布魯氏菌病三種檢測(cè)方法的敏感性研究

胥敏 ，呂明 ，朱廷云 ，陳亮 ，王燚 ，張婷婷

（1.四川省中江縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 中江 618100；2.四川省德陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 德陽 618000）

主題詞：布魯氏菌病；檢測(cè)方法；敏感性試驗(yàn)

1 材料

布氏菌抗體檢測(cè)試紙條：青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心，生產(chǎn)批號(hào)：030021803。

布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡：北京維德維康生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：17120603。

布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原：青島易邦生物工程有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：170040601。

布氏菌病陽性、陰性血清：中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，生產(chǎn)批號(hào)：201702、201601。

布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性、陰性血清：青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心，生產(chǎn)批號(hào)：20170503、20170502。

布氏菌病試管凝集試驗(yàn)陽性、陰性血清：青島易邦生物工程有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20170202、20161002。

2 方法

2.1 布氏菌抗體檢測(cè)試紙條法

2.1.1 操作方法 取10μL待檢樣品稀釋液加入潔凈稀釋板內(nèi)，在每個(gè)稀釋孔中加入190μL生理鹽水，混勻。取出檢測(cè)試紙條，手持手柄端，將測(cè)試端（箭頭端）浸入稀釋好的待檢樣品中，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照、空白對(duì)照，靜置5～10min判定結(jié)果。

2.1.2 結(jié)果判定 檢測(cè)線處（T）、質(zhì)控線處（C）各出現(xiàn)一條紫紅色條帶，判為陽性。檢測(cè)線（T）條帶色澤的深淺，表明待檢樣品中布氏菌抗體效價(jià)的高低，顏色越深效價(jià)越高，顏色越淺效價(jià)越低。檢測(cè)線處（T）未出現(xiàn)紫紅色條帶，僅質(zhì)控線處（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，說明檢測(cè)樣品中無布氏菌病抗體存在。質(zhì)控線處（C）未出現(xiàn)條帶，則判無效。

2.2 布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡法

2.2.1 操作方法 用試劑盒自帶的滴管吸取1滴待檢樣品稀釋液加入快速檢測(cè)卡樣品孔中，再分別吸取3滴加入樣品孔中，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照、空白對(duì)照，10min后觀察顯色區(qū)，15min內(nèi)判定結(jié)果。

2.2.2 結(jié)果判定 C線顯色，T線不明顯判定為陰性；C線顯色，T線明顯判定為陽性；C線不顯色，無論T線是否顯色，該檢測(cè)卡均判定為無效。

2.3 虎紅平板凝集試驗(yàn)法

2.3.1 將一塊潔凈干燥的玻璃板劃分成數(shù)個(gè)4 cm2的方格；每個(gè)方格中加入30μL待檢血清，其旁邊滴加抗原30μL；用牙簽攪動(dòng)血清和抗原，使之混合，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照、空白對(duì)照。

2.3.2 結(jié)果判定 4min內(nèi)觀察結(jié)果，凡出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者，判為陽性（+）；無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。

3 結(jié)果

3.1 三種方法檢測(cè)布氏菌病陽性血清的結(jié)果 見表1。

3.2 三種方法檢測(cè)布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性血清的結(jié)果 見表2。

3.3 三種方法檢測(cè)布氏菌病試管凝集試驗(yàn)陽性血清的結(jié)果 見表3。

4 分析

4.1 當(dāng)布氏菌病陽性血清稀釋至1∶1024時(shí)，布氏菌抗體檢測(cè)試紙條呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶256時(shí)，虎紅平板凝集試驗(yàn)呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶8192時(shí)，布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡呈陽性（表1）。

4.2 當(dāng)布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性血清稀釋至1∶1024時(shí)，布氏菌抗體檢測(cè)試紙條呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶128時(shí)，虎紅平板凝集試驗(yàn)呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶8192時(shí)，布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡呈陽性（表2）。

4.3 當(dāng)布氏菌病試管凝集試驗(yàn)陽性血清稀釋至1∶1024時(shí)，布氏菌抗體檢測(cè)試紙條呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶128時(shí)，虎紅平板凝集試驗(yàn)呈陽性；當(dāng)稀釋至1∶8192時(shí)，布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡呈陽性（表3）。

5 結(jié)論

以上結(jié)果表明，布氏菌病3種檢測(cè)方法均有較高的敏感性。其中，布魯氏桿菌抗體快速檢測(cè)卡法的敏感性＞布氏菌抗體檢測(cè)試紙條法＞布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)。按照規(guī)范要求，上述3種方法均不能用于布魯氏桿菌病的確診，而應(yīng)使用試管凝集試驗(yàn)法。快速檢測(cè)卡可檢測(cè)牛、羊的全血、血清、血漿、原乳等樣品；快速檢測(cè)試紙條可用于豬、牛、羊的血清或血漿樣品檢測(cè)；布氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)法可用于豬、牛的血清或血漿樣品檢測(cè)。

表1 三種方法檢測(cè)布氏菌病陽性血清的結(jié)果

表2 三種方法檢測(cè)虎紅平板試驗(yàn)陽性血清的結(jié)果

表3 三種方法檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)陽性血清的結(jié)果