陰道涂片對確定SD大鼠妊娠的應用價值研究

羅濤　向雪靜　王中華

【摘要】目的 探討陰道涂片對確定SD大鼠妊娠的應用價值，為基礎醫(yī)學研究提供一種更加簡便、準確地鑒定大鼠妊娠時間的方法。方法 將40只雌性大鼠和20只雄性大鼠，按照2：1的比例進行合籠，次日晨對40只合籠雌鼠進行陰道涂片，顯微鏡下觀察記錄，并分析。結(jié)果 鏡下發(fā)現(xiàn)大量精子可確定該雌鼠已受孕，若在鏡下未發(fā)現(xiàn)精子可將該鼠繼續(xù)合籠飼養(yǎng)，次日再查。結(jié)論 對確定大鼠妊娠的時間，陰道涂片是一種準確率很高的方法，此法在提高實驗動物妊娠模型建立的準確性方面具有實際意義。

【關鍵詞】陰道涂片；SD大鼠；妊娠

【中圖分類號】R332 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.11..02

SD大鼠是國內(nèi)最常用醫(yī)學實驗動物之一，大鼠8周即性成熟，妊娠期為19～21天，為全年多動情性動物。現(xiàn)如今，很多醫(yī)學動物實驗，都需要用到大鼠孕鼠模型。所以，如何準確判斷雌鼠受孕，并知曉其懷孕天數(shù)，對實驗結(jié)果的準確性起著關鍵性的作用。

1 實驗材料

實驗動物：未交配SD大鼠共60只，雌性40只，體重（230±10）g，雄性20只，體重（300±10）g。由昆明醫(yī)科大學醫(yī)學實驗動物中心提供，清潔級。

飼養(yǎng)條件：室內(nèi)，室溫，自然光照，普通清潔級鼠飼料自由采食飼養(yǎng)，自由飲用自來水。

所需儀器：普通光學顯微鏡，消毒棉簽，潔凈玻片，生理鹽水。

2 方法

2.1 飼養(yǎng)合籠

60只SD大鼠適應性飼養(yǎng)一周，雌雄分籠飼養(yǎng)，期間注意觀察大鼠的活動規(guī)律和飲食狀況。按照雌雄2∶1的比例進行合籠，一般合籠時間為傍晚8點，正常供給飼料和水。于次日早晨8點進行雌鼠的陰道涂片檢查。

2.2 陰道涂片

取待檢查的雌鼠置于另一空籠子鐵絲蓋上，拇指、食指和中指捏住其尾巴，輕輕向后翻起尾巴，露出陰道口，用沾有生理鹽水的小棉支在陰道口處稍停留，以讓雌鼠適應，輕輕插入大鼠陰道并且緩慢轉(zhuǎn)動，慢慢將小棉支抽出，將小棉支上的黏液均勻涂在載玻片上，肉眼觀察并鏡檢（10×10倍）。

2.3 記錄并統(tǒng)計

對每只雌鼠的涂片進行記錄，并采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計，采用x2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

驗中fisher精確概率法檢驗。

3 結(jié) 果

如果大鼠交配成功，陰道涂片下可以觀察到精子。普通光學顯微鏡100倍下觀察，若發(fā)現(xiàn)鏡下有呈長條形，頭端稍膨大、呈鉤狀物質(zhì)（如圖1），則可判定雌鼠已交配受孕。

觀察第一次的合籠交配，陰道涂片結(jié)果顯示17只雌鼠鏡下觀察到有精子，占比42.5%，7只處于動情前期，6只處于動情期，4只處于動情后期，有6只大鼠陰道脫落細胞無特殊變化。把鏡下未觀察到有精子的雌鼠再進行第二次合籠后，陰道涂片發(fā)現(xiàn)，鏡下觀察到5只有精子，占比21.7%。再進行第三次合籠后，涂片顯示鏡下有1只查出精子，占比5.5%。本實驗中發(fā)現(xiàn)，凡是陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子的均為妊娠大鼠。經(jīng)過統(tǒng)計，有差異性（P<0.05）。說明該方法確定妊娠的準確性很高，幾乎為100%。

4 討 論

醫(yī)學動物實驗是科學研究中必不可少了，各種大鼠模型的制作對于我們的基礎醫(yī)學研究至關重要。快速準確的制備孕鼠模型及清晰知曉大鼠孕齡是保證實驗順利進行的前提條件。目前檢測大鼠受孕方法主要有兩種：陰栓檢查法和陰道涂片法[1，2]。陰栓檢查法就是在大鼠交配后查看雌鼠陰道是否有分泌物。但是，查找陰栓過程比較困難，如果觀察時間過早，陰栓可能還未形成。如果觀察時間過晚，可能存在液化和脫落的情況[3]，一旦陰栓脫落，掉入鼠籠墊料中，很難被找到。所以就造成結(jié)果的不準確性。而陰道涂片的操作過程快速、準確。不僅為醫(yī)學實驗動物模型的制作節(jié)約了時間，也保證了實驗模型的準確性。

通過實驗結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)，大鼠初次合籠交配后，受孕率為42.5%。反復第二次合籠后檢查受孕率為21.7%，第三次合籠后檢查的受孕率只有5.5%。這個結(jié)果顯示，雌鼠再檢查出沒有受孕后，是可以反復合籠嘗試的，但是隨著合籠的次數(shù)越多，受孕率越低。我們分析，多次反復的對同一只雌鼠進行陰道涂片，陰道刺激過多，或因操作過程中旋轉(zhuǎn)太猛，都可能會傷到陰道壁，造成受孕率越來越低，甚至出現(xiàn)不孕的結(jié)果。

綜上所述，采用陰道涂片法確定大鼠妊娠，具有快速、準確、簡便、實用等優(yōu)點。保證了實驗模型的準確性，不僅減少了模型制作時間，也降低了因?qū)嶒災Ｐ偷牟粶蚀_而產(chǎn)生的成本。所以，陰道涂片對確定SD大鼠妊娠的應用具有重要的價值。

參考文獻

[1] 李鳳奎.實驗動物與動物實驗方法學[M].鄭州大學出版社.2007.392-393.

[2] 何秋明，肖尚杰，夏惠敏.大鼠陰道圖片的觀察[J].廣州醫(yī)學院學報，2007，35（4）：54-56.

[3] 張 森，王 新，韋旭斌，等.大鼠發(fā)情周期各階段的陰道細胞變化觀察[J].動物醫(yī)學進展，2006，27（2）：69-72.

本文編輯：吳宏艷