PBK/TOPK與Ki-67及p53在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)相關(guān)性及預(yù)后意義

楊錦旺 田榮華 薛明月 周維華

肺癌是1種發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)迅速且對(duì)人類健康和生命都產(chǎn)生了極大威脅的惡性腫瘤。臨床上通常把Ki-67和p53作為腫瘤的標(biāo)記物。但目前的臨床研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67和p53作為腫瘤的診斷依據(jù)仍存在一定爭(zhēng)議[1]。因此找到1種腫瘤評(píng)估效果更穩(wěn)定，能夠協(xié)助早期腫瘤診斷的標(biāo)記物對(duì)患者的治療將會(huì)產(chǎn)生重大意義。本研究通過(guò)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者PBK/TOPK與Ki-67及p53在癌細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，分析探討PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)相關(guān)性及預(yù)后意義，為非小細(xì)胞肺癌的臨床診斷和預(yù)后治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月至2016年12月間于本院確診并接受手術(shù)切除治療的非小細(xì)胞肺癌患者88例，其中腺癌患者29例、鱗癌患者30例，大細(xì)胞癌患者29例，收集患者原發(fā)灶組織的手術(shù)切除樣本。患者年齡35～55歲，平均(46.5±4.6歲)。其中男性患者51例，女性患者37例。肺癌細(xì)胞低分化患者54例，中至高分化患者34例。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡在35～55歲；②患有非小細(xì)胞肺癌；③知情并且同意參與研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<35或>55歲；②患有其它影響PBK/TOPK、Ki-67、p53表達(dá)的癌癥患者；③家長(zhǎng)或本人不愿參與本次研究的患者。

1.3 研究方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色法步驟 ①將石蠟切片用二甲苯脫蠟，酒精脫水；②用0.3%H2O2室溫下處理切片10～30 min以抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；③PBS溶液洗滌切片5 min；④滴加稀釋比例為1∶100的的一抗，室溫下孵育2～3 h。用PBS溶液沖洗5次，每次3 min；⑤滴加用生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30 min；⑥用PBS溶液沖洗5次，每次3 min；⑦顯色劑顯色5 min(DAB等)；⑧用自來(lái)水充分沖洗顯色后的切片，除去顯色劑；⑨不復(fù)染用于定量測(cè)試的切片，選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄虎庥梅且豢棺鳛殛幮詫?duì)照組，用已知的非小細(xì)胞肺癌組織PBK/TOPK、Ki-67、p53陽(yáng)性表達(dá)的切片作陽(yáng)性對(duì)照[2-3]。

1.3.2 檢測(cè)結(jié)果評(píng)判方法 陽(yáng)性：表現(xiàn)為棕黃色顆粒或褐黃色顆粒；陰性：表現(xiàn)為淡黃色細(xì)顆粒。將PBK/TOPK、Ki-67、p53陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別≥15%、≥40%、≥25%的檢測(cè)結(jié)果定義為高表達(dá)[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并用spearson進(jìn)行相關(guān)性分析，對(duì)患者術(shù)后5年生存率的記錄和比較結(jié)果比較用卡方進(jìn)行檢驗(yàn)。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果及相關(guān)性分析

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以觀測(cè)到肺癌細(xì)胞細(xì)胞核中有棕黃色顆粒或褐黃色顆粒，Ki-67和p53陽(yáng)性表達(dá)于肺癌細(xì)胞細(xì)胞核，PBK/TOPK陽(yáng)性表達(dá)于胞質(zhì)，胞質(zhì)中可以觀測(cè)到棕黃色顆粒或褐黃色顆粒。PBK/TOPK、Ki-67、p53高表達(dá)率分別為47.7%、69.3%、62.5%。采用spearson進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PBK/TOPK與Ki-67和p53的表達(dá)呈正相關(guān)。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1、表2。

表1 PBK/TOPK、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)結(jié)果及相關(guān)性分析(例，%)

表2 PBK/TOPK、p53在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)結(jié)果及相關(guān)性分析(例，%)

2.2 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

根據(jù)患者的跟蹤記錄結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，患者的中位生存期與PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)有關(guān)。PBK/TOPK、Ki-67、p53低表達(dá)患者中位生存期明顯長(zhǎng)于高表達(dá)的患者(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PBK/TOPK、Ki-67、p53表達(dá)與患者中位生存期有關(guān)。PBK/TOPK表達(dá)低Ki-67表達(dá)低的患者中位生存期高于PBK/TOPK表達(dá)高Ki-67表達(dá)低、PBK/TOPK表達(dá)低Ki-67表達(dá)高以及PBK/TOPK表達(dá)高Ki-67表達(dá)高的患者。PBK/TOPK表達(dá)高Ki-67表達(dá)低、PBK/TOPK表達(dá)低Ki-67表達(dá)高的患者的中位生存期高于PBK/TOPK表達(dá)高Ki-67表達(dá)高的患者。PBK/TOPK、p53表達(dá)相關(guān)性對(duì)患者中位生存期的影響與PBK/TOPK、Ki-67表達(dá)相關(guān)性影響情況類似，見(jiàn)表3。

3 討論

肺癌是現(xiàn)實(shí)生活中很常見(jiàn)的1種惡性腫瘤。其發(fā)病因素有很多，吸煙、大氣污染等都是其發(fā)病率逐年升高的重要因素[5-6]。有相關(guān)報(bào)道指出肺癌正逐漸發(fā)展為我國(guó)城市人口中死亡率最高的惡性腫瘤[7]。其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌80%～85%左右。由于早期診斷很難檢測(cè)出非小細(xì)胞肺癌，這也導(dǎo)致了非小細(xì)胞肺癌的高死亡率，許多患者在患病后的存活期限都不超過(guò)5年。目前對(duì)肺癌的主要治療方法有化學(xué)治療、放射治療和手術(shù)治療。但手術(shù)切除后癌細(xì)胞易轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)也容易引起病情復(fù)發(fā)，因此患者術(shù)后的存活率很低[8]。目前臨床上主要把Ki-67和p53作為預(yù)后診斷的依據(jù)。但根據(jù)近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67和p53作為診斷的獨(dú)立因素仍存在較大爭(zhēng)議。因此找到1種更準(zhǔn)確，診斷結(jié)果更穩(wěn)定的診斷依據(jù)對(duì)患者的預(yù)后診斷和治療具有重大意義，有利于提高患者的中位生存期限[9]。本課題通過(guò)研究PBK/TOPK與Ki-67及p53在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)相關(guān)性來(lái)探究這種相關(guān)性對(duì)患者預(yù)后的影響，為患者的預(yù)后診斷和治療提供依據(jù)。

表3 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與中位生存期的關(guān)系

PBK/TOPK具有促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的功能，目前臨床研究發(fā)現(xiàn)，PBK/TOPK除在一些胚胎組織和睪丸組織中有表達(dá)外，在其它正常細(xì)胞組織中幾乎不表達(dá)，在癌細(xì)胞中則存在高表達(dá)現(xiàn)象。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)PBK/TOPK、Ki-67、p53非在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)，且PBK/TOPK與Ki-67及p53的正相關(guān)性影響著患者的預(yù)后。PBK/TOPK與Ki-67及p53表達(dá)越低，患者的中位生存期越高。結(jié)合相關(guān)數(shù)據(jù)我們可以推測(cè)PBK/TOPK在肺癌細(xì)胞中的高表達(dá)具有促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖的作用，因而影響了Ki-67蛋白的高表達(dá)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在某些癌細(xì)胞中PBK/TOPK與野生p53結(jié)合域的相互作用能抑制p53的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[10]。在本研究中p53的高表達(dá)率為62.5%，大部分非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞存在p53突變現(xiàn)象，根據(jù)相關(guān)資料可以推測(cè)這種突變可能在一定程度上受到PBK/TOPK高表達(dá)的影響。因此PBK/TOPK與Ki-67及p53在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)可能存在某種影響機(jī)制，使得它們?cè)诜羌?xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)呈正相關(guān)，這種正相關(guān)性又對(duì)患者的預(yù)后結(jié)果產(chǎn)生影響。

綜上所述，PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)。這種相關(guān)性會(huì)對(duì)患者的預(yù)后情況產(chǎn)生影響。通過(guò)對(duì)PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，分析其相關(guān)性，可以作為患者預(yù)后診斷和治療的依據(jù)。