東莞地區340例β地中海貧血的基因診斷回顧分析

華仙麗 ，李敬河 ，梁愛芬 ，雷亞麗 ，隋洪

(1、東莞康華醫院，廣東 東莞 523080；2、東莞市石碣醫院，廣東 東莞 523290)

地中海貧血是一組嚴重威脅人類健康的常染色體隱性遺傳病，它是由珠蛋白基因突變導致珠蛋白合成數量不足或缺失引起的溶血性貧血[1]。我國長江以南地區是此病的高發區，尤以廣東、廣西、海南為甚。東莞市地處珠三角，人口結構復雜，聚居了南方各省務工人員，人口流動性大，不同人群之間通婚導致該地區地貧基因缺陷類型逐漸多元化，已成為當前影響出生人口素質的因素之一。因此，調查本地區地貧基因攜帶以及基因突變類型分布情況具有重要意義。當夫婦雙方均為同型地貧攜帶者時，同型攜帶者婚配的下一代有1/4的機會患重癥地中海貧血，出現嚴重貧血癥狀。因此，開展地貧篩查，必要時進行產前診斷，是防止重型地貧患兒出生，達到優生優育的重要措施。本文對東莞地區2016年1月-2017年10月期間β地貧基因攜帶者的基因頻率和血常規結果及血紅蛋白電泳結果進行了分析，以期明確本地區β地貧患者的基因分布，及其血常規參數及血紅蛋白電泳的變化情況。

1 對象與方法

1.1 對象 東莞地區2016年1月-2017年10月期間，經基因診斷確診β-地中海貧血攜帶的門診及住院患者共340例，其中男110例，女230例。年齡7個月～71歲，平均年齡27.5歲。

1.2 方法

1.2.1 血常規檢測 EDTA-K2抗凝血 2ml，邁瑞CD6800血細胞全自動計數儀檢測。

1.2.2 血紅蛋白電泳EDTA-K2抗凝血2ml，用SEBIA全自動毛細管電泳儀定量檢測各血紅蛋白成份的比例，分析異常血紅蛋白區帶。

1.2.3 β地貧初篩 同時進行血常規MCV/MCH和HbA2電泳分析的篩查，若 MCV＜82fl或（和）MCH＜27pg或（和）HbA2水平升高（＞3.5），則 β 地貧篩查陽性，即進行β地貧基因檢測。

1.2.4 基因診斷EDTA-K2抗凝血2ml，用深圳益生堂地貧基因檢測試劑，采用反向斑點雜交法檢測β-基因的基因型別。

1.2.5 數據分析 經基因診斷為β地貧的患者，統計分析其血常規及血紅蛋白電泳結果。數據均以均數±標準差（±s）形式表示。

2 結果

2.1 β-地中海貧血各基因突變類型及比例 340例患者中共檢出11種β-地貧基因突變類型，其中CD41-42M/N最為常見，占36.76%，其次是IVS-2-654M/N，占26.47%，CD17M/N與-28M/N分別占13.82%，東莞地區的地貧基因突變類型以CD41-42M/N，654M/，N，17M/N，-28M/N 4 種突變為主，占β突變的90.85%。見表1。

2.2 α-復合 β-地中海貧血檢測結果 見表2。

表1 β-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

2.3 β-地貧各基因型的血常規參數結果 -28/N的HGBMCVMCH與其他型別比較有統計學差異外，其余各組未見明顯差異。見表3。

2.4 MCV、MCH、Hb電泳單項檢測篩查地中海貧血的結果 在分子生物學技術確診的基礎上，評價MCV、MCH、Hb電泳對于β地貧篩查的靈敏度為99.02%、99.02%、99.35%。 見表 4。

3 討論

β-地中海貧血是為常染色體單基因遺傳血液病，是由于基因組中β珠蛋白基因突變導致β珠蛋白肽鏈缺如(β0)或合成不足(β+)所致，β-地貧單一雜合子可無臨床癥狀或僅有輕度貧血；雙重雜合子或純合子患者臨床表現為中度或重度貧血[2，3]。重度貧血的患兒，需定期或不定期輸血，不接受治療的患兒常常因發育遲緩而呈典型的 “地貧面容”，常在5歲以前因嚴重貧血或繼發感染在兒童期死亡[2]。重型β地貧的患兒除非找到合適的供體進行造血干細胞移植才有治愈的希望。因此，了解本地區β-地貧發生率及突變類型，加強地貧的宣傳教育，加強β-地貧產前篩查和產前基因診斷，仍是目前β-地貧防治最有效的措施。

表2 αβ復合型地中海貧血檢測結果

表3 β-地貧各基因型的血常規參數及血紅蛋白檢測結果（±s）

表3 β-地貧各基因型的血常規參數及血紅蛋白檢測結果（±s）

CD41-42M/N IVS-2-654M/N CD17M/N-28M/N n 125 90 47 47 HGB(g/L) MCV（fL） MCH(pg) HBA（%） HBF（%） HBA2（%）106.62±18.03 110.60±20.22 102.22±17.57 117.88±24.50 64.83±5.64 65.63±7.12 63.71±4.89 73.39±5.29 20.35±2.36 21.02±2.49 20.11±1.44 23.40±2.11 93.39±1.41 93.35±1.55 92.96±1.60 92.67±2.08 1.47±1.37 1.93±1.44 1.83±1.69 2.35±2.34 5.36±0.51 5.13±0.36 5.43±0.88 5.53±0.47

表4 MCV、MCH、Hb電泳單項檢測篩查地中海貧血的結果

不同地區、不同種族的人群有自已的常見基因突變類型。國內報道中國人最主要6種β地貧突變基因[4]分別為：CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C＞T)、-28(A＞G)、CDl7(A＞T)、CD71-72(+A)、CD26(G＞A)。 在國內β地貧高發區CD41-42(-TCTT)基因突變在廣東、廣西、臺灣、四川、海南四省占首位。IVS-2-654(C＞T)基因突變在香港占首位，而在廣東、臺灣、四川、海南等位居CD41-42突變之后。CDl7(A＞T)基因突變在廣西排第二位，僅次于CD41-42(-TCTT)突變[5]。而地理位置靠近廣西地區的中山小欖CDl7(A＞T)基因突變也排在第二位[6]。各研究[7-11]顯示廣東不同地區人口-28(A＞G)與CDl7(A＞T)突變人群比例排位略有不同。本實驗數據顯示，東莞地區排在前四位的是：CD41-42(-TCTT)占 36.76%占首位，IVS-2-654(C＞T)占 26.47%居第二位，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)各占13.82%（并列第三位），這四種突變類型約占全部突變類型的90.85%。本次統計東莞地區人口未區分戶籍，東莞地區匯集廣東各地及廣西、海南等地的務工人員，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)突變的人群比例相近。

在β地貧基因型分組血常規參數比較中可以發現，-28M/N組的MCV、MCH、HGB最高，其原因是發生在轉錄啟動子附近的突變-28M/N可影響到肽鏈合成的速率，而發生在編碼區的突變41-42M/N和17M/N則影響到了肽鏈的穩定性及其產量。故-28M/N的貧血情況較其余三組輕。其余三組結果差異無統計學意義。

血紅蛋白電泳對地貧的篩查起到了非常重要的作用，能夠定量檢測HbA、HbF、HbA2含量，將地中海貧血進行初步分為a地貧和β地貧，同時還可篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等。有研究顯示[12]，血紅蛋白電泳可以篩查出95%以上的β-地貧或α-復合β-地貧，有助于臨床β地貧確診。當HbA2水平升高（＞3.5）時，產前診斷中若僅進行β-地貧基因診斷，忽視α-地貧基因診斷，會導致重癥α地貧患兒的出生[13]。因此，在HbA2升高的可疑地貧人群中，有必要α和β基因一起檢測，以免漏檢α和β地貧基因攜帶情況。

迄今為止，中國人群已發現30余種β珠蛋白基因的點突變，本實驗檢測的17種基因型覆蓋了我國β突變類型的95%以上[14]，本實驗所用方法（PCR-RDB）不檢測缺失型β-地中海貧血和罕見的β突變類型。因此，在對于地貧初篩陽性、HbA2升高提示存在β地貧，而常規PCR-RDB方法未檢測到突變者要進行測序分析，避免罕見突變β地貧患者的漏診，從而避免罕見突變引起重型β地貧患兒的出生[15]。

本研究在分子生物學技術確診為β-地貧的基礎上，評價MCV、MCH、Hb電泳對于β地貧篩查的敏感性為99.02%、99.02%、99.35%。三項聯合檢測對β地貧篩查而言，敏感性高，本研究未發現有漏檢情況。說明這3個指標的聯合檢測對于β地貧是非常好的一個篩查策略。