膠乳凝集比濁法檢測(cè)卡馬西平血藥濃度的性能評(píng)價(jià)

許俊，鄒勇

(進(jìn)賢縣人民醫(yī)院，江西 南昌331700)

卡馬西平(CBZ)是一種抗癲癇藥物，在臨床上主要用于治療三叉神經(jīng)痛、部分性癲癇發(fā)作、全身性強(qiáng)直陣攣發(fā)作等疾病[1-5]。CBZ具有治療指數(shù)范圍窄，吸收緩慢，個(gè)體差異大，易發(fā)生毒性反應(yīng)等特點(diǎn)[6-9]。為保證其血藥濃度，并減輕毒副作用，CBZ血藥濃度監(jiān)測(cè)已經(jīng)成為臨床合理用藥的重要依據(jù)。本文即探討膠乳凝集比濁法檢測(cè)CBZ血藥濃度的臨床實(shí)用性，以求建立符合縣級(jí)基層醫(yī)院全自動(dòng)生化分析儀可開展的藥物濃度監(jiān)測(cè)方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 收集我院服用CBZ患者的血清標(biāo)本105份，其中包括小于治療濃度區(qū)間下限標(biāo)本為23份，治療濃度范圍以內(nèi)標(biāo)本為62份，大于治療濃度區(qū)間上限標(biāo)本為20份，注意排除溶血等因素造成的不合格標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 OLYMPAS AU2700全自動(dòng)生化分析儀，日本積水醫(yī)療株式會(huì)社膠乳凝集比濁法CBZ檢測(cè)試劑盒和校準(zhǔn)品；Abbott AxSYM熒光偏振免疫分析儀以及配套CBZ檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 線性范圍驗(yàn)證 使用高值標(biāo)本26.5μg/ml與低值標(biāo)本0.32μg/ml按不同比例混合血清，最終得到11個(gè)濃度梯度。各濃度標(biāo)本混勻后連續(xù)測(cè)定2次，計(jì)算均值。根據(jù)理論稀釋比、實(shí)測(cè)濃度均值擬合線性曲線。

1.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 選擇高、中、低等3種濃度水平的伯樂質(zhì)控品進(jìn)行批內(nèi)、批間重復(fù)性試驗(yàn)，其中批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)是將3種濃度水平質(zhì)控品連續(xù)重復(fù)檢測(cè)20次，批間重復(fù)性試驗(yàn)是將3種濃度水平質(zhì)控品每天固定時(shí)間檢測(cè)一次，連續(xù)20d。計(jì)算變異系數(shù)（CV）。

1.3.3 相關(guān)性分析 取100份臨床標(biāo)本 （CBZ濃度覆蓋線性范圍）分別用本法（Y）與免疫熒光偏振法（X）同時(shí)測(cè)定，分析檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r值。

1.3.4 回收試驗(yàn) 在19體積的5.00μg/ml CBZ標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入 1體積的 40.00μg/ml、60.00μg/ml CBZ標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)行回收試驗(yàn)。每個(gè)樣本測(cè)定3次取平均值，計(jì)算回收率。

1.3.5 干擾試驗(yàn) 在19體積的5.00μg/ml CBZ標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入1體積的三酰甘油（1.00mmol/L、5.00mmol/L）、 結(jié)合膽紅素（10.00mg/dL、20.00mg/dL）、溶血血紅蛋白（100mg/dL、500mg/dL）和抗壞血酸（10.00mg/dL、50.00mg/dL）。每個(gè)樣本測(cè)定 3 次取平均值，并計(jì)算理論值與實(shí)測(cè)值的差異。

2 結(jié)果

2.1 線性范圍 理論稀釋梯度與實(shí)測(cè)濃度均值之間呈良好的線性關(guān)系（r=0.99，P＜0.01），因此膠乳凝集比濁法檢測(cè)CBZ血藥濃度的線性范圍為0.32～26.50μg/ml，見圖 1。

2.2 重復(fù)性 對(duì)靶值濃度分別為2.50、8.50、18.00 μg/ml的3種水平質(zhì)控品進(jìn)行批內(nèi)、批間重復(fù)性試驗(yàn)，批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)CV分別為3.43%、3.52%、3.47%；批間重復(fù)性試驗(yàn)CV分別為4.45%、4.35%、4.29%，即批內(nèi)、批間重復(fù)性試驗(yàn)CV均＜5%，可判定重復(fù)性結(jié)果良好。結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表

圖1 線性范圍驗(yàn)證

2.3 相關(guān)性分析 分別用膠乳凝集比濁法和免疫熒光偏振法試劑對(duì)100份不同CBZ濃度的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，膠乳凝集比濁法、免疫熒光偏振法檢測(cè)結(jié)果分別為（13.25±11.73）μg/ml和（13.12±11.89）μg/ml，差異無顯著性（P＞0.05），兩種方法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù) r=0.967（P＜0.05）。 見圖 2。

圖2 兩種檢測(cè)方法的相關(guān)性結(jié)果

2.4 回收試驗(yàn) 在19體積的5.00μg/ml CBZ標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入 1 體積的 40.00μg/ml、60.00μg/ml CBZ標(biāo)準(zhǔn)液，其回收率分別為101.5%、97.8%，平均回收率為99.65%，比例系統(tǒng)誤差僅0.035%，符合要求。

2.5 干擾試驗(yàn) 三酰甘油濃度達(dá)到5.00mmol/L、結(jié)合膽紅素濃度達(dá)到20.00mg/dL、溶血血紅蛋白濃度達(dá)到500mg/dL、抗壞血酸濃度達(dá)到50.00mg/dL時(shí)實(shí)測(cè)結(jié)果與理論值差異均低于5%，上述濃度之內(nèi)的干擾物質(zhì)對(duì)本方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯干擾。結(jié)果見表2。

表2 干擾試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

治療藥物檢測(cè)（TDM）是應(yīng)用現(xiàn)代分析技術(shù)測(cè)定患者體液中的藥物及其代謝產(chǎn)物濃度，以優(yōu)化設(shè)計(jì)或調(diào)整給藥方案，以實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療，提高療效，減免毒副反應(yīng)的藥學(xué)技術(shù)方法[10]。通過TDM的個(gè)體化給藥，不僅可使癲癇發(fā)作的控制率從47%提升到74%，而且還可以改善患者的治療依從性，降低醫(yī)療費(fèi)用和醫(yī)療資源的使用，提高治療成功率[11-13]。目前TDM多采用高效液相色譜、熒光偏振免疫分析等方法，其對(duì)應(yīng)的儀器平臺(tái)分別是高效液相色譜儀和免疫分析儀，但是縣級(jí)及以下醫(yī)療單位高效液相色譜儀和免疫分析儀的普及率不高，從而限制了TDM的臨床應(yīng)用[13-17]。

本研究表明，使用膠乳凝集比濁法在生化儀器上進(jìn)行CBZ檢測(cè)，可以達(dá)到臨床使用要求。相對(duì)于HPLC和化學(xué)發(fā)光方法，生化分析方法具有分析周期短、操作簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高、性能穩(wěn)定等特點(diǎn)，可用于急診和大樣本量檢測(cè)，而且生化分析方法不需要專用儀器、試劑，可以應(yīng)用于各種全自動(dòng)生化分析儀，便于各類型醫(yī)院開展TDM項(xiàng)目，所以應(yīng)用于生化分析儀的膠乳凝集免疫比濁法是TDM技術(shù)的一大創(chuàng)新。

本方法適用于基層縣級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展CBZ藥物濃度檢測(cè)，其高效率、低成本的特點(diǎn)同時(shí)也提升了縣級(jí)基層實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)水平、科研能力，并可有效地提高檢驗(yàn)效率，提高臨床用藥的科學(xué)性、安全性、合理性，從而更好地服務(wù)于臨床，保障人民群眾的身體健康。