一種中草藥成分皮膚抑菌劑抑菌性能和毒理學安全性研究

武昌俊 李舜 蔡標 戴陳偉 王超 周秀紅 童琳

摘 要 目的：研究一種含多種中草藥成分皮膚抑菌劑的抑菌性能及其毒理學安全性。方法：采用抑菌試驗、穩定性試驗和動物毒理學試驗方法，對該皮膚抑菌劑的抑菌性能及其毒性進行實驗室研究。結果：該皮膚抑菌劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色假絲酵母的抑菌圈直徑均大于7 mm，抑菌效果顯著；于37 ℃、相對濕度為75%的條件下放置3個月后，抑菌性能與存放前基本一致；皮膚刺激指數和眼刺激指數均為0，刺激反應強度均為無刺激性；陰道黏膜刺激指數為0.89，刺激反應強度為無刺激性。結論：該皮膚抑菌劑對細菌和真菌均具有良好的抑菌性能，效果穩定，對人體安全、無刺激性。

關鍵詞 皮膚抑菌劑 中草藥 抑菌性能 安全性

中圖分類號：R187.1； R965.3 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2018）15-0075-04

Study on bacteriostasis and toxicological safety of a skin antibacterial agent composed with herbal compositions*

WU Changjun**， LI Shun***， CAI Biao， DAI Chenwei， WANG Chao， ZHOU Xiuhong， TONG Lin

（Scientific Research Section， Anhui Academy of Medical Sciences， Hefei 230001， China）

ABSTRACT Objective： To study the antibacterial efficacy and toxicological safety of a skin antibacterial agent composed with a variety of Chinese herbal medicines. Methods： Bacteriostatic test， stability test and animal toxicology test were performed to observe its antibacterial activity and toxicity. Results： The inhibitory zone for Escherichia coli， Staphylococcus aureus， Candida albicans were larger than 7 mm in diameter， which means its antibacterial effect is significant. The antibacterial activity test showed no significant change when it was stored for 3 months at 37 ℃ and 75% relative humidity. The irritation indexes for skin and eye were zero while the irritation index for vaginal mucosa was 0.89， which means without irritation. Conclusion： The antibacterial agent possesses a good antibacterial effect on some bacteria and fungi， with good safety to human body and stable effectiveness and without irritation.

KEY WORDS skin antibacterial agent； Chinese herbal medicine； antibacterial property； safety

目前，市場上常用皮膚抑菌劑的主要成分大多是化學合成物質，某些化學合成物質雖然抑（殺）菌作用較強，但具有一定的毒性，對環境和人體有一定的污染性和毒性。因此，研究并開發抑菌效果好、對人體刺激性小和毒副作用少、對環境污染小的皮膚抑菌劑非常必要。中草藥來源廣泛、安全性高，許多中草藥均具有廣譜抑菌功效[1-2]。本研究的皮膚抑菌劑系以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料，經破碎、浸泡、提取、配制而成的黃色溶液。為了解該皮膚抑菌劑的抑菌效果和毒理學安全性，進行相關試驗，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

受試皮膚抑菌劑：以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料制成的黃色溶液，pH為6.2。

試驗菌株：大腸埃希菌（ATCC 8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色假絲酵母（ATCC 10231），均由安徽省艾浮地艾空氣凈化檢測站提供，來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心。

實驗動物：多次皮膚刺激試驗選用體重250 ～ 300 g的健康白色豚鼠6只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032009）；急性眼刺激試驗選用體重2.0 ～ 2.5 kg的健康新西蘭家兔3只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032013）；陰道黏膜刺激試驗選用體重2.0 ～ 2.5 kg的健康雌性新西蘭家兔6只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032013）。

培養基：用于培養金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的營養瓊脂培養基和用于培養白色假絲酵母的沙氏培養基，均購自北京陸橋技術股份有限公司。

1.2 抑菌試驗

取新鮮菌株斜面培養物，用無菌生理鹽水制成濃度為1×106 ～ 1×107 CFU/ml的菌懸液，無菌吸取菌懸液100 μl接種于相應培養基表面，涂布均勻。準確吸取受試皮膚抑菌劑20 μl滴于無菌圓紙片（φ5 mm×4 mm）上，37 ℃下烘干后貼放于培養基表面；陰性對照紙片上滴加無菌蒸餾水20 μl。每組3個平皿，每個平皿表面放置4張試驗樣品紙片和1張陰性對照紙片，37 ℃下培養16 ～ 18 h。測量抑菌圈直徑，>7 mm表示有抑菌作用。

1.3 穩定性試驗

將受試皮膚抑菌劑密封包裝，于37 ℃、相對濕度為75%的條件下保存3個月，然后拆封重復進行抑菌試驗并測量抑菌圈直徑，研究其對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色假絲酵母的抑菌作用的穩定性。

1.4 毒理學安全性試驗

1.4.1 多次皮膚刺激試驗

取6只皮膚正常、完好的白色豚鼠，于試驗前24 h在它們的背部脊柱兩側備皮，左右范圍各約為3 cm×3 cm。將受試皮膚抑菌劑原液涂在一側脫毛皮區，然后用無刺激性塑料薄膜覆蓋、無刺激性膠布和繃帶固定，4 h后再用溫水洗去殘留的皮膚抑菌劑；另一側脫毛皮區不作處理，用作空白對照。每天如此處理1次，共連續處理14 d。每次處理后24 h觀察1次豚鼠的皮膚刺激反應并進行評分。

1.4.2 急性眼刺激試驗

取3只雙眼均正常的新西蘭家兔，吸取受試皮膚抑菌劑原液0.1 ml滴入家兔一眼的眼結膜囊內，使其眼被動閉合4 s，30 s后用生理鹽水沖洗；家兔的另一眼中滴入生理鹽水，用作對照。于滴眼后1、24 h和2、3、14、21 d觀察家兔的眼結膜、虹膜、角膜的損傷和恢復情況，并用2%熒光素鈉溶液或裂隙燈、放大鏡檢查其眼角膜和虹膜的變化，按眼刺激反應分級標準[3]判斷眼刺激的強度。

1.4.3 陰道黏膜刺激試驗

取6只處于非發情期且陰道口沒有分泌物、充血、水腫及其他損傷情況的健康雌性新西蘭家兔，分成試驗組和對照組各3只。將試驗組家兔陰部洗凈后仰面固定，暴露出會陰和陰道口，然后將鈍頭軟管與注射器連接，軟管前部用受試皮膚抑菌劑濕潤后輕柔插入家兔陰道內4 ～ 5 cm，緩慢注入該皮膚抑菌劑原液2 ml，抽出軟管。對對照組家兔用生理鹽水作同樣處理。對兩組家兔每天如此處理1次，共連續處理5 d。末次處理后24 h，采用氣栓法處死家兔，取出完整的陰道，縱向切開，肉眼觀察是否有充血、水腫等癥狀或表現。此后，將陰道標本于10%福爾馬林溶液中固定24 h，然后選取陰道兩端和中央的3個部位組織進行制片、蘇木精-伊紅染色，顯微鏡下進行組織病理學檢查[3]。

2 結果與分析

2.1 抑菌效果

本受試皮膚抑菌劑的抑菌試驗結果見表1。從表1可見，該皮膚抑菌劑對3種試驗菌的生長抑制效果均很明顯，其中對真菌（白色假絲酵母）的抑菌效果最好，對陰性細菌（大腸埃希菌）的抑菌效果次之，對陽性細菌（金黃色葡萄球菌）的抑菌效果較差。

2.2 穩定性

本受試皮膚抑菌劑的穩定性試驗結果見表2 ～ 表4。從表2 ～ 表4可見，該皮膚抑菌劑于37 ℃、相對濕度為75%的條件下保存3個月后，其抑菌試驗中各平皿試驗樣片上的抑菌圈直徑均>7 mm，抑菌效果仍明顯。其中，與存放前相比，該皮膚抑菌劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的抑菌效果略有下降，對白色假絲酵母的抑菌效果沒有下降，表明該皮膚抑菌劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色假絲酵母的抑菌效果穩定。

2.3 毒理學安全性

多次皮膚刺激試驗結果顯示，經用本受試皮膚抑菌劑原液對白色豚鼠完好皮膚連續涂抹14 d后，未見豚鼠皮膚出現紅斑、水腫等異常反應，該皮膚抑菌劑的皮膚刺激指數為0，對豚鼠皮膚的刺激反應強度為無刺激性。

急性眼刺激試驗結果顯示，經用本受試皮膚抑菌劑原液對新西蘭家兔連續滴眼21 d后，未見家兔眼出現結膜、虹膜和角膜損傷等異常反應，該皮膚抑菌劑的眼刺激指數為0，對家兔眼結膜、虹膜和角膜的刺激反應強度為無刺激性。

陰道黏膜刺激試驗結果顯示，經用本受試皮膚抑菌劑原液對新西蘭家兔連續給予陰道黏膜刺激5 d后，通過肉眼觀察和組織病理學檢查，未見家兔陰道黏膜出現明顯的異常反應，該皮膚抑菌劑的陰道黏膜刺激指數為0.89，對家兔陰道黏膜的刺激反應強度為無刺激性。

3 討論

目前，市售的皮膚抑菌劑種類繁多，但它們的主要成分大多是化學合成物質，某些化學合成物質雖然抑（殺）菌作用較強，但具有一定的毒性，對環境和人體有一定的污染性和毒性。例如，三氯生對水生生物有毒性[4]。三氯生在陽光的作用下可轉化形成氯仿、二噁英等毒性更大的物質[5-6]。隨著安全、健康的觀念日益深入人心，有關中草藥抑菌、抗菌和殺菌的研究漸成熱點。

本研究結果表明，本受試皮膚抑菌劑對細菌和真菌生長均具有良好的、穩定的抑制作用，其抑菌作用的強弱順序為真菌>陰性細菌>陽性細菌，且對皮膚、陰道黏膜以及眼結膜、虹膜和角膜均無刺激性。即：該皮膚抑菌劑對細菌和真菌均有良好的抑菌效果，且性能穩定，對人體的親和性好，無刺激性、無致敏性，使用安全。

蛇床子是植物蛇床的果實，為常用中草藥，其有效成分為揮發油和多種香豆素衍生物[7-8]，具有抗真菌、抗過敏作用[8]。苦參堿和苦參堿氧化物是苦參的主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用[9-10]，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等細菌具有一定的抑制作用[11]。黃柏是臨床上使用較多的一線中草藥，具有抗菌、抗炎、解熱等作用[12]。本研究結果證實，以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料制得的本受試皮膚抑菌劑的抑菌效果顯著，且對人體使用安全，值得進行進一步的研究和系統安全性評價，以便為此類皮膚抑菌劑的開發和應用提供更多的科學依據。

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