rhGM—CSF與胰島素聯(lián)合應(yīng)用對(duì)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面TGF—β1和FGF—2表達(dá)的影響

張春月 廖毅

[摘要]目的：擬通過檢測(cè)分析局部聯(lián)合應(yīng)用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（Recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor， rhGM-CSF）和胰島素對(duì)糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（Transforming growth factor-β1， TGF-β1）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Basic fibroblast growth factor-2， FGF-2）以及CD34表達(dá)的影響，初步探討局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素促進(jìn)糖尿病難愈性創(chuàng)面愈合的可能作用機(jī)制。方法：雄性SD大鼠制備糖尿病深Ⅱ度燙傷模型，隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組、胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組以及聯(lián)合用藥組，同時(shí)建立正常對(duì)照組。分別于傷后1、3、7、11、15、21d計(jì)算創(chuàng)面愈合率，觀察創(chuàng)面組織形態(tài)學(xué)情況，并檢測(cè)創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表達(dá)情況。結(jié)果：傷后7、11、15、21d，正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組創(chuàng)面愈合率均高于其余各組，糖尿病對(duì)照組創(chuàng)面愈合率均低于其余各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。傷后3～21d，正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組TGF-β1、FGF-2表達(dá)均顯著高于其余各組，糖尿病對(duì)照組最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。傷后7～21d，正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組CD34表達(dá)均高于其余各組，各時(shí)間點(diǎn)糖尿病對(duì)照組最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素可通過促進(jìn)糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面血管化、纖維化和上皮化，明顯促進(jìn)創(chuàng)面愈合，提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量，其機(jī)制可能與二者聯(lián)合上調(diào)創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]糖尿病；燙傷；GM-CSF；胰島素；TGF-β1；FGF-2

[中圖分類號(hào)]R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2018）06-0045-06

Abstract： Objective To analyze the influence of local application of rhGM-CSF combine with insulin on the expression of TGF-β1， FGF-2 and CD34 in wound healing with Ⅱ degree scald in diabetic rats and explore the possible mechanisms. Methods After Male Sprague-dawley rats were induced diabetic depth Ⅱ scald models， they were randomly divided into the diabetic control group， the insulin group， the rhGM-CSF group and the rhGM-CSF mixed insulin group， while the normal control group were established. The wound area was measured in 1， 3， 7， 14 and 21 days after scald to calculate the rate of wound healing. Morphology of skin tissues of wounds were observed， while the expression of TGF-β1，F(xiàn)GF-2 and CD34 in wound tissues were detected at each time piont. Results Compared to other groups， the normal control group and the rhGM-CSF mixed insulin group had higher rates of wound healing， while the diabetic control group had lower rates of wound healing with significant difference in 7，11，15 and 21 days after scald（P<0.05）. 3-21d after the injury， the expression of TGF-β1 and FGF-2 were significant higher in the normal control group and the rhGM-CSF mixed insulin group than those in other groups， while they were lowest in the diabetic control group （P<0.05）. 7-21d after the injury， the expression of CD34 were higher in the normal control group and the rhGM-CSF mixed insulin group than those in other groups， while they were lowest in the diabetic control group at each time point（P<0.05）. Conclusion Topical application of rhGM-CSF combine with insulin can promote angiogenesis， collagen deposition， epithelialization， and significantly accelerate wound healing with Ⅱ degree deep scald and improve the quality of the wound healing. The mechanism may be associated with upregulation of TGF-β1， FGF-2 and CD34 expression.

Key words： diabetes； scald； GM-CSF； insulin； TGF-β1； FGF-2

我國糖尿病的發(fā)病率逐年升高，糖尿病難愈性創(chuàng)面等慢性并發(fā)癥的致殘率、致死率也不斷上升，嚴(yán)重威脅人民的健康。同時(shí)，我國每年用于糖尿病及其并發(fā)癥的醫(yī)療費(fèi)用超過200億[1]，給社會(huì)、國家以及患者個(gè)人帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。但目前國內(nèi)外尚缺乏糖尿病創(chuàng)面難愈的明確的發(fā)病機(jī)理及有效的治療手段，因此，尋找行之有效的糖尿病創(chuàng)面促愈方法刻不容緩。近年來，胰島素聯(lián)合生長(zhǎng)因子治療糖尿病難愈性創(chuàng)面的科學(xué)及臨床實(shí)驗(yàn)備受關(guān)注，但目前對(duì)于局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF與胰島素對(duì)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面愈合影響的報(bào)道尚不多見。馬恬實(shí)驗(yàn)證實(shí)[2]，較單獨(dú)外用胰島素或rhGM-CSF，二者聯(lián)合使用能更有效地促進(jìn)壞死組織脫落、調(diào)控炎癥反應(yīng)從而改善創(chuàng)面愈合情況，加速糖尿病足難愈性創(chuàng)面愈合，但尚未就其中具體的作用機(jī)制展開研究。本實(shí)驗(yàn)以糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面為研究對(duì)象，檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素后創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2以及CD34表達(dá)水平的變化，初步探討局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素對(duì)糖尿病難愈性創(chuàng)面產(chǎn)生促愈合作用的可能機(jī)制，為二者聯(lián)合治療糖尿病難愈創(chuàng)面提供新的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑、儀器：SPF級(jí)雄性SD大鼠100只，體重250～350g，由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。鏈脲佐菌素（streptozotocin STZ，Sigma公司，美國）；胰島素諾和靈30R（40U/ml，諾和諾德公司，丹麥）；外用重組人粒細(xì)胞刺激因子凝膠（rhGM-CSF，100μg/10g，長(zhǎng)春金賽公司，中國）；快速血糖檢測(cè)儀（北京怡成生物電子技術(shù)有限公司）；TGF-β1、FGF-2抗體（abcam公司，英國，ab64715、ab8880）；CD34抗體（博士德公司，中國，BA0532）；SP試劑盒；Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件（Media Cybernetics公司，美國）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 糖尿病模型制備：造模前檢測(cè)大鼠尾靜脈血糖值均<8.9mmol/L，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（n=15）及糖尿病模型組（n=85），后者禁食不禁水12h，單劑量腹腔快速注射1% STZ（55mg/kg）[3]。72h后檢測(cè)尾靜脈血糖，若隨機(jī)血糖值>16.7mmol/L，且隨機(jī)抽樣的胰腺經(jīng)病理證實(shí)胰島細(xì)胞被破壞（見圖1），即可視為I型糖尿病模型誘導(dǎo)成功。不達(dá)標(biāo)者3d后以10～15mg/kg補(bǔ)充腹腔注射STZ。正常對(duì)照組腹腔注射相同劑量的檸檬酸緩沖液。

1.2.2 深Ⅱ度燙傷模型制備及分組：糖尿病模型組大鼠血糖穩(wěn)定4周后，各組大鼠以戊巴比妥鈉麻醉，背部脫毛。次日麻醉后用自制燙傷裝置（保持致傷溫度100℃）制備2個(gè)直徑約2.5cm的圓形深Ⅱ度燙傷[4]。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，正常大鼠燙傷時(shí)間為10s，糖尿病大鼠燙傷時(shí)間為8s。傷后予以10ml乳酸鈉林格液腹腔注射抗休克，單籠飼養(yǎng)，不限制飲食。85只糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷模型中有69只造模成功，隨機(jī)選取其中的60只并分為糖尿病對(duì)照組、胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組以及聯(lián)合用藥組。

1.2.3 藥物治療：于傷后第1天開始，每日予以創(chuàng)面換藥1次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束（傷后第21天）。正常對(duì)照組、糖尿病對(duì)照組以浸有5ml生理鹽水的3層紗布濕敷；胰島素用藥組以浸有5U諾和靈30R+5ml生理鹽水的3層紗布濕敷；rhGM-CSF用藥組浸有25μg rhGM-CSF+5ml生理鹽水的3層紗布濕敷；聯(lián)合用藥組聯(lián)合胰島素用藥組和rhGM-CSF用藥組處理；各組均再用1層油紗外敷。同時(shí)，皮下注射諾和靈30R將胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組以及聯(lián)合用藥組的血糖控制至正常對(duì)照組水平。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 創(chuàng)面愈合率：分別于燙傷后1、7、11、15、21d，創(chuàng)面未采取任何干預(yù)措施前采取圖像，使用Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件計(jì)算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=初始創(chuàng)面面積-觀察日創(chuàng)面面積/初始創(chuàng)面面積×100%。初始創(chuàng)面面積=лR2 =л（2.5/2）cm2。

1.3.2 組織學(xué)觀察：分別于傷后3、7、11、15、21d，各組隨機(jī)選取3只大鼠，剪取創(chuàng)面及創(chuàng)周2mm全層皮膚，以4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片。取部分切片行HE染色及Masson染色，光鏡下觀察創(chuàng)面組織的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，血管、膠原及上皮形成等情況。

1.3.3 TGF-β1、FGF-2以及新生血管指標(biāo)CD34的表達(dá)：每個(gè)樣本取6張切片，按試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化SP法染色，光鏡觀察，以胞漿或/和胞核著棕黃色者為陽性染色。高倍鏡下（200×）每張切片任選3個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)視野中的TGF-β1、FGF-2以及CD34的陽性細(xì)胞數(shù)，取3×2個(gè)視野計(jì)數(shù)之和分別作為TGF-β1、FGF-2以及CD34陽性表達(dá)的相對(duì)含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用SNK檢驗(yàn)法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況：本次成功制備糖尿病大鼠模型，胰島細(xì)胞被破壞（見圖1）。造模成功后，5組共75只大鼠均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，全部進(jìn)入結(jié)果分析。

2.2 創(chuàng)面愈合率：傷后7、11、15、21d，正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組創(chuàng)面愈合率均高于其余各組，糖尿病對(duì)照組創(chuàng)面愈合率均低于其余各組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 組織學(xué)觀察

2.3.1 HE染色結(jié)果：傷后第3天，各組大鼠皮膚表皮及真皮乳頭層破壞，部分真皮網(wǎng)狀層可見殘存的皮膚附件，皮下組織結(jié)構(gòu)紊亂，膠原纖維變性壞死，細(xì)胞崩解，伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；其中聯(lián)合用藥組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)最為顯著，糖尿病對(duì)照組最少。

第7天，各組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均較前明顯增加，同時(shí)可見新生肉芽組織形成；糖尿病對(duì)照組可見少量成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞；胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組可見較多成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞逐漸增多，形成毛細(xì)血管；正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組新生肉芽組織中可見更多的成纖維細(xì)胞以及毛細(xì)血管，同時(shí)可見部分基底細(xì)胞增殖。

第11～15天，除糖尿病對(duì)照組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)繼續(xù)較前顯著增加外，其余各組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較前均有不同程度的減少。糖尿病對(duì)照組成纖維細(xì)胞逐漸增加，出現(xiàn)少量新生毛細(xì)血管；其余各組成纖維細(xì)胞增生更為明顯且逐漸成熟為纖維細(xì)胞，伴紅色膠原形成，毛細(xì)血管繼續(xù)增加，且部分毛細(xì)血管管壁增厚，基底細(xì)胞增生形成的皮島逐漸增多融合，形成薄層上皮，以正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組為甚，胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組次之（見圖2）。

第21天，糖尿病對(duì)照組仍有較多肉芽組織及炎性細(xì)胞，被覆不連續(xù)的薄層上皮，其余各組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。rhGM-CSF用藥組、胰島素用藥組大部分創(chuàng)面被覆新生復(fù)層上皮，但其結(jié)構(gòu)尚不完整；正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組創(chuàng)面已基本上皮化，表皮結(jié)構(gòu)較完整。

2.3.2 Masson染色結(jié)果：傷后第3天，各組大鼠創(chuàng)面組織中膠原斷裂，纖維纖細(xì)、稀疏，排列及其紊亂，尤以糖尿病對(duì)照組為甚。第7天，糖尿病對(duì)照組膠原纖維仍較纖細(xì)、稀疏、紊亂；胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組膠原纖維較前致密，但仍紊亂；正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組膠原纖維相對(duì)粗大、致密、規(guī)整，但正常對(duì)照組不及聯(lián)合用藥組。第11～15天，各組膠原纖維逐漸增多并融合形成粗大的纖維束，排列也逐漸趨于均勻、規(guī)整，尤以聯(lián)合用藥組為甚，正常對(duì)照組次之，糖尿病對(duì)照組最差（見圖3）。第21天，各組創(chuàng)面真皮及真皮下膠原束較前粗大、致密，同時(shí)正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組膠原束排列最為規(guī)整，大部分平行于表皮，胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組次之，糖尿病對(duì)照組最差。

2.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：傷后3～21d，正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組TGF-β1、FGF-2表達(dá)均顯著高于其余各組，糖尿病對(duì)照組最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各組均于第15天達(dá)到峰值。見表2～3，圖4～5。

傷后第3天，正常對(duì)照組、胰島素用藥組、rhGM-CSF用藥組、聯(lián)合用藥組CD34表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其余時(shí)間點(diǎn)正常對(duì)照組、聯(lián)合用藥組CD34表達(dá)均高于其余各組，各時(shí)間點(diǎn)糖尿病對(duì)照組最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各組均于第21天達(dá)到最高觀察值。見表4，圖6。

3 討論

糖尿病創(chuàng)面難愈并非單因素作用的結(jié)果，除了血管病變、神經(jīng)病變、感染因素外，糖代謝重構(gòu)的產(chǎn)物所介導(dǎo)的創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子的生物學(xué)異常可能是糖尿病創(chuàng)面難愈的重要因素[5]。在創(chuàng)面愈合這個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，生長(zhǎng)因子作為其中的“樞紐”，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

GM-CSF是參與創(chuàng)面愈合過程的一種多功能生長(zhǎng)因子，大量研究表明，局部應(yīng)用GM-CSF可安全、有效地治療多種原因?qū)е碌募薄⒙詣?chuàng)面。研究表明[6-7]GM-CSF基因敲除小鼠創(chuàng)面愈合明顯延遲，而外用GM-CSF能刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化，增加肉芽組織中微血管的密度，并促進(jìn)其成熟、穩(wěn)定。劉繼松等[8]研究證實(shí)，GM-CSF能促進(jìn)創(chuàng)面早期炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并介導(dǎo)其釋放NE、MMP-1、MMP-9，加速創(chuàng)面溶痂。另有研究提示[9-10]，GM-CSF可通過介導(dǎo)Akt/mTOR通路刺激糖尿病創(chuàng)面中成纖維細(xì)胞增殖，膠原纖維沉積以及再上皮化。在創(chuàng)面修復(fù)后期，rhGM-CSF可促進(jìn)毛囊再生，并通過調(diào)節(jié)創(chuàng)面TGF-β的表達(dá)，促進(jìn)肉芽組織及新生組織中膠原纖維的可控性沉積，從而提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量[11-13]。

近年研究發(fā)現(xiàn)，除了調(diào)節(jié)能量代謝及蛋白質(zhì)合成之外，胰島素還參與調(diào)控創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞、細(xì)胞生長(zhǎng)因子及細(xì)胞外基質(zhì)，提示其對(duì)創(chuàng)面修復(fù)起到積極作用。研究報(bào)道[14]，胰島素可加速血管新生，可能與其促進(jìn)胰島素受體及PI3K/Akt通路介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移及血管管腔形成有關(guān)。Apikoglu-Rabus等[15]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胰島素可通過調(diào)節(jié)創(chuàng)面組織中成纖維細(xì)胞的生物學(xué)活動(dòng)，促進(jìn)膠原纖維的合成。另有研究表明[16]，胰島素可通過促進(jìn)創(chuàng)面細(xì)胞因子表達(dá)、膠原纖維合成等間接作用，以及對(duì)創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞如炎癥細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞的直接作用促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合。此外，局部應(yīng)用胰島素可逆轉(zhuǎn)糖尿病創(chuàng)面中胰島素信號(hào)傳導(dǎo)的衰減，增加eNOS，VEGF以及SDF-1α等蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合[17]。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，糖尿病大鼠創(chuàng)面炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)延遲且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，血管、膠原形成受阻，新生表皮薄弱且向創(chuàng)面中央爬行緩慢；與正常大鼠比較，其創(chuàng)面愈合時(shí)間延長(zhǎng)，創(chuàng)面愈合率降低。而創(chuàng)面局部單獨(dú)應(yīng)用rhGM-CSF或者胰島素后，創(chuàng)面組織中成纖維細(xì)胞及新生血管增多，新生膠原密度增加、分布均勻且排列規(guī)整，上皮爬行速度加快且新生表皮增厚，且二者聯(lián)合使用后效果更為顯著。相關(guān)研究表明[9]，在糖尿病大鼠創(chuàng)面局部使用rhGM-CSF能加速創(chuàng)面閉合，促進(jìn)新血管生成，誘導(dǎo)膠原合成，提高生長(zhǎng)因子FGF-2，TGF-β以及VEGF的水平從而促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合。通過本實(shí)驗(yàn)可以觀察到，自傷后第3天開始，各組TGF-β1、FGF-2及CD34表達(dá)均有升高，與糖尿病對(duì)照組相比，傷后各時(shí)間點(diǎn)胰島素用藥組及rhGM-CSF用藥組TGF-β1、FGF-2及CD34表達(dá)均增加，而兩者聯(lián)合使用后創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2及CD34表達(dá)增加更為顯著，創(chuàng)面愈合率亦明顯升高。表明rhGM-CSF和胰島素糖尿病合并燙傷創(chuàng)面愈合中，起到了協(xié)同促進(jìn)的作用。

TGF-β1也是目前創(chuàng)面愈合必不可少的生長(zhǎng)因子之一，其作用貫穿創(chuàng)面愈合的始終。首先，TGF-β1對(duì)巨噬細(xì)胞有趨化、活化作用，并促進(jìn)其合成分泌與創(chuàng)面愈合相關(guān)的炎性介質(zhì)[18]；其次，TGF-β1作用于成纖維細(xì)胞，一方面刺激其遷移、增殖，促進(jìn)膠原的合成；另一方面誘導(dǎo)其向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)膠原沉積及創(chuàng)面收縮[19]。再次，TGF-β1可誘導(dǎo)新生血管以及肉芽組織形成[20]。此外，TGF-β1可刺激上皮細(xì)胞增殖并促進(jìn)其向創(chuàng)面床遷移，加速再上皮化進(jìn)程[21]。

FGF-2已被證實(shí)參與創(chuàng)面愈合過程，局部FGF-2的下調(diào)及活性降低與糖尿病創(chuàng)面難愈有關(guān)[22]。FGF-2促進(jìn)創(chuàng)面愈合可能通過了多種環(huán)節(jié)，包括活化創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞并促進(jìn)其分裂、增殖、趨化[22]；改善細(xì)胞外基質(zhì)的合成；促進(jìn)血管新生，加速再上皮化[19]。有文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)GF-2還可作用于MMP-1，通過上調(diào)其表達(dá)調(diào)節(jié)創(chuàng)面中膠原蛋白含量，有效抑制瘢痕組織形成[23]。

本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，糖尿病燙傷創(chuàng)面愈合中，聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素可發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，協(xié)同強(qiáng)化生物效應(yīng)，共同促進(jìn)創(chuàng)面愈合。胰島素降低糖尿病創(chuàng)面中組織細(xì)胞的血糖水平，改善創(chuàng)面局部的微環(huán)境，抑制糖尿病皮膚的生物學(xué)異常，同時(shí)rhGM-CSF和胰島素均可上調(diào)創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2及CD34的表達(dá)，調(diào)控創(chuàng)面炎癥反應(yīng)，促進(jìn)新生血管形成、膠原合成及沉積、再上皮化進(jìn)程從而加速創(chuàng)面愈合并提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)為rhGM-CSF和胰島素在糖尿病難愈性創(chuàng)面的應(yīng)用提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。糖基化終末產(chǎn)物（Advancede glycation endproducts，AGEs）是長(zhǎng)期高糖環(huán)境下發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)的直接產(chǎn)物，可直接或間接作用于組織細(xì)胞，引發(fā)組織細(xì)胞的代謝異常，是糖尿病皮膚發(fā)生“隱形損害”的“始作俑者”之一。有文獻(xiàn)報(bào)道[5，24]，糖尿病大鼠皮膚在高糖的長(zhǎng)期作用下，AGEs也可作用于FGF-2、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR），阻斷其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制創(chuàng)面愈合。但參與創(chuàng)面愈合的其他細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如GM-CSF、TGF-β及其受體是否也發(fā)生糖基化改變以及胰島素、rhGM-CSF可否抑制FGF-2、TGF-β及其受體的糖基化反應(yīng)而促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合，有待進(jìn)一步研究。

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[收稿日期]2018-05-09 [修回日期]2018-06-02

編輯/朱婉蓉