兒童哮喘發(fā)作期血清調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞表達分析

郝亮亮， 趙雅娟， 楊曉彤， 李哲

現(xiàn)代醫(yī)學研究顯示，支氣管哮喘發(fā)生、進展與體內各種細胞免疫失衡關系密切，屬于祖國傳統(tǒng)醫(yī)學“哮病”范疇[1-3]。兒童時期是支氣管哮喘疾病好發(fā)年齡段，較為常見的支氣管哮喘中醫(yī)證型為寒哮證和熱哮證[4-5]，但迄今為止，國內涉及不同中醫(yī)證型的支氣管哮喘患兒免疫學相關研究報道不多。為此，我們選擇了一組近期來本院就診和住院治療的寒哮證和熱哮證患兒為對象，觀察血清調節(jié)性T細胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)表達濃度，并與同期參加體檢結論健康兒童(對照組)比較，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年10月至12月沈陽市兒童醫(yī)院收治的支氣管哮喘患兒55例為研究對象，根據(jù)臨床表現(xiàn)所屬的中醫(yī)證候類型分為寒哮證組26例和熱哮證組29例。同期選取參加體檢結論健康兒童為對照組28例。3組兒童在年齡、性別方面比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 3組對象基線參數(shù)資料比較

1.2 診斷標準

1.2.1 西醫(yī)診斷標準 參照中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組2008年修訂的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》關于兒童支氣管哮喘的診斷標準[6]。

1.2.2 中醫(yī)辨證標準 參照《中醫(yī)兒科學》[7]和其他文獻[8]擬定中醫(yī)辨證分型標準，主癥:(1)反復發(fā)作、喘促氣急；(2)喉間痰鳴；(3)咳嗽。次癥：(1)寒性哮喘：①形寒怕冷；②鼻塞、涕清或有噴嚏；③痰白、易咯、泡沫多；④渴喜熱飲或不渴；⑤無汗；⑥大便溏薄、小便清長；⑦舌淡紅；⑧脈浮緊或浮滑、舌苔薄白或白滑、指紋紅。(2)熱性哮喘：①面赤身熱；②鼻塞、涕濁；③痰多、黏濁稠厚、色黃；④煩躁不寧；⑤口渴喜飲；⑥大便干、小便赤黃；⑦舌質紅；⑧苔黃膩或薄黃、脈滑數(shù)或浮數(shù)、指紋紫。入選患兒具備主癥3項加次癥4項，同時參考舌苔脈象、指紋，即可明確證型。

1.3 納入標準 (1)符合兒童支氣管哮喘的中西醫(yī)診斷標準；(2)病情為哮喘急性發(fā)作期；(3)年齡3～14歲；(4)患兒家屬知情同意。

1.4 排除標準 (1)近期患有急、慢性感染性疾病者；(2)心、肝、腎功能異常者；(3)近期接受過激素或免疫抑制劑治療者。

1.5 外周血調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞表達水平測定 各組入選對象均在空腹8 h后采集靜脈血8 mL，然后高速離心、分離血清，并保存于-18 ℃低溫冰箱待檢。各類T細胞濃度檢測機器采用美國FC-500-M型PL流式細胞儀，調節(jié)性T細胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)檢測使用E-Bioscience公司提供的試劑盒；輔助性T細胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)檢測使用北京江晨宏偉生物科技有限責任公司提供的試劑盒。操作分別依據(jù)各試劑盒使用說明書進行。

2 結果

2.1 3組研究對象血清調節(jié)性T細胞濃度比較 見表2。

表2 3組研究對象血清調節(jié)性T細胞表達濃度比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與寒哮證組比較，bP<0.05。

表2結果表明，寒哮證組和熱哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg濃度顯著低于對照組，寒哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg濃度顯著低于熱哮證組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 3組研究對象血清輔助性T細胞濃度比較 見表3。

表3 3組研究對象血清輔助性T細胞表達濃度比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與寒哮證組比較，bP<0.05。

表3結果表明，寒哮證組和熱哮證組血清CD4+濃度顯著高于對照組，而血清CD8+濃度及CD4+/CD8+比值均顯著低于對照組；寒哮證組血清CD4+和CD8+濃度顯著低于熱哮證組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

祖國傳統(tǒng)醫(yī)學認為“哮病”的宿根歸結于“伏痰”，也就是“痰濁內伏”和“膈有膠固之痰”，病機是伏痰遇感后引觸，痰隨氣長，氣被痰所阻，相互黏結，壅塞于氣道后致病[9-10]。“哮病”發(fā)作期中，素體陽虛，外感于寒為冷哮；素體陽盛，外感于熱為熱哮，并分別以“寒痰證”和“熱痰證”進行辨證醫(yī)治。

現(xiàn)代醫(yī)學認為，支氣管哮喘發(fā)病過程由T細胞參與，特別是調節(jié)性T細胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)[10-13]。CD4 CD25+Treg屬于CD4+中一個亞型，主要功能抑制自身反應性T細胞及激活傳統(tǒng)T細胞，促進特定細胞因子分泌等；CD4+CD25+Foxp3+Treg屬于X染色體結構中Foxp3轉錄因子，提供CD4 CD25+Treg成長、發(fā)育及發(fā)揮作用必需能量。哮喘患兒外周血中CD4 CD25+Treg表達數(shù)量明顯下降，誘導機體對自身組織細胞免疫耐受能力下降，并抑制了Th1細胞優(yōu)勢表達，Th1/Th2明確失衡，促成了兒童哮喘發(fā)病。它們之間的平衡與表達濃度影響著該病發(fā)生與發(fā)展。迄今為止，一些抗哮喘藥，包括支氣管舒張劑(β-受體拮抗劑和抗膽堿能藥)、抗炎癥藥(類固醇激素、白細胞介素拮抗劑和巨細胞穩(wěn)定劑)可快速舒張氣道平滑肌，抑制局部炎癥，療效明顯。但停藥后病情反復、長期用藥毒、副作用明顯。近年來，一些研究證實了中藥(包括復方、單味藥、單體)能通過調節(jié)T細胞免疫而達到治療目的[15-17]。因此，調查患兒發(fā)作期血清調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞表達濃度，探討不同證型“哮癥”患兒的免疫學發(fā)病機制很有意義。我們選擇了一組近期來我院就診和住院治療的寒哮證和熱哮證患兒為對象，觀察其急性發(fā)作期血清調節(jié)性T細胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)表達濃度，并與同期參加體檢結論健康兒童(對照組)比較。研究發(fā)現(xiàn)，寒哮證組和熱哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表達濃度均明顯偏低，同時，寒哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表達濃度也明顯低于熱哮證組。兩組證型患兒血清CD4+表達濃度均明顯高于對照組，而CD8+表達濃度及CD4+/CD8+比值均明顯低于后者，同時，寒哮證組血清CD4+和CD8+表達濃度均明顯低于熱哮證組。這些外周血調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞變化與國內一些涉及哮喘成年患者的同類研究[18-19]結論一致，提示寒哮證和熱哮證患病兒童們存在著明確的血清調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞表達異常，且以寒哮證患兒更為顯著。

鑒于寒哮證和熱哮證患兒外周血存在著明確的調節(jié)性T細胞和輔助性T細胞異常表達失衡，這些表現(xiàn)差異可作為“哮病”各證型兒童的微觀辨證指標及治療選擇及療效評估的判定標識。