市售雷公藤多苷片中雷公藤內(nèi)酯甲含量比較

黃海燕，鐘建理 ，饒偉文

（廣西壯族自治區(qū)桂林市食品藥品檢驗所，廣西 桂林 541001）

雷公藤多苷片可祛風(fēng)解毒、除濕消腫、舒筋通絡(luò)，具有抗炎及抑制細胞免疫和體液免疫等作用，多用于風(fēng)濕熱瘀、毒邪阻滯所致的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征、白塞氏三聯(lián)征、麻風(fēng)反應(yīng)、自身免疫性肝炎等。原收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十七冊）》[1]，名為雷公藤多甙片，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS－B－3350－98－2011[2]，其含量測定均以雷公藤內(nèi)酯甲為指標(biāo)，每片含雷公藤內(nèi)酯甲不得少于10 μg。雷公藤治療安全范圍較窄，有效治療量與最小中毒量較接近。服用雷公藤后產(chǎn)生嚴重臟器損害致死亡的，90%以上的患者是因超大劑量服用[3]。因此，控制其臨床用藥量是控制雷公藤中毒的關(guān)鍵。但由于雷公藤多苷原料的質(zhì)量不一，或生產(chǎn)企業(yè)為避免不符合標(biāo)準(zhǔn)要求，或為了追求療效，加大用料量，給患者帶來重大安全隱患。為了考察市售雷公藤多苷片的質(zhì)量穩(wěn)定性，指導(dǎo)醫(yī)生合理、安全、有效用藥，本研究中對不同廠家雷公藤多苷片中雷公藤內(nèi)酯甲的含量進行了比較。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：Waters 2695高效液相色譜分離單元－Waters 2489檢測器（美國Waters公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司）；KQ－600E型超聲儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）。

試藥：雷公藤內(nèi)酯甲對照品（批號為 111597－200505，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。雷公藤多苷片共10批，均為市售品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ThermoBDSHypersilC18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流動相：甲醇 －乙腈 －水（64 ∶16 ∶20）；檢測波長：210 nm；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2 溶液制備

取雷公藤內(nèi)酯甲對照品約10mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL含0.1 mg的對照品溶液。取本品研細，取相當(dāng)于20片，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，容器及濾器用乙酸乙酯適量分次洗滌，合并濾液及洗液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 測定方法

精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以外標(biāo)法計算雷公藤內(nèi)酯甲的含量。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為61.14 μg／mL的對照品溶液，分別進樣 1，2，5，10，20，30，50 μL，測定。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進樣量（μg，X）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y＝905.19X－11 009，r＝0.999 9（n＝7）。結(jié)果表明，雷公藤內(nèi)酯甲進樣量在61.14～3 057.00 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12 h時測定。結(jié)果峰面積的 RSD為 0.81%（n＝5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續(xù)進樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.86%（n＝5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：稱取同一批樣品（1號樣品）6份，依法測定含量。結(jié)果平均含量為 0.167 2 mg／g，RSD為0.94%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：分別取質(zhì)量濃度為0.061 14 g／L的對照品溶液1，2，3 mL各3份，置三角燒瓶中，揮干溶劑，加入研細的已知含量的樣品（0.167 2 mg／g）10片，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.5 樣品含量測定

取樣品10批雷公藤多苷片（9個廠家），依法制備供試品溶液并測定，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果見表2。

表1 雷公藤內(nèi)酯甲加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

表2 各批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

雷公藤藥材有大毒，雷公藤多苷片作為其制劑，療效好但毒副作用也大。雷公藤多苷片臨床不良反應(yīng)報道較多[4－14]，主要表現(xiàn)為藥物性肝炎、腎功能不全、粒細胞減少、白細胞減少、血小板減少、閉經(jīng)、精子數(shù)量減少、心律失常等[15]，甚至有造成死亡的后果。印成霞[16]對1984年至2013年中國涉及雷公藤多苷片致藥品不良反應(yīng)的28篇文獻中報道的55例病例報告進行統(tǒng)計與分析，有3例死亡病例，其中急性腎功能衰竭、急性再障性貧血并發(fā)滲出性胸膜炎各1例，患者出現(xiàn)大口咳血導(dǎo)致死亡1例。

不同生產(chǎn)廠家的雷公藤多苷片中雷公藤內(nèi)酯甲含量差異大，其中有2個廠家不合格（標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每片不得少于10 μg），同時測定樣品中雷公藤甲素的含量，結(jié)果最高為每片7 μg，最低則為0（未檢出），最大相差7倍。說明不同生產(chǎn)廠家的雷公藤多苷片質(zhì)量不穩(wěn)定。建議制劑標(biāo)準(zhǔn)同時規(guī)定合理的含量上下限，以規(guī)范企業(yè)生產(chǎn)，保證制劑質(zhì)量穩(wěn)定，保障用藥安全有效。