彈力纖維在肺腺癌組織中的分布量與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

王玉蓉 孟 剛

作者單位： 230032 合肥 安徽醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室

彈力纖維存在于各種組織中，如皮膚、血管壁、肺等，由微原纖維和均質(zhì)狀物兩種成分構(gòu)成，這樣獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)維持了纖維的彈性[1-3]。在肺組織中，彈力纖維參與氣血屏障的形成，在維持肺泡的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)起到一定的作用，是肺能夠進(jìn)行呼吸運(yùn)動(dòng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[4]。目前，在肺癌不同病理亞型的診斷中，蘇木精-伊紅(HE)染色對(duì)于腫瘤是否浸潤(rùn)周?chē)M織及浸潤(rùn)深度的判斷并不十分準(zhǔn)確，而彈力纖維染色能夠很好的顯示腫瘤周邊的彈力纖維組織，為HE難以判斷的腫瘤浸潤(rùn)深度提供診斷方法[5]。目前關(guān)于彈力纖維的研究大多集中在肺癌的胸膜侵犯方面[6-7]，有關(guān)彈力纖維在肺腺癌間質(zhì)中的增生程度與其預(yù)后的相關(guān)性研究相對(duì)較少。本研究旨在通過(guò)彈力纖維在肺腺癌組織中分布量的多少，探討其與肺腺癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2012年1月至2014年8月術(shù)后病理診斷為肺腺癌的患者123例臨床資料，其中男性44例，女性79例；年齡42～80歲，≥65歲 49例，<65歲 74例；腫瘤直徑≤3 cm 87例，>3 cm 36例；依據(jù)國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)(international association for the study of lung cancer,IASLC)制定的第八版肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[8]進(jìn)行分期：N0組 96例，N1組16例，N2組11例；依據(jù)2015年世界衛(wèi)生組織(WHO)肺癌分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[9]進(jìn)行分類(lèi):原位腺癌35例，浸潤(rùn)性腺癌88例。所選患者臨床資料完整，術(shù)后隨訪5～66個(gè)月，并有準(zhǔn)確隨訪記錄和隨訪時(shí)間。

1.2 方法 所有病理標(biāo)本分別進(jìn)行HE染色和彈力纖維染色，依據(jù)彈力纖維在肺腺癌組織中分布量的多少，將彈力纖維量的表達(dá)分為Ⅰ級(jí)、Ⅰ級(jí)、Ⅲ級(jí)3個(gè)等級(jí)[10]。通過(guò)單因素分析比較3個(gè)等級(jí)的患者臨床特征和總生存率的差異，通過(guò)COX多因素法分析彈力纖維等級(jí)與預(yù)后的關(guān)系。

1.2.1 HE及彈力纖維染色 所有病理標(biāo)本，連續(xù)石蠟切片，厚度為4 μm，分別進(jìn)行HE染色和彈力纖維染色。蘇木素、伊紅試劑和彈力纖維染色試劑均購(gòu)于珠海貝索(BASO)生物技術(shù)有限公司。HE染色法：病理切片脫蠟至水，蘇木素染色5 min后水洗，伊紅10 s后水洗，脫水、透明后封片。彈力纖維染色法：切片脫蠟至水，高錳酸鉀溶液氧化5 min，草酸溶液漂白2～3 min，95%酒精稍洗，浸入Elastin染液中4 h(加蓋，避免染液揮發(fā))，95%酒精分化，用Van Gieson染液染30 s，傾去染液，不可水洗，95%酒精快速分化數(shù)秒，酒精脫水后塑膠封片。

1.2.2 結(jié)果判讀 所有HE切片均由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師依據(jù)2015年WHO肺癌分類(lèi)進(jìn)行肺腺癌的病理診斷[9]。所有彈力纖維染色切片均由病理科醫(yī)師閱片，根據(jù)腫瘤間質(zhì)彈力纖維量的表達(dá)情況，將其分為3個(gè)等級(jí)[10]：I級(jí)為腺癌間質(zhì)中彈力纖維完全缺失或少量、細(xì)小、斷裂，II級(jí)為腺癌間質(zhì)中彈力纖維輕度增生、排列尚整齊，III級(jí)為彈力纖維連續(xù)完整且明顯增生。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較患者的臨床資料(年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)分期、病理類(lèi)型)通過(guò)彈力纖維染色，觀察，彈力纖維分布量的等級(jí)例數(shù)。

1.4 隨訪 所選病例主要通過(guò)電話隨訪患者的預(yù)后。記錄有無(wú)復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)時(shí)間及死亡時(shí)間，計(jì)算患者的無(wú)病生存期和總生存期。隨訪截止時(shí)間為2017年8月1日，隨訪時(shí)間5～66個(gè)月。無(wú)病生存期(disease-free survival ，DFS)為患者根治性手術(shù)之日起至患者局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或由于腫瘤復(fù)發(fā)引起的死亡時(shí)間，總生存期(overall survival，OS)為腫瘤確診之日起至患者死亡的時(shí)間[11]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)。生存率采用Kaplan - Meier法進(jìn)行分析，采用Log-rank法檢驗(yàn)生存曲線的比較。采用Cox回歸模型進(jìn)行肺腺癌預(yù)后的多因素分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組彈力纖維分級(jí)患者臨床特征比較 123例肺腺癌組織中，彈力纖維I級(jí)60例(48.78%)，II級(jí)23例(18.70%)，III級(jí)40例(32.52%)；I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)彈力纖維量的表達(dá)與患者的年齡、性別，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。彈力纖維在不同腫瘤直徑中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。彈力纖維不同淋巴結(jié)分期中， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。彈力纖維在不同病理類(lèi)型中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

2.2 患者生存率比較和預(yù)后的COX多因素分析

2.2.1 不同彈力纖維分級(jí)患者生存率比較 隨訪的123例患者中，死亡32例，存活91例。不同等級(jí)彈力纖維的無(wú)病生存曲線顯示，彈力纖維III級(jí)的無(wú)病生存率高于I級(jí)、II級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)圖1；不同等級(jí)彈力纖維的總生存曲線顯示，I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)總生存率分別為60.00%、79.30%、95.00%，彈力纖維III級(jí)的總生存率高于I級(jí)、II級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)圖2。

2.2.2 COX多因素分析 將病例資料中的年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)分期、病理類(lèi)型和彈力纖維分級(jí)均納入影響因素中，分析結(jié)果顯示腫瘤直徑、淋巴結(jié)分期均是影響肺腺癌DFS、OS的獨(dú)立預(yù)后因素(P<0.05)；彈力纖維分級(jí)不是影響肺腺癌DFS、OS的獨(dú)立預(yù)后因素(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表1 3組彈力纖維分級(jí)患者臨床特征比較

圖1 彈力纖維分級(jí)在肺腺癌中的無(wú)病生存曲線

圖2 彈力纖維分級(jí)在肺腺癌中的總生存曲線

影響因素DFSOSHR95%CIP值HR95%CIP值病理類(lèi)型6.613E40.000～6.84E1450.9471.606E50.000～1.06E1580.947彈力纖維分級(jí)0.7830.450～1.3630.3880.6970.383～1.2670.237腫瘤直徑4.6161.927～11.0590.0015.6932.271～14.2710.000年齡1.2790.587～2.7880.5361.3190.593～2.9320.497性別1.1000.516～2.3470.8051.1470.537～2.4490.724淋巴結(jié)分期1.8961.110～3.2390.0192.0011.144～3.5000.015

注：DFS為無(wú)病生存期，OS為總生存期

3 討論

彈力纖維是人體的三大纖維之一，是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成成分，在組織中呈細(xì)絲狀的多層分布。Fukushima等[12]在肺癌組織的研究表明，彈力纖維在腺癌中顯著增生。在Xu等[10]的研究中，>95%的肺原位腺癌均高表達(dá)彈力纖維為+～++。本組實(shí)驗(yàn)表明， 123例肺腺癌患者中，60例(48.78%)彈力纖維完全缺失或少量、細(xì)小、斷裂(I級(jí))，23例(18.70%)彈力纖維輕度增生、排列尚整齊(II級(jí))，40例(32.52%)彈力纖維連續(xù)完整且明顯增生(III級(jí))，彈力纖維在肺腺癌組織中量的分布呈等級(jí)分布的現(xiàn)象與相關(guān)研究[16]結(jié)果一致。

本研究比較不同彈力纖維等級(jí)的生存率證實(shí)，彈力纖維III級(jí)的生存率顯著高于I級(jí)、II級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示在肺腺癌組織中彈力纖維明顯增生的患者預(yù)后較好，這與謝惠康[13]研究結(jié)果相一致；同時(shí)表明纖維組織增生是機(jī)體的一種保護(hù)反應(yīng)，可以做為綜合判斷患者預(yù)后的指標(biāo)之一[14]。目前研究[15]認(rèn)為，彈力纖維是由微原纖維和均質(zhì)狀物兩種成分構(gòu)成，其中原纖維蛋白是微原纖維的主要構(gòu)成成分，并被認(rèn)為在腫瘤侵襲中起著至關(guān)重要的作用。均質(zhì)狀物是一種特殊結(jié)構(gòu)的彈性蛋白，彈性蛋白在一定程度上起著支撐的作用，當(dāng)腫瘤發(fā)生浸潤(rùn)時(shí)，對(duì)彈性蛋白發(fā)生了破壞作用，進(jìn)而產(chǎn)生彈力纖維的斷裂和破壞。

本研究采用COX多因素分析將病例資料中的年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)分期、病理類(lèi)型和彈力纖維分級(jí)均納入影響因素中，結(jié)果顯示，彈力纖維分級(jí)不是影響肺腺癌DFS、OS的獨(dú)立預(yù)后因素(P>0.05)，這與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究[13]結(jié)果相反，國(guó)外暫無(wú)相關(guān)研究。分析其原因，國(guó)內(nèi)研究[13]所選擇的肺腺癌病例均為浸潤(rùn)性肺腺癌，本次研究的肺腺癌病理類(lèi)型中包括原位腺癌和浸潤(rùn)性肺腺癌，致使得出的結(jié)果不一致。同時(shí)，因本次研究的病例數(shù)相對(duì)較少，后續(xù)有待更多的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行研究證實(shí)。

綜上所述，彈力纖維增生是機(jī)體的一種保護(hù)反應(yīng)，彈力纖維明顯增生的肺腺癌患者預(yù)后較好，但不是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，通過(guò)對(duì)肺腺癌組織中彈力纖維分布的觀察和分級(jí)，有助于評(píng)估腫瘤侵襲程度和患者的臨床預(yù)后，更好的指導(dǎo)臨床治療。