雌激素聯合復方紫草油治療對糖尿病大鼠燙傷創面愈合的影響

吳健周 美英 史旭鋒 武岳

摘要目的：探討雌激素聯合復方紫草油治療對糖尿病大鼠燙傷創面愈合的影響。方法：將40只雄性SD大鼠隨機分為空白組、模型組、雌激素組、復方紫草油組、雌激素聯合復方紫草油組等5組；除空白組外，各組大鼠均建立糖尿病模型，成模后在所有大鼠背部造成深Ⅱ度燙傷。空白組與模型組不采取任何治療，各觀察組以相應的藥物治療。于傷后第1、8、15、22天檢測各組大鼠創面愈合率、血糖及血清轉化生長因子β1（TGFβ1）、血管內皮生長因子（VEGF）的表達，第22天行創面組織病理學觀察并作病理評分。結果：與空白組比較，模型組大鼠創面愈合率顯著降低、血糖明顯升高，TGFβ1、VEGF含量顯著降低，病理評分顯著升高，差異有統計學意義（P<005）；與模型組比較，各觀察組大鼠創面愈合率明顯升高、血糖明顯降低，TGFβ1、VEGF含量顯著升高，病理評分明顯降低，差異有統計學意義（P<005）。結論：雌激素和復方紫草油可以促進糖尿病大鼠燙傷創面的愈合，且雌激素與復方紫草油聯合用藥對糖尿病大鼠燙傷創面愈合具有協同作用。

關鍵詞糖尿病創傷；雌激素；復方紫草油；愈合

Healing Effect of Combined Treatment of Estrogen and Compound Radix

Arnebiae Oil on the Scald Wound of Diabetic Rats

Wu Jian， Zhou Meiying， Shi Xufeng， Wu Yue

（Department of Burns， Ganau Provincial Hospital， Lanzhou 730000， China）

AbstractObjective：To explore the effect of the burn wound healing in rats with diabetes by the combined treatment of estrogen and compound Radix Arnebiae Oil. Methods：A total of 40 male SD rats were divided randomly into 5 groups， inclduing blank group， model group， estrogen group， Compound Radix Arnebiae Oil group， combined estrogen and Compound Radix Arnebiae Oil group. Except the blank group， the others were established the diabetes model. After the success of the model building， the whole rats were caused deepⅡdegree burn in the back. Apart from the blank group and the model group， each treatment group was treated by the appropriate treatment methods. The wound healing rate and blood glucose of each rat was observed， and the expression of TGFβ1and VEGF in 1， 8， 15， 22 days realtime were detected. The wound tissue pathology of each rat was observed and made pathological grades. Results：Compared with the blank group， rat wound healing rate of the model group was significantly reduced， and the blood sugar level increased significantly. The level of TGFβ1and VEGF decreased significantly， and the pathological grades rise significantly （P<005）. Compared with the model group， the rat wound healing rate of each treatment group was obviously higher， and the blood sugar level was significantly lower. The TGFβ1and VEGF were significantly higher， and the pathological score significantly reduced （P<005）. Conclusion：The estrogen and the Compound Radix Arnebiae Oil can promote the healing of burn wound on diabetic rats and play a role of collaborative work.

Key WordsScald wound of diabetic rat； Estrogen； Compound Radix Arnebiae Oil； Healing effect

中圖分類號：R242文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.042

糖尿病創面的修復是一個比較困難的過程，其修復受到多方面因素的影響，因此尋找有效的糖尿病創面修復方法是目前研究的重點與難點。當前大量文獻報道，TGFβ1、VEGF在創傷的愈合過程中，起到重要的作用[12]。而當前的研究發現，在糖尿病的治療過程中雌激素水平的高低與其出現的血脂、血糖異常等密切相關，絕經后2型糖尿病的患者，體內的雌激素水平下降可能與糖尿病并發微血管病密切相關[3]。而復方紫草油具有涼血解毒，生肌斂瘡，祛腐活血，生肌長肉等功效，現代醫學研究也證實復方紫草油具有活血消腫、涼血、止痛生肌及促進創傷愈合的作用[4]。我們在大量文獻的基礎上提出雌激素聯合復方紫草油對糖尿病創傷的愈合具有較好療效的猜想，因此我們選擇了雌激素、復方紫草油及其聯合用藥對糖尿病燙傷的大鼠進行干預，用以探討其雌激素聯合復方紫草油對糖尿病創傷愈合的影響。

1材料與方法

11材料

111動物SPF級雄性SD大鼠（200±20）g，購于中國農業科學院蘭州獸醫研究所，動物合格證號：SCXK（甘）20160001，質量檢測單位：蘭州大學實驗動物檢測中心。

112藥物雌激素（苯甲酸雌二醇），武漢欣欣佳麗生物科技有限公司，國藥準字J20050120；復方紫草油，健民集團葉開泰國藥（隨州）有限公司，國藥準字Z20044385。

113試劑與儀器大鼠轉化生長因子β1（TGFβ1）ELISA檢測試劑盒，產品貨號：ml002856；大鼠血管內皮細胞生長因子（VEGF）ELISA檢測試劑盒，產品貨號：ml002862。血糖儀（江蘇魚躍醫療設備有限公司），酶標儀（Biotek），倒置顯微鏡（奧林巴斯IX71），移液器（Eppendorf），高速臺式離心機（Thermo）。

12方法

121分組與模型制備將40只雄性SD大鼠，體重為（200±20）g，適應性喂養1周后，隨機分為5組，即空白組、模型組、雌激素組、復方紫草油組、雌激素聯合復方紫草油組（聯合組）。除空白組外，其余各組大鼠均建立糖尿病模型，糖尿病模型的建立采用腹腔注射2%的枸櫞酸枸櫞酸鈉鎂溶液配制成的鏈脲佐菌素（STZ）溶液，劑量為65 mg/kg；注射一周后采血檢測隨機血糖的水平，并且觀察體重的變化。糖尿病模型成功的標準為：STZ注射后的基礎血糖<89 mol/L，誘導后的血糖>112 mol/L，大鼠的體重明顯地下降。造模成功后，對所有動物進行燙傷造模（包括空白組），剃去所有大鼠背部的毛發，用硫化鋇脫毛劑脫毛，24 h后在燙傷處理前，用3%的戊巴比妥鈉（15 mL/kg），給予大鼠腹腔注射麻醉，用控溫控電燙傷儀在75 ℃的溫度下作用11 s，造成直徑大約為25 cm的深Ⅱ度燙傷創面（病理切片顯示有大量的炎性細胞浸潤，膠原纖維腫脹玻璃樣變性、融合壞死，部分毛囊和皮脂腺崩解，符合深Ⅱ度燙傷的病理變化）。

122給藥方法空白組與模型組創傷面不作處理，肌注09%的氯化鈉注射液；雌激素組創傷面不作處理，肌注15 mg/kg的雌激素；復方紫草油組創傷面外涂適量復方紫草油，肌注09%的氯化鈉注射液；雌激素聯合復方紫草油組，創傷面外涂適量復方紫草油，肌注15 mg/kg的雌激素；連續干預21 d后，檢測相關指標。

123指標檢測與方法1）各組大鼠創面的愈合率分別于傷后的第1、8、15、22天采用透明膠片描記加稱重法測量每組大鼠局部創面之面積，計算的公式為：創面愈合率=（原始創面的面積未愈合創面的面積）/原始的創面面積×100%。2）各組大鼠各時間段血糖的變化分別于傷后的第1、8、15、22天早上8點檢測各組大鼠的血糖。3）各組大鼠各時間段血清中TGFβ1、VEGF的表達情況分別于傷后的第1、8、15、22天采用尾部采血法檢測各組大鼠血清中TGFβ1、VEGF的表達情況。4）各組大鼠創傷面病理形態及評分的變化情況，于傷后第22天，麻醉處死大鼠，取創傷面組織，經固定后做HE染色。每張片子選取3個視野進行病理評分，病理評分原則：0分：創面可見到部分復層上皮，表皮細胞形成較多，且分化良好，新生的膠原排列整齊，炎性細胞極少或無；1分：真皮全層仍可見少量的炎細胞，肉芽組織明顯，可見部分表皮細胞；2分：真皮全層仍可見較多的炎細胞，肉芽組織形成較少，可見少量的表皮細胞形成；3分：真皮全層仍可見大量的炎細胞，肉芽組織形成很少，未見表皮細胞形成。

13統計學方法所有數據用均數±標準差（±s）表示，采用SPSS 190統計軟件分析，組間顯著性檢驗采用單因素方差分析。以P<005為差異有統計學意義。

2結果

21不同時間段各組大鼠創面的愈合率與空白組比較，模型組大鼠創傷面愈合率顯著降低，差異有統計學意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、復方紫草油組、雌激素聯合復方紫草油組創傷面愈合率明顯升高，差異有統計學意義（P<005），且聯合組愈合率均較雌激素組、復方紫草油組高。見表1。

22不同時間段各組大鼠血糖值的比較與空白組比較，模型組大鼠各個時間段血糖均顯著升高，差異有統計學意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯合復方紫草油組大鼠血糖明顯降低，差異有統計學意義（P<005）；而復方紫草油組大鼠血糖較模型組有所降低，但差異無統計學意義（P>005）。見表2。

23不同時間段各組大鼠血清中TGFβ1的比較與空白組比較，模型組大鼠血清中TGFβ1的表達量顯著降低，差異有統計學意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯合復方紫草油組大鼠血清中TGFβ1的表達量明顯升高，差異有統計學意義（P<005）；而復方紫草油組大鼠血清中TGFβ1的表達量較模型組有一定的升高，但僅在22 d時差異有統計學意義（P<005）。見表3。

24不同時間段各組大鼠血清中VEGF的比較與空白組比較，模型組大鼠血清中VEGF的表達量顯著降低，差異有統計學意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯合復方紫草油組大鼠血清中VEGF的表達量明顯升高，差異有統計學意義（P<005）；而復方紫草油組大鼠血清中VEGF的表達量較模型組有一定的升高，但僅在15 d、22 d時差異有統計學意義（P<005）。見表4。

25各組大鼠創面病理形態的比較空白組病理形態可見一定炎細胞，及大量的肉芽組織，分化較好；模型組可見大量的炎細胞，肉芽組織較少，未見明顯的新生上皮細胞；雌激素組可見較多的炎細胞，及部分的新生肉芽組織；復方紫草油組可見較少的炎細胞，及較多的肉芽組織形成，可見較少的新生上皮細胞；聯合組可見較少的炎細胞，以及大量的新生上皮細胞；見圖1，病理評分結果見表5。

3討論

糖尿病為臨床上常見的疾病，由于糖尿病患者的微血管病變，導致糖尿病患者對外界溫度的刺激表現不敏感，出現反應遲鈍，因而易被燙傷，其病情遷延，不易恢復。當前研究發現女性在絕經后，雌激素水平是下降的，其可影響患者的血糖、血脂水平[5]。雌激素水平的下降與2型糖尿病、高血壓、血脂異常、胰島素抵抗密切相關[6]。進一步研究發現，雌激素對糖尿病患者具有一定的輔助治療作用。黃繼良等[7]研究示每日口服倍美力0625 mg，其可降低絕境后2型糖尿病患者之血糖，及其改善胰島素水平，顯著提高胰島素的敏感性；鐘國連[8]研究示尼爾雌醇雌激素可以顯著改善絕經后2型糖尿病患者的胰島素抵抗及其血脂的異常。最新研究發現采用雌激素替勃龍治療圍絕經期2型糖尿病患者，可顯著降低患者的血糖水平，獲得良好的臨床效果[9]。由此可見雌激素具有治療糖尿病的作用。而復方紫草油是臨床常備的外用中成藥，具有涼血解毒，生肌斂瘡，祛腐活血，生肌長肉等功效，除輕中度燒燙傷外，臨床上還用于癤瘡久潰，創面不收、肌肉不生之癥；藥理研究發現其具有鎮痛、抗炎、活血化瘀、促進創面愈合等作用[4，10]。其外用對皮膚的刺激性小，換藥時與傷口不粘連[11]，在治療肛瘺手術后創面的愈合[12]、糖尿病足、潰瘍等方面[13]，具有獨特的療效。相較于一些敷料而言，其治療燒燙傷等疾病價廉效佳，顯著降低醫保費用支出和減輕患者負擔，值得臨床廣泛推廣應用。

我們研究發現，與空白組比較，模型組大鼠各個時間段血糖均顯著升高（P<005），成功建立了糖尿病模型，再進一步對大鼠進行了模擬燙傷處理。在應用雌激素、復方紫草油進行治療8 d后，創面的愈合率高于模型組，TGFβ1與VEGF的表達升高（P<005），聯合組更明顯（P<005）；雌激素治療后大鼠創面有較多的炎性因子和部分肉芽組織，復方紫草油組可見較多的肉芽組織和少量的炎性因子，聯合觀察組可見大量的新生上皮細胞；病理評分與模型組比較，治療后降低，聯合組表現更明顯（P<005），可以看出，聯合組的療效要比單純的治療療效好，雌激素聯合復方紫草油治療糖尿病燙傷，發揮了協同促進創面愈合的治療作用。在治療后，TGFβ1和VEGF的表達升高，我們猜測，糖尿病燙傷遷延難愈的主要原因與TGFβ1與VEGF的低表達密切相關，這可能是其病情遷延、不易恢復的發病機制之一[14]。

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