鏡檢法與金標法在瘧原蟲篩查中的應用

李冉，王康椿，葉青，黃小玲

(廣東省第二中醫院檢驗科，廣東 廣州 510095)

瘧疾是由人類瘧原蟲感染引起的寄生蟲病，據WHO統計2016年全球仍有2.12億瘧疾感染病例[1]。近年來，經濟貿易全球化帶來的人口流動及勞務輸出增加，我國多有輸入性瘧疾的報道。2010年1月-2015年7月，廣東省共報告瘧疾病例773例，全為輸入性病例[2]。因此，準確快速的診斷對瘧疾控制具有重要意義。瘧原蟲檢測多采用鏡檢法，其操作簡便，適用于各級醫療機構，但其受影響因素較多，而瘧原蟲快速診斷試劑盒具有操作簡便、耗時短、檢測結果直觀易判讀等優點。廣州萬孚生物技術股份有限公司生產的瘧原蟲檢測試劑盒通過檢測全血樣本中的特異性惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶 （pfLDH）和瘧原蟲乳酸脫氫酶（panLDH）來判定有無瘧原蟲感染。本研究同時應用鏡檢法與金標法進行檢測，對兩種方法的臨床應用進行評價，旨在為各級醫療機構使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 選取2011年1月-2017年9月期間在我院鏡檢發現瘧原蟲的55例為陽性組；以發熱查因為訴求鏡檢瘧原蟲陰性的292例為對照組。

1.2 材料 OLYPUMS CX41雙目普通光學顯微鏡，BASO吉姆薩染液，廣州萬孚瘧原蟲金標法檢測試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 顯微鏡檢查 每份病例均采集EDTA.K2新鮮抗凝全血2ml，并立即涂厚、薄血片，其中薄片用甲醇固定后，與厚片一起用吉姆薩染液染色10min，使用清水浸泡法除去多余的染液，待干后由經驗豐富的鏡檢人員進行鏡檢，所有鏡檢結果均由第二人復核。薄片用于蟲種鑒定，具體方法參見《瘧疾診斷標準》（WS/T 259-2006）。

1.3.2 金標法檢測 按照試劑盒說明書操作。取5ul全血樣本滴加于加樣孔內，同時滴加4滴裂解液于試劑孔，15min內觀察結果。檢測區（T1）及質控區（C）各出現一條紅色反應線，提示惡性瘧感染；檢測區（T1、T2）及質控區（C）均出現一條紅色反應線，提示惡性瘧感染，但不排除可能同時混合感染其他3種瘧疾；檢測區（T2）及質控區（C）各出現一條紅色反應線，提示除惡性瘧以外的其他3種瘧疾中的1種或多種感染；僅質控區（C）出現一條紅色反應線，為陰性；質控區（C）無紅色反應線出現，為無效，應重測。

1.4 數據統計 兩組間數據采用χ2檢驗，P＜0.05具有顯著性差異，所有數據均使用SPSS 18.0軟件進行統計與分析。

2 結果

對347例血樣同時用金標法和鏡檢法進行瘧原蟲檢測，鏡檢出瘧原蟲陽性55例（32例惡性瘧，17例間日瘧，1例卵形瘧，5例混合瘧），陰性292例，陽性率為15.85%（55/347）；金標法試劑盒檢測出陽性55例（32例惡性瘧，17其他瘧疾，5例混合瘧，1例假陽性），陰性292例。以鏡檢法結果為基準，金標法試劑盒檢測的靈敏度為98.18%（54/55），特異性為99.66%（291/292），陽性預測值為98.18%（54/55），陰性預測值為 99.66%（291/292）；兩種檢測方法符合率為 99.42%﹛（54+291）/347﹜；兩種檢測方法間差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 鏡檢法與金標法檢測瘧原蟲結果統計分布

3 討論

我國的瘧疾發病率雖較19世紀70年代有了較大下降，但隨著國際化的進程，外貿經濟的繁榮，人員流動性的加大，瘧疾仍為困擾我國的傳染性疾病之一，海南、云南、廣西等地瘧疾發病率相對較高，而內陸地區輸入性瘧疾的報道也日益增多[3-6]。

目前瘧疾檢測主要有經典的鏡檢法，金標法，流式細胞標記法，PCR法等方法[7]。鏡檢法操作簡便，易于普及，適合各級醫院使用，但檢出受制片、染色、鏡檢水平、顯微鏡質量等多方面因素影響，導致瘧疾病例的確診與鑒別診斷困難[8，9]，特別在瘧原蟲混合感染或藥物治療后，瘧原蟲形態遭到破壞，增大了瘧原蟲染色鏡檢的難度[10]；流式細胞標記法和PCR檢測法雖然具有檢測準確，靈敏度高的優點[11]，但其操作繁瑣，要求條件及成本較高，難以普及；金標法試劑盒具有體積小，易保存，操作方便，結果易于判讀，對操作人員要求不高等特點，適用于各級醫療檢測機構用于瘧疾疑似患者的輔助診斷和瘧區病例的篩選檢查。

本研究中以鏡檢法為參照，金標法檢測試劑盒具有較高的靈敏度 （98.18%）與特異性（99.66%），兩種檢測方法之間無顯著差異。金標法與鏡檢法二者的符合率高達99.42%，顯示了良好的一致性。

萬孚金標法瘧原蟲檢測試劑盒通過檢測特異性惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶（pfLDH）和瘧原蟲乳酸脫氫酶（panLDH）以檢測瘧原蟲。本研究的347例檢測血樣中，有1例鏡檢法陽性，而金標法陰性，經鏡檢確認該例標本為卵形瘧，故未能檢出，這與唐鳳[12]等人的研究相符，但因標本量不足，未能驗證金標法對卵形瘧的檢出率。本研究中發現的1例鏡檢法陰性，金標法陽性的標本，經詢問該患者檢查前1周內曾服用抗瘧藥物，這可能與鏡檢結果轉陰時間（1-5d）和金標法轉陰時間（＞7d）有差異有關[13]。

瘧疾是由雌性按蚊傳播的一種致死率第一的寄生蟲疾病，根據感染瘧原蟲種類的不同有7-30天的潛伏期[14]，消滅傳染源和傳播途徑是控瘧的兩大首要任務，由于人群對抗瘧藥抵抗加強，抗瘧藥濫用，病人治療不規范等，使傳染源多為低密度帶蟲者。常規鏡檢法不易檢出，常出現漏診，使傳染源不能及時發現并消除[15]。故提升各級檢驗人員的能力，及時發現瘧疾，對瘧疾防治有重要意義[16]。聯合鏡檢法與金標法對瘧原蟲進行檢測，簡便易行，易于推廣，可彌補檢測人員技術上的不足，提高瘧原蟲檢出率，為不同醫療機構根據自身特點選擇瘧原蟲的檢測方法提供依據。