HPLC-MS/MS法測量苯醚甲環唑與咯菌腈含量

何 鈺， 林紹霞， 陳迎麗， 王 睿， 楊鴻波

(貴州省分析測試研究院，貴州 貴陽 550002)

引 言

苯醚甲環唑(difenoconazole)由瑞士Ciba-Geigy(現先正達)公司開發，其機理為內吸性，抑制真菌細胞壁生長，因而具有很強的殺菌活性，殺菌范圍也很廣泛[1]。咯菌腈(fludioxonil)是一種安全高效低毒的新型殺菌劑，其作用機理主要通過抑制真菌細胞內與葡萄糖磷酰化有關的反應，菌絲體的生長遭到限制，從而消滅致病菌，尤其對灰葡萄孢菌作用明顯，屬于非內吸性苯基吡咯類殺菌劑，可以應用于農業生產中的大部分真菌病害的防治工作[2]。

在近幾年的相關報道中，苯醚甲環唑與咯菌腈的分析方法主要為高效液相色譜(HPLC)法[3]，而采用高效液相色譜-串聯質譜法對苯醚甲環唑與咯菌腈混配劑的分析方法則未見報道。本文使用反相高效液相色譜-三重四級桿質譜儀，通過色譜及質譜條件的優化分離苯醚甲環唑與咯菌腈，并對混合制劑中的苯醚甲環唑與咯菌腈進行定量分析。以建立簡單方便、快捷準確的含量分析方法，并具有良好分離、靈敏度高等特點，為完善產品質量體系建設提供支持。

1 實驗部分

1.1 試劑和溶液

甲醇(色譜純)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25 ℃)； 甲酸(色譜純)；苯醚甲環唑標準樣品(質量分數98.7%)；咯菌腈標準樣品(質量分數99.0%)。 標準品均由農業部提供。

1.2 儀器

Agilent 1290-6470A超高壓高效液相色譜-三重四級桿色譜儀；Masshunter色譜質譜定量定性處理軟件；明澈超純水制備系統；色譜柱： Agilent Eclipse Plus-C18，50 mm×2.1 mm、1.8 μm。

1.3 儀器操作條件

1.3.1 液相色譜操作條件

流動相：22%水溶液(含0.1%甲酸)+78%甲醇；流量0.2 mL/min；柱溫35 ℃；進樣體積1 μL；保留時間：咯菌腈1.2 min，苯醚甲環唑2.2 min。

1.3.2 MSD操作條件

離子源：ESI源(帶Agilent Jet Steam技術)；離子源參數：干燥氣，N2；干燥氣溫度，250 ℃；干燥氣流速，5 L/min；鞘氣：N2；鞘氣溫度：250 ℃；鞘氣流速：11 L/min；監測模式：MRM。監測離子參數見第49頁表1。

表1 MRM監測離子參數

以上儀器操作條件作為基礎條件，在實際操作中可依據其他儀器的相應特點，恰當調整儀器的操作條件參數，以便獲取最優分離及響應值?？┚婧捅矫鸭篆h唑標準樣品的典型定量離子對色譜圖及定性離子對色譜圖如圖1、圖2所示。

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

稱取咯菌腈和苯醚甲環唑的標準樣品各0.01 g(精確至0.000 1 g)，用甲醇溶解并稀釋定容至100 mL，得到咯菌腈和苯醚甲環唑的標準樣品儲備液。

圖2 苯醚甲環唑典型定量離子對(406.1->251.0)色譜圖及定性離子對色譜圖

1.4.2 校正曲線系列溶液配制

取1.4.1配制的標準儲備液適量，混合，用50%甲醇溶液稀釋定容，得到混合標準母液，再吸取適量該混合標準母液，稀釋后得到一系列濃度梯度的混合標準工作溶液。

1.4.3 試樣溶液的配制

稱取試樣4.8%苯醚甲環唑咯菌腈種子處理懸浮劑約0.03 g(精確至0.000 1 g)，以甲醇為溶劑，溶解并稀釋試樣至100 mL，超聲1 min后搖勻備用。

1.4.4 測定

將儀器調整至1.3所設置的操作條件參數下，待儀器平衡足夠時間，基線跑平，對同一標準樣品進行測定，待相鄰2次進樣所產生的目標物對應峰面積的相對變化小于2.0%后，進行樣品測定。

1.4.5 計算

對標樣與試樣中咯菌腈或苯醚甲環唑峰面積進行測量。以外標法定量。

2 結果與討論

2.1 分析方法的線性相關性實驗

取1.4.2配制的混合標準工作溶液，按1.3儀器操作條件進行分析測定， 以目標物濃度為橫坐標，目標物對應峰面積為縱坐標作圖，并進行線性方程擬合，所得結果列于表2。從表2可以看到，咯菌腈與苯醚甲環唑的線性方程相關系數非常接近于1，表明咯菌腈和苯醚甲環唑分別在測試質量濃度范圍內其濃度與響應值之間具有良好的線性關系。

表2 分析方法的線性方程、相關系數(r2)、檢出限(LOD)及定量下限(LOQ)結果

2.2 分析方法的精密度實驗

在1.3儀器操作條件下，對試樣進行分析測定，做6個平行，進行精密度實驗。測得咯菌腈和苯醚甲環唑的標準偏差分別為0.16和0.32，變異系數為1.41%和1.45%(見表3)。

表3 分析方法的精密度實驗結果

2.3 分析方法的準確度實驗

分析方法的準確度以加標回收率評價。稱取試樣4.8%苯醚甲環唑咯菌腈種子處理懸浮劑配制得到試樣溶液，加入一定量的咯菌腈和苯醚甲環唑標準樣品，做5個平行。在1.3.1儀器操作條件下進行分析，測得咯菌腈的平均回收率為75.64%，苯醚甲環唑的平均回收率為110.51%， 如表4所示。

表4 分析方法準確度實驗結果

3 結論

本實驗以液相色譜-串聯質譜法建立了苯醚甲環唑與咯菌腈的有效分析方法。結果顯示，在測試濃度范圍內苯醚甲環唑和咯菌腈的具有良好濃度與響應之間線性關系，方法重復性好、檢出限低、準確度高，同時,方法操作簡單，運行時間短，可應用于產品質量高通量檢測，為水體、土壤中苯醚甲環唑和咯菌腈痕量分析提供參考。