高效液相色譜法測定禽蛋中蘇丹紅殘留量

◎ 苗 翠

（遼寧省獸藥飼料畜產品質量安全檢測中心，遼寧 沈陽 110016）

蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性化工染色劑，在食品中使用具有增色的作用。蘇丹紅有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共4種，經毒理學研究表明，其具有造成人類肝臟細胞的DNA突變，具有致癌致突變的特性[1-2]，在我國禁止使用于食品中。由于在目前有不法養殖戶為謀取利益在蛋禽飼養中違法添加，導致禽蛋中蘇丹紅殘留的情況時有發生，自2005年起，類似肯德基、亨氏等一些大食品企業在北京、浙江等多省市均出現過蘇丹紅事件。北京市場上也曾出現“紅心鴨蛋事件”，據報道這些紅心鴨蛋是由于鴨農在飼料中加入蘇丹紅Ⅳ造成的[3]。

目前，針對禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測尚無明確的檢測標準，在監管過程中多依據國標GB/T 19681-2005《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法》實施檢測[4-5]，但該準標對于禽蛋檢測中的陽性樣品確證的準確性不足，存在一定風險，難以滿足禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測，本文研究建立了一種采用SDR專用固相萃取柱，回收率高、快捷、靈敏和穩定的適用于禽蛋中蘇丹紅殘留的檢測方法，為監管提供了有力技術支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜儀；紫外測器；色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱4.6×150 mm，5 μm；Mettler NE260分析天平；Therom Biofuge離心機；J.Tbaker ASEMD 60固相萃取裝置；Buchi V-700旋轉蒸發儀；美國Orgaomation公司N-EVAP112氮氣吹干儀；Stuart SA8渦旋混合器。

正己烷、丙酮、二氯甲烷、乙腈，均為色譜純；蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號標準品，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH（蘇丹紅Ⅰ批號30619、蘇丹紅Ⅱ批號10615、蘇丹紅Ⅲ批號20619、蘇丹紅Ⅳ批號91102）；實驗所用雞蛋均為遼寧省獸藥飼料畜產品質量安全檢測中心日常檢測樣品；實驗用水為一級水；固相萃取柱為安普公司的sudanred專用柱。

1.2 標準溶液的制備

分別取蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解配制成蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ 0.1 mg/mL對照溶液。

1.3 樣品制備

稱取煮熟的蛋黃樣品5 g于離心管中，加入10 mL正己烷勻漿5 min，3 000 r/min離心10min，吸取正己烷層，于下層中加入正己烷6 mL勻漿，離心，合并正己烷，加入5 g無水硫酸鈉脫水，過濾后待用。固相萃取小柱依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化，備用液過柱，5 mL正己烷淋洗，5 mL二氯甲烷洗脫，洗脫液于40 ℃下氮氣吹干，用流動相1.0 mL定容，0.22 μm濾膜過濾，上機。

1.4 色譜條件

色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱，4.6×150 mm，5 μm；流動相：乙腈∶水（95∶5，V∶V）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：波長500 nm；柱溫：35 ℃進樣量：20 μL。結果見圖1。

圖1 蘇丹紅標準品色譜圖

2 結果與討論

2.1 檢出限和定量限的確定

按照1.3要求，?。?±0.5）g雞蛋樣品，分別制備成一系列濃度的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，按照本方法操作進行，結果顯示5 ng/g的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，其檢測圖譜定量離子的信噪比總能大于3以上，10 ng/g的蘇丹紅樣品，其信噪比在10以上，且其圖譜清晰，分離效果較好，所以將蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ檢出限和定量限分別定為5 ng/g和10 ng/g。

2.2 對標準曲線

分別配制蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的 10、50、100、200、500 μg/L 和 1 000 μg/L 的標準品，上機。以標準品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的標準曲線結果見表1。

表1 蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標準品曲線結果表

結果表明，蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標準品曲線在10～1 000 μg/L范圍內線性關系很好，相關系數均在0.99以上，符合確證實驗相關要求。

2.3 添加回收試驗

對分別添加20 ng/g、50 ng/g、100 ng/g蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的雞蛋樣品進行6次平行檢測，平均回收率情況見表2。

2.4 精密度

對不同添加濃度的樣品進行檢測，其回收率和變異系數情況見表2。批間和批內變異系數均小于15%，符合實驗室質量控制規范相關要求。詳見表2。

表2 雞蛋中添加回收和變異系數統計表

2.5 準確度

通過對不同基質進行不同濃度的添加回收試驗，測得其檢測值和真值的偏差，詳見表3。

表3 準確度統計結果

3 結論

本文研究應用高效液相色譜法檢測禽蛋中的蘇丹紅，前處理方法簡單快速，不需要進行國標方法中復雜的活度調節和活性測試，整個操作過程不超過1 h；耗費溶劑少，僅為國標方法的1/3；采用SDR專用固相萃取柱，提高了回收率；填補現行標準中無蘇丹紅在禽蛋中的殘留檢測標準的空白，為監管提供了有力技術支持。