白及顆粒對家兔鹽酸吸入性肺損傷預防作用的研究

辛田田，杜玲玲，張曉艷，賀外信

(陜西省延安市人民醫院，陜西 延安 716000)

鹽酸吸入性肺損傷是一種多發于急、危重癥患者的疾病，主要是由于胃液吸入肺中造成，嚴重者可導致死亡[1-2]。目前，臨床對于該疾病并無根治手段，常采用外源性肺泡表面活性物質等藥物進行治療，雖具有一定的療效，但仍存在效果不穩定、部分患者療效不佳等情況[3-4]。而中醫藥在多種肺部疾病的預防和治療中具有較好的效果，故篩選有效中藥治療該病可能是途徑之一[5]。白及顆粒具有補肺、收斂及止血的功效，主要用于慢性氣管炎、肺結核等呼吸道疾病的治療[6]。本研究觀察了白及顆粒對家兔鹽酸吸入性肺損傷的預防作用，期望為該疾病的預防提供一定的實驗依據，現報道如下。

1 實驗資料

1.1藥物及試劑 白及顆粒購自云南省曲靖藥業有限公司，批號：2014120934；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)及C反應蛋白(CRP)檢測所需試劑盒購自美國SIGMA，批號分別為9801231，98223103及98120934；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)檢測所用試劑盒均購自美國博大生物科技公司，批號分別為89110923，89119823及8978245。蘇木精-伊紅染色(HE染色)所需試劑購自武漢博士德公司，批號：2014110923。

1.2實驗動物及分組 雄性新西蘭大白兔40只,體質量1.6～2.2 kg,購自西安交通大學藥學院實驗動物中心，動物合格證編號：SCXK(陜)2014-1216,并由該院動物飼養中心代養。實驗開始前，將上述家兔置于實驗環境適應性飼養2 d，飼養條件：12 h光照/12 h黑暗,55%濕度,25 ℃,禁食不禁水。將上述40只新西蘭大白兔隨機分為空白組、模型組、白及顆粒高劑量組、白及顆粒中劑量組及白及顆粒低劑量組，每組8只。

1.3給藥劑量 根據白及顆粒的藥物說明書，該藥物的治療劑量為15 g/d，結合文獻[7]中家兔使用劑量轉換公式：家兔劑量=3.27×成人劑量(g/kg)，成人體質量以70 kg計，故本研究家兔正常劑量=15 g/70 kg×3.27=0.70 g/kg，選取該劑量為中劑量，并設置2倍正常劑量為高劑量(1.4 g/kg)，0.5倍正常劑量為低劑量(0.35 g/kg)。

1.4實驗方法 采用李冰冰等[8]設計的吸入性肺損傷預防實驗方法，白及顆粒高、中、低劑量組分別給予1.4 g/kg、0.70 g/kg、0.35 g/kg的白及顆粒灌胃，空白組及模型組則均給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續30 d。于末次灌胃12 h后，采用25%氨基甲酸乙酯耳緣靜脈注射對家兔進行麻醉，并依次行氣管切開與頸總動脈插管，待穩定10 min后對各組家兔行純氧機械通氣，通氣參數：吸呼比為1∶2，呼吸頻率為13次/min，潮氣量為10 mL/kg。穩定15 min后，向白及顆粒各劑量組及模型組家兔氣管中注入pH 1.0的鹽酸溶液(2.0 mL/kg)，注入完成后依上述通氣條件進行純氧定壓機械通氣，每10 min檢測1次家兔血氣值，至p(CO2)持續小于20 kPa為造模成功；空白組則注入等量生理鹽水。造模結束后，對各組家兔繼續進行5 h的純氧機械通氣，然后利用HU-90型全自動血氣分析儀(日本島津)檢測各組家兔p(O2)、p(CO2)及pH值。檢測結束后，采用10%氯化鉀處死各組家兔，在無菌條件下迅速取其左右側肺。左側肺采用玻璃勻漿器制備組織勻漿，利用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測CRP、IL-6、TNF-α及CAT含量，利用黃嘌呤氧化酶法、化學比色法分別檢測SOD、GSH-Px含量；取右側肺置于-80 ℃條件下保存，按照常規病理學處理方法，依次進行切片、脫色、烤片及HE染色，在光學顯微鏡下觀察其病理變化。

2 結 果

2.1各組家兔血氣指標比較 空白組、白及顆粒各劑量組p(O2)及pH均明顯高于模型組而p(CO2)均明顯低于模型組，且白及顆粒高劑量組p(O2)及pH均明顯高于白及顆粒低劑量組，而p(CO2)明顯低于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組p(O2)及pH均明顯低于空白組而p(CO2)均明顯高于空白組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 各組家兔血氣指標比較

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05；1 mmHg=0.133 kPa。

2.2各組家兔肺勻漿中炎性因子含量比較 空白組、白及顆粒各劑量組肺勻漿中CRP、IL-6、TNF-α含量均明顯低于模型組，且白及顆粒高劑量組上述因子含量均明顯低于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組各因子含量均明顯高于空白組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表2。

表2 各組家兔肺勻漿中炎性因子含量比較

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05。

2.3各組家兔肺勻漿中氧化應激因子含量比較空白組、白及顆粒各劑量組肺勻漿中SOD、CAT及GSH-Px含量均明顯高于模型組, 且白及顆粒高劑量組上述因子含量均明顯高于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組各因子含量均明顯低于空白組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表3。

組別nSODCATGSH-Px空白組8112.13±9.29①22.60±2.11①182.12±24.23①模型組851.22±6.306.89±0.6171.77±33.80白及顆粒低劑量組873.34±6.85①③11.36±1.15①③92.14±9.98①③白及顆粒中劑量組881.31±8.02①③15.92±1.47①③119.24±11.03①③白及顆粒高劑量組8100.39±9.16①②③17.69±1.54①②③157.45±15.32①②③

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05。

2.4各組家兔肺組織病理學比較 HE染色顯示，空白組家兔肺組織結構清晰完整，肺泡壁光滑且肺泡腔無白細胞及滲出液；模型組家兔肺泡腔中存在大量炎性細胞浸潤，肺泡壁增厚且充血嚴重，肺泡間隔不均；白及顆粒各劑量組家兔肺泡均呈不同程度的萎陷、組織水腫及炎性浸潤，但程度明顯輕于模型組，且白及顆粒高劑量組明顯輕于中劑量組和低劑量組，而中劑量組明顯輕于低劑量組。見圖1～5。

3 討 論

鹽酸吸入性肺損傷是臨床麻醉及昏迷患者常見的并發癥之一，其主要發病機制為胃液倒吸入肺后，胃液中主要成分鹽酸對肺組織產生直接損傷，誘導患者肺血管內皮及肺泡內炎性細胞大量分泌并釋放白細胞介素等各類型炎性遞質，激活中性粒細胞及多形核白細胞并聚集于肺組織中，產生大量的活性氧自由基及蛋白酶等物質，導致患者肺部出現嚴重損傷，最終引起肺水腫、肺部氧合功能障礙及頑固性低氧等，直接威脅患者生命[9-11]。目前，臨床對于該疾病并無根治方法，常采用糖皮質激素及外源性肺泡表面活性物質等進行治療。Holms等[12]認為，可在鹽酸吸入性肺損傷高危人群中先使用藥物對可能發生的疾病進行預防，并通過該預防方法減輕鹽酸吸入后所產生的肺部損傷。

圖1 空白組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖2 模型組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖3 白及顆粒低劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖4 白及顆粒中劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖5 白及顆粒高劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

白及顆粒主要由白及、百合、海浮石、浙貝母、紫菀、百部、三七、桔梗、功勞木及甘草等藥材組成。現代藥學研究結果表明，白及中所含白及多糖具有較好的抗氧化應激活性，可有效緩解組織損傷[13]；百合中百合多糖則可抗炎、抗氧化，改善局部微循環[14]；浙貝母中多類黃酮成分能夠有效增加肺組織對局部炎性反應的耐受性[15]；三七中三七皂苷則可增加機體SOD等抗氧化應激因子的合成，改善氧自由基對損傷肺組織的損害[16]。鑒于白及顆粒具有較好的抗炎、抗氧化應激及肺部保護活性的化學成分基礎，筆者對其用于鹽酸吸入性肺損傷的預防作用進行了探討。

本研究采用的新西蘭家兔模型是鹽酸吸入性肺損傷的常用模型，與小鼠及大鼠相比較，盡管實驗成本增加，但具有更好的可操作性，實驗結果更為準確[17]。目前研究表明，急性肺損傷后，肺部CRP、IL-6及TNF-α等炎性因子的含量急劇增高，可進一步介導肺組織中脂類遞質及氧自由基的釋放，加速肺損傷[18]。SOD、CAT及GSH-Px均是機體重要的氧化應激指標，可有效清除機體氧自由基，緩解由于氧自由基所造成的機體損傷[19]。本實驗結果顯示，白及顆粒各劑量組p(CO2)和肺勻漿中IL-6、TNF-α、CRP含量均明顯低于模型組，p(O2)、pH和肺勻漿中SOD、CAT、GSH-Px含量均明顯高于模型組，且白及顆粒高劑量組p(CO2)和肺勻漿中IL-6、TNF-α、CRP含量均明顯低于白及顆粒低劑量組，p(O2)、pH和肺勻漿中SOD、CAT、GSH-Px含量均明顯高于白及顆粒低劑量組；肺組織病理切片觀察顯示白及顆粒各劑量組肺損傷情況明顯輕于模型組。提示白及顆粒可預防鹽酸吸入所致炎癥反應、氧化應激紊亂及肺部損傷。然而其具體作用機制尚不明確，預防效果的有效成分亦未研究清楚，對于藥物的物質基礎還有待進一步探索；另外本研究僅對該藥物的預防作用進行了探討，而對于其治療作用則未進行探討，與臨床實際應用仍存在著一定的差距，后續還需要對白及顆粒用于鹽酸吸入性肺損傷治療作用及其給藥方式進行進一步研究。