CXCR4和CXCR7在腎透明細胞癌組織中的表達及其臨床意義

呂棟，滕志剛，周云飛，任選義

（河南省開封市中心醫院 泌尿外科，河南 開封 475000）

趨化因子相對分子質量為10×103～12×103，是細胞因子超家族中具有化學趨化作用的小分子蛋白，現發現約50種趨化因子和約20種受體[1]。趨化因子與其相對應的受體結合后，在血管生成、胚胎發育、炎癥和腫瘤等生理或病理過程中發揮作用。CHATTERJEE等[2]報道趨化因子受體與腫瘤的轉移特性有關以來，更多研究發現趨化因子受體與腫瘤的發展密切相關。過去認為趨化因子受體4（chemokine receptor 4, CXCR4）是趨化因子基質細胞衍生因子1（stromal cell derived factor-1, CXCL12）的唯一受體，然而最近研究發現CXCL12尚存在趨化因子受體7（chemokine receptor 7, CXCR7） 這 一 新 的 受 體[3-4]，CXCL12/CXCR7生物軸同樣在腫瘤發展過程中起重要作用。因此本實驗檢測趨化因子受體CXCR4和CXCR7在腎透明細胞癌（clear cell renal cell carcinoma, ccRCC）組織中的表達，并探討其相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2010年9月-2015年8月在河南省開封市中心醫院泌尿外科行手術切除且臨床資料完整的50例腎癌患者，取其ccRCC組織標本。其中，男性28例，女性22例；年齡49～83歲，平均62.4歲。采用2004年世界衛生組織腎癌組織學分級方法：高、中分化32例，低分化18例。按照2010版UICC/AJCC的TNM分期系統進行臨床分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期14例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例；其中骨轉移3例，淋巴結轉移14例；外科切緣陰性46例，陽性4例。所有患者術前未行放、化療。隨機切取20例遠離腎癌的正常腎組織作為對照，其中男性12例，女性8例；年齡49～83歲，平均67.4歲。

1.2 方法

使用免疫組織化學SABC三步法。一抗試劑CXCR4和CXCR7為濃縮型羊多克隆抗體，工作液濃度1∶100；二抗試劑為濃縮型兔抗羊多克隆抗體，稀釋比例1∶200。兔抗人CXCR4一抗、兔抗人CXCR7一抗、兔抗SABC試劑盒及DAB顯色劑由上海哈靈生物科技有限公司提供，所有標本用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，2～4μm連續切片。應用免疫組織化學SABC法檢測，組織切片常規脫蠟，水化后經3%過氧化氫處理，加熱抗原修復，按試劑盒說明書進行操作。所有實驗均設陽性對照及陰性對照，用已知CXCR4、CXCR7表達的陽性圖片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

免疫組織化學法陽性反應為黃棕色顆粒，陽性表達定位于細胞質或細胞膜。用半定量積分判斷結果：①陽性細胞數≤10%為0分，10%～30%為1分，31%～60%為2分，61%～80%為3分，＞80%為4分；②陽性強度：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將兩者積分相乘，0分陰性（-），1～4分弱陽性（+），5～8分陽性（++），9～12分強陽性（+++）。將ccRCC組織標本及正常腎組織標本中CXCR4和CXCR7蛋白的表達水平進行比較，分析ccRCC組織中CXCR4和CXCR7的表達水平及其與患者臨床病理學指標的相關性。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 13.0統計軟件，計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗或一致性檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CXCR4、CXCR7在ccRCC和癌旁組織中的表達

免疫組織化學法結果顯示，CXCR4和CXCR7蛋白陽性表達于細胞漿和細胞膜，以細胞漿為主。ccRCC組織中，CXCR4和CXCR7蛋白含量升高。CXCR4在ccRCC組織中的陽性表達率為72%（36/50），在正常腎組織為10%（2/20）；CXCR7在ccRCC組織中的陽性表達率為70%（35/50），在正常腎組織為15%（3/20），經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=22.128和0.000，P=17.414和0.000）。見圖1～3。

2.2 CXCR4、CXCR7與患者臨床病理特征的關系

CXCR4、CXCR7蛋白的表達與患者年齡、性別、腫瘤大小等無相關性（P＞0.05），與患者TNM分期、組織學分級及有無淋巴結轉移關系密切（P＜0.05）。見表1。

2.3 CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中表達的相關性

CXCR4與CXCR7蛋白在ccRCC組織中的表達呈正相關（r=0.467，Kappa=0.740，P=0.001）。見表2。

圖1 CXCR4在ccRCC組織中陽性表達

圖2 CXCR4在正常腎組織中陰性表達

圖3 CXCR7在ccRCC組織中陽性表達

表1 ccRCC患者臨床病理特征與CXCR4、CXCR7蛋白表達的關系

表2 CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中表達的相關性 例

3 討論

CXCR4是有7個跨膜結構域的GTP-蛋白偶連的跨膜受體之一，在免疫系統和中樞神經系統的細胞中廣泛表達[5]。不同的腫瘤高表達特異的趨化因子受體，腫瘤細胞借助趨化因子與受體的特異結合力，最終向這些器官特異性轉移。CXCR4作為CXCL12的受體不僅表達于細胞漿，也可在細胞膜中檢測到。CXCL12/CXCR4生物軸在多種惡性腫瘤的特定轉移中起關鍵作用，在淋巴結、肺、肝及骨髓腫瘤常見的轉移灶中均發現CXCL12/CXCR4高表達[6]，但其在腎腫瘤組織中的研究甚少[7]。最近研究發現，CXCL12尚存在CXCR7受體，CXCL12/CXCR7生物軸同樣在腫瘤發展過程中起重要作用[3-4，8]。CXCR7作為膜相關的受體蛋白，在多種腫瘤細胞、內皮細胞及胎肝細胞中高表達，在正常細胞中不表達。CXCR7在乳腺癌、宮頸癌、肺癌等多種腫瘤細胞株中高表達[9-11]，但對腎腫瘤的研究甚少。目前，CXCR4和CXCR7在腎腫瘤發生、發展過程中的作用尚不明確。本研究發現，CXCR4在ccRCC組織中呈高表達，其陽性率為72.0%，相比癌旁腎組織，CXCR4蛋白表達升高。同樣CXCR7在ccRCC組織中的陽性表達率為70%，高于正常腎組織的15%。尤其重要的是，本實驗結果表明CXCR4、CXCR7的陽性表達與患者TNM分期、組織學分級及有無淋巴結轉移關系密切，與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關。本組資料顯示，隨著ccRCC細胞的惡性程度升高和分化變差，CXCR4和CXCR7蛋白的陽性表達水平逐漸升高；同樣隨著浸潤深度增加和淋巴結轉移的發生，即進展期ccRCC組織中CXCR4和CXCR7蛋白的陽性表達率升高。據此推測，CXCR4和CXCR7可能作為促癌基因發揮作用，其高表達與腎腫瘤分期、分級及惡性發展進程相關，可用來推斷ccRCC的預后。本實驗結果表明，CXCR4與CXCR7蛋白在ccRCC組織中表達呈正相關，兩者共陽性表達30例（60%，30/50），提示兩者可能通過CXCL12/CXCR4/CXCR7生物軸，借助于某種復雜的信號轉導機制，協同作用于ccRCC的發生、發展及轉移，其具體機制尚需研究。

本研究認為，CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中高表達，其與ccRCC TNM分期和組織學分級關系密切，聯合檢測2種蛋白的表達可作為判斷ccRCC預后的生物學指標。