寧夏回族自治區漢族與回族Rh陰性表型分布調查

邵峰，步曉筠，楊潔，劉建成

(寧夏血液中心，寧夏 銀川 750000)

Rh血型系統是人類紅細胞血型系統中最為重要的基于蛋白的血型系統，在已知血型系統中，它表達的抗原數量最多，分子機制也最復雜，現在已發現51種抗原，其中常見涉及臨床問題的Rh血型抗原主要是D，C，c，E，e這 5種。Rh陰性分布在人種間存在顯著差異，我國Rh陰性分布少數民族與漢族間也存在民族間差異，[1-4]此前針對回族的研究較少。研究者對寧夏回族自治區初篩確認為Rh陰性的獻血者的血清學表型與不規則抗體進行了回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月1日至2016年12月31日寧夏血液中心的初次無償獻血者共135159例。

1.2 儀器與試劑 Hemotype全自動血型分析儀（意大利GSM公司），KA-2200型離心機（日本Kubota公司）；單克隆IgM和IgG抗-D混合劑（英國Millipore公司、加拿大Dominion Biologicals limited公司），IgG抗-D試劑、直接抗人球蛋白試劑、抗C、抗c、抗 E、抗e、抗-A、抗-B標準血清、篩選細胞、譜細胞試劑(上海血液生物醫藥公司)。

1.3 方法

1.3.1 Rh陰性初篩試驗 使用英國Millipore單克隆IgM和IgG抗-D混合劑進行鹽水微板初篩。

1.3.2 Rh陰性確認試驗 使用英國Millipore公司和加拿大Dominion Biologicals limited公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑以及上海血液生物醫藥公司IgG抗-D試劑3種不同抗-D試劑，對初篩陰性者的受檢紅細胞進行間接抗人球蛋白試驗(IAT)，同時做陰陽對照。觀察結果如果均陰性就確認判定為Rh陰性。

1.3.3 Rh血清學表型鑒定 分別用抗C，抗c，抗E和抗e試劑對Rh陰性標本進行生理鹽水試管法血清學分型。

1.3.4 抗體篩查與鑒定 受檢血清用篩選細胞(3個篩選細胞)與自身細胞作為一組，通過鹽水法進行不規則抗體檢測，抗體篩選陽性時再用譜細胞與自身細胞為一組進一步鑒定其特異性。

1.3.5 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件進行分析，基因頻率計算方法采用陸瓊[5]推導的公式計算進行Hardy-Weinberg吻合度檢驗，通過基因單體型計算出各個表現型的理論值，進行χ2檢驗。P＞0.05為期望值與觀察值差異無統計學意義。

2 結果

2.1 Rh陰性檢出比例 135159例標本中共初篩511例，檢出D變異型54例(0.04%)，確認Rh陰性457例(0.34%)，寧夏漢族標本108835份中確認為Rh陰性316例（0.29%），寧夏回族標本22511例中確認為Rh陰性122例（0.54%）。

2.2 Rh陰性獻血者中回族及漢族Rh陰性表型分布 寧夏漢族與寧夏回族Rh陰性各表型分布進行統計學卡方檢驗，均無顯著性差異（P＞0.05）。漢族陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗結果，觀察值與理論值經 χ2檢驗，P＜0.05，證明調查數據不符合Hardy-Weinberg平衡。回族陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗結果，觀察值與理論值經χ2檢驗，P＞0.05，證明調查數據符合Hardy-Weinberg平衡，見表1及表2。

2.3 單倍型基因頻率分布情況 寧夏漢族單倍型基因頻率分布情況與國內其他地區類似，寧夏回族單倍型基因頻率dce高于漢族，介于漢族與白種人之間。

2.4 血清不規則抗體篩查結果 457例Rh陰性獻血者血清中檢出含有不規則抗體的7例(1.5%)，其中5例為IgG類抗D抗體，1例為IgG類抗D抗體合并抗C抗體，1例特異性不明確；檢出不規則抗體的Rh陰性獻血者其中4例為dccee血清學表型，2例為dCcee血清學表型，1例為dccEe血清學表型。對檢出不規則抗體的獻血者隨訪調查，均為女性且均有妊娠史，其中3例合并輸血史。

3 討論

Rh陰性率及表型分布在人種間存在顯著差異，我國Rh陰性分布少數民族與漢族間也存在民族間差異。漢族標本108835例中確認為Rh陰性316例（0.29%），符合漢族Rh陰性分布范圍。回族標本22511例中確認為Rh陰性122例 （0.54%），寧夏回族獻血者Rh陰性率高于漢族。

寧夏漢族人群的Rh陰性表現型dccee(58.86%)＞dCcee(28.80%)＞dccEe(4.43%)＞dCcEe(3.16%)＞dCCee(4.11%)，以 dccee 和 dCcee 為主，寧夏漢族Rh陰性表型分布與上海、深圳、石家莊地區RhD陰性人群的表型分布相似[6-8]。寧夏回族人群 RhD陰性血清學表型 dccee(66.39%)＞dCcee(23.77%)＞dccEe(4.92%)＞dCcEe(2.46%)＞dCCee(2.46%)，與寧夏漢族Rh陰性表型分布無顯著性差異，但回族Rh陰性人群dccee(66.39%)檢出頻率略高于漢族(58.86%)，體現出寧夏回族Rh陰性血型的分布特點。

表1顯示寧夏漢族Rh陰性單倍型頻率特點：dce(0.767203)＞dCe(0.199006)＞dcE(0.028874)＞dCE(0.006944)，寧夏漢族Rh陰性獻血人群中的單倍型基因頻率與上海、山東濰坊、南昌、洛陽等地區Rh陰性獻血者單倍型基因頻率相比較無差異[5，9-11]，體現出我國漢族人群Rh陰性血型分布特點，為進一步探討Rh陰性血型在漢族人群遺傳學意義提供了一定的數據參考。本研究中寧夏漢族Rh陰性無償獻血人群中期望值與觀察值差異均有統計學意義，Hardy-Weinberg吻合度不佳，考慮原因可能為寧夏漢族外來人口流入，外來基因摻入，改變原有寧夏漢族群體的基因頻率。表2中顯示寧夏回族獻血者調查數據符合Hardy-Weinberg平衡，寧夏回族獻血者的基因頻率分布符合寧夏回族基因頻率分布特點。回族Rh陰性單倍型頻率特點：dce(0.814801)＞dCe(0.155818)＞dcE (0.030191)＞dCE(0.000000)，與文獻報道的上海、南昌、青島、德國和高加索人的RhD陰性單倍型基因頻率分布情況比較，可以看出：寧夏漢族人群與上海、南昌、青島漢族人群相似，寧夏回族單倍型分布介于漢族與哈薩克族、德國、高加索白種人之間[5，10]。

表1 寧夏漢族Rh陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗結果

表2 寧夏回族Rh陰性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度檢驗結果

表3 各地區Rh陰性單倍型基因頻率分布情況

Rh血型系統抗原有很強的免疫原性，在缺少相應抗原的個體中因輸血或妊娠等免疫刺激可產生相對應的Rh血型抗體。本研究發現的不規則抗體7例均為女性，均有妊娠史，其中3例合并輸血史。隨著輸血醫學的發展，因Rh陰性患者無D抗原，對這類患者臨床上只輸Rh陰性血液，接觸E、C、c、e抗原刺激幾率增高，繼而產生抗體的幾率高，而輸血引起產生抗D者會逐漸少見。但Rh陰性患者因妊娠刺激產生抗D抗體幾率高于其他抗原，因而有多次輸血史和妊娠史的患者配血時應把這些抗原作為常規檢測，為患者提供Rh系統相合的血液，減少輸血反應的發生。

寧夏回族獻血者Rh陰性率高于漢族，寧夏回族獻血者Rh陰性表型分布與漢族獻血者間未見顯著性差異，但單倍型基因頻率呈現本民族特點。由于本研究檢測Rh確認未進行吸收放散實驗，因而不能排除Del的存在導致觀察值數據偏高的問題。通過對寧夏Rh陰性表型及基因頻率的調查和分析，為今后稀有血型供者庫積累數據，便于科學合理用血指導。目前尚缺乏在國內不同地區間不同民族間Rh陰性人群分型分布的大規模調查數據，不同地區不同民族間的分型分布差異情況，有待于進一步研究。