抗菌脂肽surfactin對雛雞生長性能及血液生化的影響

胡美忠， 陳 敏，郁建生

（銅仁職業技術學院，貴州銅仁 554300）

獸用抗生素在畜牧養殖業中起到了重大作用，但是抗生素的濫用帶來了耐藥菌、藥物殘留等危害，嚴重威脅人們身體健康及生態環境安全。尋找安全、無耐藥性無殘留的抗生素替代品成為急需解決的問題。由芽孢桿菌產生的抗菌脂肽有廣譜抗菌作用，不易產生耐藥性，且來源安全，近年成為研究的熱點，有望替代抗生素在畜牧業中的使用（莊國宏，2014）。

surfactin是枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌等芽孢桿菌屬產生的環狀抗菌脂肽（莊國宏，2014），具有廣譜抗菌、抗病毒等活性（翟少偉等，2015；任鵬舉等，2014），有在畜牧業中替代抗生素使用的潛力，研究表明surfactin具有促進動物生長，增強抗病能力等作用 （都海明等，2010）。為進一步研究surfactin在畜牧養殖業使用潛力，本試驗研究了surfactin對雛雞生長性能及血液生化的影響，為進一步開發surfactin在畜牧養殖業使用提供依據。

1 材料與方法

1.1 抗菌脂肽surfactin半固體發酵制備 枯草芽孢桿菌S21（民族中獸藥分離純化技術國家地方聯合工程研究中心中獸藥微生物發酵技術研究室分離篩選保藏）使用LB培養基活化得種子液，待用。市售黃豆粉碎成粗顆粒，蒸餾水浸泡過夜后蒸熟，趁熱把黃豆顆粒轉入用開水淋洗的帶蓋托盤（黃豆顆粒厚度約2～3 cm），冷卻，接入黃豆5%（V/g）的枯草芽孢桿菌S21種子液，同時加入黃豆20%（V/g）無機鹽體系（硫酸鎂0.5 g/L，氯化鉀 0.5 g/L，硫酸錳 0.005 g/L，硫酸銅 0.0016 g/L，硫酸亞鐵0.0015 g/L及占黃豆重量5%的葡萄糖），攪拌均勻，37℃發酵48 h。甲醇萃取發酵黃豆2～3次，合并萃取液，濃縮至干，加少量蒸餾水溶解，使用高效液相色譜法檢測甲醇萃取液中surfactin的峰面積，根據surfactin標準品峰面積計算其含量，制備得到surfactin樣品。

1.2 試驗動物 試驗動物為貴州地方品種青腳土雞苗，購自貴州黔靈山雞苗孵化廠，銅仁職院農學院生態養殖園常規飼養至20日齡后進行試驗，土雞苗接種疫苗情況：1日齡馬立克疫苗，7日齡新城疫IV疫苗，14日齡法氏囊多價苗，20日齡H120疫苗。

1.3 試驗設計及飼養管理 隨機選取100只健康的20日齡青腳雛雞，分成基礎日糧添加3、6、9 mg/kg surfactin三個surfactin劑量組（參照恩拉霉素劑量）、金霉素陽性組（基礎日糧添加金霉素30 mg/kg）和空白組5個組。每組4個重復，每個重復5只，早晚定時喂食一次，自由采食，定期清理糞便，保持雞舍衛生。

1.4 基礎日糧配方 基礎日糧配方依據當地土雞飼養的配方配制，配方為60%玉米，10%麩皮，29%豆粕和1%骨粉魚粉混合物。

1.5 測定指標

1.5.1 生長性能 于21、35、50日齡早上喂食前對各組稱重，每日記錄各組喂食量及死亡情況，根據數據計算各組的平均日增重，死亡率及料重比，數據使用SPSS 20.0分析統計。

1.5.2 血液生化 使用一次性真空采血管于雛雞50日齡進行翅靜脈采血，每組隨機采集三只，采集的血液靜置30 min，4000 g離心15 min得血清，置于-20℃冰箱保藏。采用南京建成生物工程研究所的總膽固醇（TC）試劑盒，甘油三酯（TG）試劑盒，尿素氮 （BUN）試劑盒，白蛋白（ALB）試劑盒，谷丙轉氨酶試劑盒，谷草轉氨酶試劑盒分別檢測血清中總膽固醇、甘油三酯、尿素氮、白蛋白、谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的含量。

2 結果與分析

2.1 surfactin對雛雞生長性能的影響 由表1可知，21～35 d內，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日糧喂養的雛雞，3 mg/kg surfactin組其日平均增重比空白對照組提高23.9%（P＜0.05），比金霉素組提高 13.5%（P＜0.05），6 mg/kg surfactin組其日平均增重比空白對照組提高24.7%（P ＜ 0.05）， 比金霉素組提高 14.2%（P ＜ 0.05），可見3 mg/kg surfactin組和6 mg/kg surfactin組日增重效果比金霉素組好（P＜0.05）。35～50 d平均日增重結果與21～35 d類似，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日糧喂養的雛雞，其日平均增重相對于空白對照組分別提升26.5%（P＜0.05）、31.4%（P ＜ 0.05），與陽性對照金霉素組相比無顯著性差異。整個試驗期間，對照組20只雛雞死亡4只，死亡率為20%，但是3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin組，每組死亡雛雞1只，死亡率為5%，陽性對照金霉素組死亡率為10%，可見添加surfactin能增強雛雞抗病能力，降低死亡率。料肉比上，3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin組的料肉比與對照組相比分別降低4.5%（P＜0.05）、5.1%（P＜0.05），與金霉素組相當。

表1 surfactin對雛雞生長性能的影響

表2 surfactin對雛雞血液生化的影響

2.2 surfactin對雛雞血液生化的影響 由表2可知，surfactin對雛雞血清中總膽固醇、谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶含量統計學上無明顯影響，對血清中甘油三酯、尿素氮和白蛋白的含量有影響，3、6 mg/kg surfactin組和9 mg/kg surfactin組血清中甘油三酯和尿素氮的含量降低，甘油三酯含量分別降低 19.2%（P＜ 0.05）、12%（P＜ 0.05） 和 68.6%（P＜0.05）， 尿素氮含量分別降低36%（P＞0.05）、69.7%（P ＜ 0.01）和 67.4%（P ＜ 0.05），血清中白蛋白的含量提高，血清中白蛋白含量分別提高66.4%（P ＜ 0.05）、61.7%（P ＜ 0.05）、67.3%（P ＜ 0.05）。

3 討論

研究表明芽孢桿菌產生的抗菌脂肽surfactin具有廣譜高效抗菌、抗病毒活性，對支原體和原蟲有顯著的抑制效果，對畜禽具有很好的抗氧化、促生長、抗菌、增強動物機體免疫力及改善動物的肉質品質等作用，且具有相當好的熱穩定性和pH穩定性，是一種潛在的新型綠色抑菌促生長飼料添加劑（翟少偉等，2015；龔谷迪等，2013）。都海明（2010）研究了抗菌脂肽對肉雞生長性能和免疫機能的影響，得出抗菌脂肽對肉雞的生長發育和免疫機能具有較好的調節和促進作用。翟少偉等（2016）的研究指出，飼料中添加surfactin可以提高中華鱉稚鱉的生長性能和腸道消化酶活性。陳旭波（2016）研究了surfactin對斷奶仔豬生長性能及血液生化指標的影響，得出飼料中添加適量抗菌脂肽surfactin能夠提高斷奶仔豬生長性能、降低腹瀉率、改善血脂水平和改善血液生化指標。surfactin促生長可能與其抑菌活性有關，surfactin通過抑制動物腸道致病菌的繁殖從而改善腸道微生態環境，促進了腸道健康，動物采食量提高，促進動物生長。血液生化指標可反映機體新陳代謝情況，尿素氮是衡量機體蛋白分解代謝速率的一個指標，白蛋白則是衡量機體內蛋白質合成代謝的指標，比較尿素氮和白蛋白在機體內的濃度變化可以得出機體對蛋白質的利用效率（劉觀忠等，2011;張凱等，2011），血脂可反映機體脂質代謝情況，較低的甘油三酯和膽固醇有利于機體健康，谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶則反映機體肝臟健康，較高水平說明機體肝臟功能受損。

4 結論

本試驗結果表明，surfactin能促進雛雞生長，降低料肉比、死亡率、血清中甘油三酯和尿素氮含量，提升血清中白蛋白的含量，促進飼料中蛋白質的消化吸收，在日增重和死亡率及血液生化指標方面優于金霉素。