血清miR-375、TSGF、SCC聯合檢測對宮頸癌的診斷價值

鄧岳紅，錢沁佳

(海南省第三人民醫院，海南三亞572000)

宮頸癌是常見的婦科腫瘤之一。宮頸癌早期患者無明顯的癥狀和體征，易造成漏診或誤診[1]。隨著宮頸細胞學篩查的普及，宮頸癌及宮頸上皮內瘤變的早期檢出率逐漸提高，病死率明顯下降[2，3]。然而宮頸細胞學檢查因假陰性率較高而逐漸被取代。血清學檢查具有便捷、快速、靈敏度高等特點，受到臨床的廣泛應用。惡性腫瘤特異性生長因子(TSGF)為廣譜腫瘤標志物，對多種惡性腫瘤均具有較高的敏感度；鱗癌抗原(SCC)現已廣泛用于宮頸癌的早期診斷及預后，微小RNA-375(miR-375)在食管癌及前列腺癌等患者體內表達降低，并有報道指出其在宮頸癌組織中表達同樣下調。目前關于三者聯合檢測對宮頸癌的診斷價值報道少見。本研究通過觀察宮頸癌患者血清miR-375、TSGF、SCC水平變化情況，探討其對宮頸癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年8月～2017年9月我院收治的宮頸癌患者32例(宮頸癌組)，年齡35～74(53.25±4.67)歲。根據2000版國際婦產科聯盟標準進行FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期19例。宮頸上皮內瘤變患者23例(宮頸上皮內瘤變組)，年齡28～70(50.67±7.05)歲。同期健康體檢者25例(對照組)，年齡24～68(54.37±5.58)歲。三組年齡具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會批準，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 采集受試者空腹靜脈血5 mL，離心提取上清液，-80 ℃保存待測。①血清miR-375檢測：采用實時熒光定量PCR法。使用miRNA提取試劑盒提取總miRNA，反轉錄合成cDNA。以cDNA為模板，用熒光定量PCR檢測試劑盒進行檢測。采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。②血清TSGF檢測：采用光度比色法。取40 μL血清，加入試劑1 mL，吸取上清液于波長470 nm比色，全自動生化分析儀測定吸光度，根據標準曲線計算其含量。③血清SCC檢測：采用ELISA法。取200 μL血清，使用SCC ELISA試劑盒及全自動酶聯免疫分析儀BIOBASE2000測定其含量。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計量資料數據服從正態分布，采用x±s表示，三組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；若不服從正態分布，則用中位數(四分位數間距)表示，三組間比較采用Kruskal-WallisH方法，組間兩兩比較采用Mann-WhitneyU比較。通過二元Logistic回歸分析計算各腫瘤標志物診斷宮頸癌的概率預測值，以miR-375、TSGF、SCC單獨和聯合檢測的預測概率值為因變量，以診斷結果為狀態變量繪制ROC曲線，計算曲線下面積(AUC)，比較各指標的診斷效能。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組血清miR-375、TSGF、SCC水平比較 宮頸癌組、宮頸上皮內瘤變組、對照組血清miR-375的相對表達量分別為0.31(0.21，0.58)、0.82(0.63，1.83)、1.29(1.06，1.61)，宮頸癌組低于宮頸上皮內瘤變組和對照組，宮頸上皮內瘤變組低于對照組(P均<0.05)。三組血清TSGF水平分別為(83.85±17.47)、(65.49±8.81)、(68.35±11.10)U/mL，宮頸癌組高于宮頸上皮內瘤變組和對照組(P均<0.05)，宮頸上皮內瘤變組與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。三組血清SCC水平分別為(4.07±2.28)、(1.76±0.98)、(0.78±0.39)μg/L，宮頸癌組高于宮頸上皮內瘤變組和對照組，宮頸上皮內瘤變組高于對照組(P均<0.05)。

2.2 血清miR-375、TSGF、SCC診斷宮頸癌的效能 見圖1。單獨診斷宮頸癌時，miR-375診斷價值最大，SCC診斷價值最小，三者聯合檢測診斷價值高于單獨指標檢測，見表1。miR-375的敏感度、特異度、準確率高于TSGF、SCC，三者聯合檢測診斷宮頸癌的敏感度、特異度及準確率均高于單獨指標檢測。見表2。

圖1 miR-375、TSGF、SCC單獨和聯合檢測診斷宮頸癌的ROC曲線

表1 miR-375、TSGF、SCC單獨和聯合檢測診斷宮頸癌的AUC結果

表2 miR-375、TSGF、SCC單獨和聯合檢測對宮頸癌的診斷價值(%)

3 討論

宮頸癌患者在早期無特殊表現，隨著病情的不斷加重，發展至中晚期時，患者會出現不規則流血等癥狀，并且對于年輕女性危害更大，因此提高宮頸癌的早期診斷率至關重要。目前診斷宮頸癌的手段多依靠宮頸刮片、陰道鏡等傳統檢查方式，此類方法漏診率較高；近年來，隨著對腫瘤標志物及RNA研究的深入，有學者提出結合腫瘤標志物及RNA診斷宮頸癌具有較高的診斷價值。

miRNA是真核生物體內的一類非編碼小RNA分子，其長度為18～22個核苷酸，參與細胞的增殖、分化及凋亡[4]。研究顯示，miR-375可結合轉錄因子SP1抑制宮頸癌細胞的轉移，并且發現其在宮頸癌患者腫瘤組織中表達下調[5～7]。Hao等[8]報道，宮頸癌Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-375表達水平低于宮頸癌Ⅰ～Ⅱ期患者，認為miR-375不僅可作為宮頸癌的診斷標志物，并且能在一定程度上反映病情的嚴重程度。本研究結果顯示，宮頸癌組血清miR-375表達低于宮頸上皮內瘤變組和對照組，宮頸上皮內瘤變組低于對照組。表明宮頸癌患者miR-375表達減少，腫瘤細胞受抑制作用減弱，增殖轉移的概率增大。

TSGF是惡性腫瘤生長相關的糖類物質和代謝物等物質的統稱，其特點是在腫瘤形成的早期濃度就已經很高，異于其他腫瘤標志物[9～11]。TSGF水平升高可加快腫瘤組織血管增生，促進血管網形成，并參與腫瘤組織的形成、生長及擴散[12]。本研究結果顯示，宮頸癌組血清TSGF水平高于宮頸上皮內瘤變組和對照組，提示TSGF可作為判別宮頸癌與宮頸其他疾病的標志物；而宮頸上皮內瘤變組血清TSGF水平與對照組比較差異無統計學意義，表明TSGF為腫瘤特異性標志物，在非癌變組織表達無明顯變化。

SCC是從鱗狀上皮細胞中分離出來的抗原物質，參與正常和惡變時的蛋白分解調控，是子宮頸鱗癌的首選腫瘤標志物[13]。SCC主要存在于宮頸、頭頸等鱗狀上皮細胞中，在高分化的細胞中敏感性更高[14]。本研究結果顯示，宮頸癌組血清SCC水平高于宮頸上皮內瘤變組和對照組，宮頸上皮內瘤變組高于對照組，表明SCC可作為區別宮頸癌及宮頸上皮內瘤變的指標，并且其水平在惡性病變組織中表達明顯升高，早期進行檢測可敏感、準確地診斷疾病。

本研究進一步分析了miR-375、TSGF、SCC單獨和聯合檢測對宮頸癌的診斷價值。結果表明，單獨指標檢測診斷宮頸癌時，miR-375診斷價值較大，SCC診斷價值最小，聯合檢測診斷價值高于單獨指標檢測;聯合診斷的敏感度、特異性及準確率均高于單獨腫瘤標志物檢測。

綜上所述，宮頸癌患者血清TSGF、SCC水平升高，miR-375水平降低，三者聯合檢測有助于宮頸癌的診斷。