回歸分析，結果顯示淋巴結轉移、組織學分級和KIAA1522陽性表達均是TNBC內臟轉移的危險因素(P<0.05)。詳見表2。

表1 三陰乳腺癌內臟轉移的單因素分析

表2 三陰乳腺癌患者內臟轉移多因素非條件logistic回歸分析

3 討論

在我國，乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，其發病率逐年上升，且呈日益年輕化的趨勢[7]。內臟轉移是乳腺癌預后不良的重要指標。雌激素受體(-)、孕激素受體(-)及人表皮生長因子受體2(HER-2)非擴增的三陰乳腺癌具有更高的局部區域復發率和遠處轉移率，容易發生肺、肝、腦等實質性臟器轉移，目前基于蒽環類的乳腺癌常規化療方案對三陰乳腺癌的治療效果欠佳，加之生物內分泌治療和靶向治療對三陰乳腺癌的治療基本無效，導致了目前三陰乳腺癌治療上的難題[8]。因此，尋找該類腫瘤的新的治療靶點具有特別重要的臨床意義。

KIAA1522是一種黏附連接蛋白，Gene Expression Atlas、EMBL-EBI和TCGA數據庫[4，9-11]資料顯示，KIAA1522在非小細胞肺癌、結直腸癌組織中表達明顯高于癌旁組織，提示KIAA1522在腫瘤的發生發展中發揮了重要的作用。本次研究分析了KIAA1522基因在三陰乳腺癌組織中的表達及與患者內臟轉移的相關性，結果提示KIAA1522蛋白在三陰乳腺癌轉移灶的陽性表達率高于癌旁組織(73.11%vs40.34%)，在119例三陰性乳腺癌樣本中，KIAA1522陽性表達71例，其中68.97%患者伴有內臟轉移，這些結果均提示KIAA1522與腫瘤的惡性程度、侵襲和轉移關系密切，可能作為判斷三陰乳腺癌患者復發轉移的潛在分子標記物。

本研究結果顯示，內臟轉移與淋巴結轉移、組織學分級和KIAA1522蛋白表達具有相關性(P<0.05)，而年齡、腫瘤大小與內臟轉移無關(P>0.05)。 進一步logistic多因素回歸分析結果顯示，上述三者均是TNBC內臟轉移的危險因素(P<0.05)。與相關研究[12-14]結論一致。此外，本研究還證實KIAA1522蛋白高表達是三陰乳腺癌內臟轉移的獨立危險因素。這與Xie等[11]最近的一篇食管癌研究結論一致，研究發現未敲降KIAA1522的食管癌細胞系可以在小鼠肺內形成了明顯的轉移性結節，他們在進一步的通路分析中發現KIAA1522可以通過激活ERK信號通路發揮促進腫瘤細胞增殖、轉移的功能。基于上述研究結果，本課題將在下一步的研究中進一步探究KIAA1522促進三陰乳腺癌內臟轉移的具體分子機制。

綜上所述，KIAA1522蛋白在三陰乳腺癌組織中表達上調，其表達水平可作為預測乳腺癌內臟轉移的重要指標，協助臨床早期評估患者的病情。