日糧添加坡縷石對(duì)1～21 d肉雞生長(zhǎng)性能、腸道免疫、抗氧化性能和腸道形態(tài)的影響

李 偉，王小建，劉耀東

（南陽(yáng)農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南南陽(yáng) 473003）

坡縷石是一種天然鎂鋁硅酸鹽黏土礦物質(zhì)，表面具有活性羥基和納米級(jí)晶體形態(tài)（Bergaya和Lagaly，2013）。由于其特殊的棒狀晶體堆積結(jié)構(gòu)及納米級(jí)尺寸，具有多氣孔、高縱橫比、離子交換和吸附能力（Murray，2000），可以作為添加劑用于增加顆粒飼料的黏結(jié)性。已有研究表明，坡縷石可以作為脫毒劑緩解黃曲霉污染的飼料對(duì)斷奶仔豬造成的影響（黃梓平等，2002）。此外，日糧添加坡縷石能改善斷奶仔豬腸道的完整性和屏障功能，其降低了血漿內(nèi)毒素濃度和二胺氧化酶（DAO）的活性，改善腸道形態(tài)（Zhang等，2013）。在蛋雞日糧中添加0.2%的坡縷石可以提高產(chǎn)蛋性能，促進(jìn)消化酶的分泌（Qiao等，2015）。有研究表明，日糧添加坡縷石可以調(diào)控盲腸微生物菌群，同時(shí)黏土類礦物，如沸石粉、蒙脫石、高嶺土等對(duì)動(dòng)物的免疫性能也有促進(jìn)作用（Almeida等，2014；Wu等，2013；Song等，2012）。目前關(guān)于坡縷石對(duì)幼齡家禽的研究報(bào)道較少，因此，本試驗(yàn)以1～21 d的AA肉雞為研究對(duì)象，在玉米-豆粕型日糧中添加0.4%或0.8%坡縷石，考察其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫、抗氧化性能和腸道微生物菌群的影響，為其在家禽中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧及分組 試驗(yàn)用坡縷石（主要成分為二氧化硅、三氧化二鋁、硫酸亞鐵和氧化鎂等）購(gòu)自聊城盛基農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司。選取1日齡雌性AA肉仔雞630只作試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為3組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)35羽。各組日糧分別在玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧中添加0、0.4%和0.8%坡縷石。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 飼養(yǎng)管理 肉雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，雞舍內(nèi)用紅外線保溫?zé)舯兀谝恢軠囟仍冢?2±1）℃，之后每周調(diào)節(jié)溫度直至溫度控制在22℃左右，舍內(nèi)相對(duì)濕度控制在65%，光照采用人工光照和自然光照結(jié)合，光照強(qiáng)度控制在30 lx。試驗(yàn)雞只全期自由采食、飲水，按照商品肉雞免疫程序進(jìn)行免疫，雞舍每周進(jìn)行消毒。試驗(yàn)時(shí)間為1日齡到21日齡。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)期間每周按重復(fù)記錄肉雞的飼料消耗量，在試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早上對(duì)試驗(yàn)雞只按重復(fù)進(jìn)行稱重，記錄期末體重，計(jì)算試驗(yàn)期間各組平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.3.2 免疫、抗氧化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇4只雞進(jìn)行屠宰，收集空腸、回腸和盲腸。采用試劑盒法測(cè)定空腸和回腸免疫性能指標(biāo)IgG、IgM、SIgA的含量及抗氧化性能指標(biāo)超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3.3 絨毛形態(tài)及盲腸微生物含量 試驗(yàn)雞只屠宰前翅下靜脈采血5 mL用于分離血清，血清二胺氧化酶活性采用南京建成生物研究所的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。參考Hu等（2013）研究報(bào)道測(cè)定絨毛形態(tài)。參考Huang等（2012）研究方法檢測(cè)腸道微生物數(shù)量。

1.3.4 腸道相關(guān)基因表達(dá) 參考Cheng等（2016）研究方法設(shè)計(jì)相關(guān)基因的引物，采用熒光定量PCR檢測(cè)腸道相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用使用Excel處理后，采用SAS單因子方差分析進(jìn)行分析，各組均值采用Tukey’s多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧不同坡縷石水平對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，日糧添加0.4%或0.8%坡縷石對(duì)肉雞平均日增重、平均日采食量及料重比均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表2 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 日糧不同坡縷石水平對(duì)肉雞腸道免疫性能的影響 由表3可知，對(duì)照組與處理1組、處理2組對(duì)空腸IgG、IgM和SIgA的含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。處理2組較對(duì)照組顯著提高了肉雞回腸IgM和SIgA的含量（P＜0.05），而處理1組與處理2組對(duì)回腸IgM和SIgA的含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。日糧坡縷石水平對(duì)回腸IgG含量的影響無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道免疫性能的影響μg/mg

2.3 日糧不同坡縷石水平對(duì)肉雞腸道抗氧化性能的影響 肉雞抗氧化性能測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，處理2組空腸SOD含量顯著高于對(duì)照組和處理1組（P＜0.05），處理2組較對(duì)照組顯著提高了回腸SOD含量（P＜0.05）。各組對(duì)空腸和回腸MDA含量的影響均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表4 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道抗氧化性能的影響

2.4 日糧不同坡縷石水平對(duì)肉雞腸道形態(tài)的影響 由表5可知，對(duì)照組和處理1組血清二胺氧化酶的濃度顯著高于處理2組（P＜0.05）。與對(duì)照組和處理1組相比，處理2組顯著提高了空腸絨毛高度和杯狀細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05）。處理1組和處理2組較對(duì)照組提高了回腸絨毛高度/隱窩深度（P＜0.05）。處理2組較處理1組和對(duì)照組顯著提高了回腸絨毛高度（P＜0.05），處理1組和處理2組回腸絨毛高度/隱窩深度、杯狀細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表5 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道形態(tài)的影響

2.5 日糧不同坡縷石水平對(duì)肉雞盲腸細(xì)菌含量和相關(guān)基因表達(dá)的影響 由表6可知，對(duì)照組較各處理組顯著提高了盲腸沙門(mén)氏菌含量（P＜0.05），而對(duì)照組和試驗(yàn)組對(duì)盲腸乳酸桿菌和大腸桿菌含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。處理1組較對(duì)照組和處理2組顯著提高了空腸TF2基因相對(duì)表達(dá)水平（P＜0.05），各組對(duì)空腸其他基因的相對(duì)表達(dá)水平無(wú)顯著影響（P＞0.05）。處理2組較對(duì)照組和處理1組顯著提高了回腸MUC2和ZO-1基因的相對(duì)表達(dá)水平（P＜0.05），處理1組和處理2組較對(duì)照組顯著降低了回腸TNF基因的相對(duì)表達(dá)水平（P＜0.05）。

表6 日糧添加坡縷石對(duì)盲腸細(xì)菌含量及腸道相關(guān)基因表達(dá)的影響

3 討論

3.1 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.4%或0.8%坡縷石對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。Cheng等（2016）研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，玉米豆粕型日糧添加0.1%坡縷石對(duì)42 d肉雞期末體重和料重比無(wú)顯著影響，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。Qiao等（2015）發(fā)現(xiàn)，日糧0.2% g/kg坡縷石可以提高蛋雞產(chǎn)蛋率，各研究結(jié)果的差異可能與試驗(yàn)動(dòng)物、試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間、添加劑量及坡縷石的形態(tài)有關(guān)。

3.2 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道免疫和抗氧化性能的影響 免疫應(yīng)答反應(yīng)初期，大多數(shù)免疫球蛋白屬于IgM，其具有引起免疫反應(yīng)的能量，可以溶解抗原，通過(guò)吞噬作用清除抗原進(jìn)而提高免疫性能（Dibner等，1998）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以提高腸道IgM和SIgA的含量。SIgA的主要功能是限制病原微生物和抗原進(jìn)入黏膜屏障，坡縷石可以提高免疫球蛋白的分泌，其粘土成分可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，增加多核白細(xì)胞、血清抗體的產(chǎn)生及脾臟的吞噬功能（Islam等，2014）。SOD是機(jī)體總清除氧自由基的抗氧化酶之一，本研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以提高腸道SOD的活性，降低肉雞肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化，從而降低MDA含量（Wu等，2013）。

3.3 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道形態(tài)和細(xì)菌含量的影響 血清二胺氧化酶的活性可以代表腸道損傷程度及黏膜的發(fā)育情況（Li等，2002）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以降低血清二胺氧化酶的活性，這與試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)坡縷石提高了絨毛高度及絨毛高度/隱窩深度。Qiao等（2015）研究指出，0.2%坡縷石可以提高蛋雞絨毛的完整性，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。已有研究表明，幾種黏土在體外表現(xiàn)出抗菌活性，在體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)粘土對(duì)動(dòng)物腸道菌群組成具有調(diào)節(jié)作用（Haydel等，2008 ；Otto，2014），如降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，提高嗜酸乳桿菌數(shù)量（Wu等，2013）。

3.4 日糧添加坡縷石對(duì)肉雞腸道相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的影響 腸道中主要的粘膜蛋白MUC2可以在腸道與上皮之間形成一層物理屏障（Linden等，2008）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石提高了杯狀細(xì)胞的數(shù)量，而杯狀細(xì)胞的形成與MUC2和TF2的基因表達(dá)密切相關(guān)，這與坡縷石的粒徑和腸道黏膜分泌蛋白有關(guān)（Reichardt等，2009）。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，坡縷石可以降低IFN基因mRNA相對(duì)表達(dá)水。González等（2014）研究報(bào)道，沸石粉可以通過(guò)降低IL的產(chǎn)生，具有抗炎作用。Wu等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，坡縷石可以作為抗炎劑降低脂多糖誘導(dǎo)應(yīng)激的肉雞腸道滋養(yǎng)層的活化，抑制血漿和腸道炎癥介質(zhì)的分泌；腸道功能的完整性和通透性可能受到多種細(xì)胞共同調(diào)節(jié)，如腫瘤壞死因子TNF、干擾素IFN及各種白細(xì)胞介素等，這些炎癥介質(zhì)可以釋放到細(xì)胞內(nèi)，具有緊密連接蛋白和調(diào)控腸道緊密連接的功能，通過(guò)血液循環(huán)作用到腸上皮細(xì)胞，進(jìn)而維持腸屏障功能的完整性，這也與IFN mRNA表達(dá)水平下調(diào)有關(guān)。

4 結(jié)論

玉米-豆粕型日糧中添加0.4%或0.8%坡縷石可以提高1～21 d肉雞腸道免疫和抗氧化性能，改善腸道屏障功能，對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能無(wú)負(fù)面影響。