金虎退黃湯干預大鼠急性膽汁淤積肝損傷實驗研究*

何瑾瑜，董 璐，楊躍青，薛敬東

（陜西省中醫醫院，陜西 西安 710003）

膽汁淤積性肝病是指各種原因引起的膽汁形成、分泌和（或）膽汁排泄異常所致肝臟病變，最常見的臨床表現及體征為黃疸，同時常伴有一定程度的皮膚瘙癢、乏力等癥狀［1－2］，生化異常主要是堿性磷酸酶（ALP）、谷氨酰轉肽酶（GGT）及血總膽紅素（TBil）升高［3］。按照病因可分為肝細胞性膽汁淤積、膽管性膽汁淤積及混合性膽汁淤積［4］。目前，推薦只需符合生化指標ALP高于1．5倍正常上限值（ULN），且 GGT 高于 3 倍 ULN，便可確診［5］。中醫學對膽汁淤積性肝病并無認識，中醫典籍里也無專門記載，很難將其歸于某證，專家多認為應歸屬“黃疸病”范疇［6］。金虎退黃湯是陜西省名中醫薛敬東主任根據多年治療膽汁淤積性肝病的臨床經驗方，以整體觀念為指導，并運用中醫辨證論治的思想總結而得。濕邪阻滯、瘀血內結是導致該病最基本的中醫病因病機，病位可涉及肝、脾、腎、膽、胃等，病性多屬虛實夾雜，臨床表現為“濕－瘀－虛”的演變過程，但以濕邪、瘀血貫穿疾病始終。應以利濕退黃、活血化瘀為基本治療原則，自擬方以此選擇特異性中藥遣藥組方，臨床療效顯著。本研究中探討了自擬方金虎退黃湯對α－萘異硫氰酸酯（ANIT）誘導的急性肝內膽汁淤積性肝損傷大鼠的干預作用及作用機制?，F報道如下。

1 儀器、試藥與動物

1．1 儀器

7170型全自動生化分析儀（日立公司）；BP61型電子分析天平（萬分之一，德國賽多利斯公司）；Axioskop 40型光學顯微鏡（我院病理科提供）；NU－6832E型低溫冰箱（天肯貿易有限公司）。

1．2 試藥

ANIT（純度98%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；橄欖油（上海佳格食品有限公司）；桃仁 Prunus persica L．Batsch，紅花 Carthamus tinctorius L．，金錢草 Lysimachia christinae Hance，桂枝 Cinnamomum cassia Presl，虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb．et Zucc，梔子 Gardenia jasminoides Ellis購自北京同仁堂西大街店，盤龍七Hemsleya panlongqi購自西安市藥材市場，均由張瑞霞主任醫師鑒定為正品；生理鹽水（西安京西雙鶴藥業有限公司，批號為051005122）；10%水合氯醛（陜西中醫學院附屬醫院制劑中心，批號為20040420）；金虎退黃湯組方由薛敬東主任醫師提供，藥物由陜西省中醫醫院制劑室制備。

1．3 動物

SPF級健康雄性SD大鼠，4～5周齡，體質量130～180 g，共21只。由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，生產許可證號為SCXK（陜）2013－003。

2 方法與結果

2．1 方法

藥液制備：將ANIT溶于橄欖油中，配成質量分數為1．6%的ANIT橄欖油溶液。按照1／2處方量稱取藥材，分別按照8倍、6倍、4倍量加水煎煮3次，合并水煎液，濃縮，得質量濃度為1 g／mL的處方提取液。因實驗周期較長，處方提取液每周制備1次，于4℃冷藏保存，用前自然晾至室溫，備用。

實驗方法：將21只健康SD大鼠隨機分為空白組、模型組、實驗組，各7只，ANIT橄欖油量造模劑量為80 mg／kg。處方提取液成人給藥劑量為 110 g／d，按體表面積折合成的大鼠給藥量為9．9 g／kg。造模前，大鼠禁食過夜，造模后 2 h給藥。于0，7，14，21 d時空白組給予橄欖油（5 mL／kg），模型組給予ANIT橄欖油（劑量為 80 mg／kg），實驗組給予 ANIT 橄欖油（80 mg／kg）造模 ＋ 處方提取液（9．9 g ／kg）。期間，每天稱體質量，實驗組每天給藥1次；23 d時，空白組和模型組取血＋摘取各臟器稱質量，實驗組給藥2 h后取血＋摘取各器官稱質量。實驗期間，每天觀察各組大鼠的一般狀況，包括毛色、活動、飲水等，每天稱體質量，記錄其變化。末次造模后48 h，以10%水合氯醛（每100 g體質量0．33 mL）腹腔麻醉，腹主動脈采血4～5 mL，離心分離血清，采用全自動生化分析儀檢測血清相關生化指標，即丙氨酸氨基轉移酶 （ALT）、天門冬酸氨基轉移酶 （AST）、GGT、ALP、TBil、直接膽紅素（DBil）、總膽汁酸（TBA）。取血后處死大鼠，摘取所有大鼠肝臟，每塊肝臟取1 cm大小肝組織3塊，10%甲醛固定，包埋切片，常規HE染色，光鏡觀察病理變化。

2．2 結果

一般狀況：實驗中大鼠的造模、給藥全過程均順利進行，未發生大鼠死亡等不良情況。實驗前，所有大鼠呼吸、行為活動、腺體分泌、糞便均正常，實驗期間未見顯著變化；除空白組外，其余大鼠造模后均出現毛色偏黃、無光澤。

體質量：每天稱體質量，記錄其變化，詳見表1?？梢?，各組大鼠體質量均緩慢增加，經方差齊性檢驗，差異無統計學意義（P ＞0．05）。

表1 各組大鼠體質量變化比較（X ± s，g）

血清學指標：結果見表2。模型組與空白組生化指標相比，經方差齊性檢驗，差異有統計學意義（P＜0．01），表明造模成功。與模型組相比，經方差齊性檢驗，實驗組TBil，DBil，TBA，AST，ALP 均顯著降低（P ＜ 0．05），但ALT與 GGT無顯著差異（P ＞0．05）。

肝組織病理變化光鏡觀察：由圖1可知，空白組大鼠肝臟組織病理未見異常，小葉及細胞形態未見異常，匯管區未見炎性細胞浸潤，未見肝竇擴張，毛細膽管未見膽汁淤積。模型組大鼠肝臟組織病理存在明顯異常，小葉壞死灶較多，細胞存在明顯的變性，且排列紊亂，匯管區可見大量炎性細胞浸潤，毛細膽管可見明顯的膽汁淤積，且存在膽管增生。實驗組大鼠肝臟組織病理存在異常，小葉可見少量壞死灶，膽管增生，毛細膽管膽汁淤積明顯，匯管區有少量炎性細胞浸潤。

表2 大鼠血液生化指標變化比較（X ± s）

圖1 各組大鼠肝組織形態學切片（HE染色，10×10）

3 討論

ANIT是一種肝毒性物質，主要影響膽管上皮細胞和肝細胞，導致肝內膽汁淤積性肝損傷，表現為血液中膽紅素和轉氨酶的顯著增高［7］，符合臨床患者膽汁淤積表現。本研究結果表明，金虎退黃湯能有效改善ANIT誘導的急性膽汁淤積肝損傷，包括減少AST與ALP活性，降低血清中DBil，TBil，TBA的含量，減輕肝臟的病理性改變。

方中虎杖性微寒，味微苦，歸肝、膽經，利濕退黃，活血化瘀，是治膽退黃的專藥，為君藥［8］。金錢草性微寒，歸肝、膽經，清熱利濕，活血退黃，臨床多用于各型黃疸病及肝病的治療［9］；梔子性寒，味苦，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血散瘀的功效，與君藥配伍，可加強利濕、退黃、散瘀；桃仁與紅花，均入肝經，均具有活血祛瘀之功效。四者為臣藥，有助君藥利濕退黃、活血化瘀之功效。盤龍七［10］是陜西民間用藥，性平，味澀、微苦，入肝經，活血除濕，補脾健胃，為佐藥，一可取其活血利水之功效，以增強療效，二是因肝病常易犯脾胃，故應注重補脾健胃，收治肝之病，當先實脾之功［10］。桂枝性溫，味辛，行血脈，消瘀血，助氣化而行津液的作用，為使藥［9，11］。方中7味中藥配伍運用，可獲良效。

本研究結果顯示，與空白組相比，模型組大鼠膽紅素升高以DBil為主，伴ALP，GGT，TBA的升高，具有膽汁淤積的特征；肝臟組織病理切片可見模型組大鼠肝臟組織病理存在明顯異常，表明膽汁淤積模型造模成功。與模型組比較，實驗組能有效降低膽汁淤積大鼠AST，ALP，TBil，DBil等相關生化指標水平；同時，肝臟組織病理顯示，實驗組大鼠肝小葉可見少量壞死灶，匯管區有少量炎性細胞浸潤，表明金虎退黃湯能有效減少大鼠炎性細胞浸潤，并有抑制肝細胞壞死的作用。

綜上所述，金虎退黃湯可能通過抑制炎性反應及肝細胞壞死達到退黃、降酶、修復肝細胞損傷的作用。但具體是何種炎性因子參與調節作用，以及其分子生物學機制，仍有待后續研究進一步探索。