一種毛冬青偽品的鑒別

胡 恩 陳清容

（福建中醫(yī)藥大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院三明市第二醫(yī)院，福建 永安 366000）

毛冬青為冬青科冬青屬毛冬青（Ilex pubescens Hook. et Arn.）的根，具有活血通脈、清熱解毒、消腫止痛的功效。有研究表明毛冬青中含有三萜類、黃酮類、酚類、鞣質(zhì)等多種成分[1]。在工作中，發(fā)現(xiàn)一種毛冬青飲片（安徽***中藥飲片公司，批號(hào)：150901，標(biāo)注產(chǎn)地為湖北）可疑為偽品（以下簡(jiǎn)稱可疑毛冬青）。原因：毛冬青在中國植物志所記載的產(chǎn)地中并未包含湖北[2]。而該批產(chǎn)地直接標(biāo)注為湖北。所以有充分的理由懷疑為偽劣毛冬青。鑒別如下。

1 性狀鑒別

筆者自采毛冬青根呈圓柱形，有的分枝，長短不一，直徑1～4 cm。表面灰褐色至棕褐色，根頭部具莖枝及莖殘基；外皮稍粗糙，有縱向細(xì)皺紋及橫向皮孔。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，不易折斷，斷面皮部菲薄，木部發(fā)達(dá)，土黃色至灰白色，有致密的放射狀紋理及環(huán)紋。氣微，味苦、澀而后甜。為塊片狀，大小不等，厚0.1～1 cm。

可疑毛冬青從外觀上看和正品毛冬青有顯著差別，正品直徑一般不超過4 cm。而該可疑毛冬青飲片（圖1）一般在4～15 cm，有的超30 cm以上。偽品外皮粗，部分可見細(xì)小的髓部（來源于莖，而非來源于根）。正品味苦澀微回甘，而可疑偽品味微苦。可疑偽品的原植物來源不祥。

三明地區(qū)自采毛冬青藥材（圖2）。經(jīng)原植物（圖3）基原鑒定確定為毛冬青（Ilex pubescens Hook. et Arn.），切制成的飲片直徑大小大部分分布在1～4 cm。外皮灰褐色，切面灰白或類白。質(zhì)堅(jiān)硬，木質(zhì)部發(fā)達(dá)。射線相對(duì)明顯。味苦澀微回甜（鮮品更加明顯）。

根椐中國植物志記載，毛冬青原植物在3～4 m高[2]（筆者在三明實(shí)地考察發(fā)現(xiàn)大部分在1～2 m高，3 m以上少見）。以此推斷，毛冬青根的直徑難以超過8 cm，廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)2011版也把毛冬青飲片直徑定為1～8 cm。有學(xué)者研究認(rèn)為毛冬青直徑為1～4 cm[3-4]更加符合筆者自采毛冬青飲片的實(shí)際情況。從大小上看，湖北產(chǎn)毛冬青飲片（圖1）直徑不少達(dá)10 cm以上，遠(yuǎn)超作者自采的毛冬青飲片，也不符合2011版廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)，為偽品。

2 理化鑒別

分別取1、2號(hào)供試品藥材粉末各1 g，加乙醇25 mL加熱回流1 h，濾過，取濾液2 mL，分別滴加三氯化鐵試液5滴，二者均顯藍(lán)黑色。

3 薄層色譜

分別取毛冬青1、2藥材粉末各1.5 g，加甲醇15 mL，超聲60 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。供試品曾采用乙酸乙酯振搖提取，所得的薄層色譜雜質(zhì)較多，分離不清晰；后改用正丁醇振搖提取，所得的薄層色譜雜質(zhì)較少，斑點(diǎn)清晰。取以上二種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與毛冬青對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。因無顯著的鑒別意義，所以薄層色譜的熒光顯示圖片也就不附加圖片。

圖1 安徽***中藥飲片公司所產(chǎn)的毛冬青（標(biāo)注產(chǎn)地：湖北，批號(hào)：150901）

圖2 作者采自三明地區(qū)的毛冬青

圖3 毛冬青原植物

圖4 2號(hào)供試品作者采于三明地區(qū)的毛冬青

圖5 1號(hào)供試品安徽***中藥飲片公司，批號(hào)：150901，標(biāo)注產(chǎn)地為湖北

4 高效液相色譜檢測(cè)

4.1 儀器：CPA324S電子天平（塞多利斯公司）、KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、Agilent Technologies1260高效液相色譜儀,二極管陣列檢測(cè)器（1260DAD）（美國安捷倫科技公司）、SJ-1031A紫外分析儀（島津公司）。

4.2 供試藥材：①毛冬青飲片1號(hào)（安徽***中藥飲片公司，批號(hào)：150901標(biāo)注產(chǎn)地為湖北）；②毛冬青飲片2號(hào)（作者采于三明地區(qū)的毛冬青，經(jīng)原植物鑒定為毛冬青（Ilex pubescens Hook. et Arn.），取其根洗凈切片曬干）。甲醇、乙腈為色譜純，液相用水為超純水，其余試劑均為分析純。

4.3 色譜條件：色譜柱：Ultimate XB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：乙腈（A）—0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，30% A；10～13 min；30% A→40% A；13～25 min，40%A；25～30 min，40% A→60% A；30～35 min，60% A；35～40 min，30% A）；檢測(cè)波長：210 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

4.4 對(duì)照藥材溶液：精密稱取毛冬青2號(hào)藥材粉末0.5 g，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲60 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過，取續(xù)濾液。

4.5 供試藥材溶液：精密稱取毛冬青1號(hào)藥材粉末0.5 g，如上法制備供試液。

4.6 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化[5]

4.6.1 檢測(cè)波長的選擇：采用紫外-可見分光光度法，在190～400 nm范圍內(nèi)分別對(duì)對(duì)照藥材（2號(hào)藥材）溶液、供試品（1號(hào)藥材）溶液進(jìn)行掃描，1號(hào)藥材在209 nm，2號(hào)藥材在211 nm分別有最大吸收，所以選擇210 nm為檢測(cè)波長。

4.6.2 提取條件的選擇：本文考察了甲醇超聲提取與回流提取兩種方法，結(jié)果超聲與回流提取率接近，超聲簡(jiǎn)便，所以選用超聲提取；又比較甲醇與乙醇兩種溶劑的提取率，發(fā)現(xiàn)，甲醇提取樣品中各組分含量高于乙醇提取，因此選擇甲醇超聲提取。

4.6.3 流動(dòng)相的選擇：對(duì)不同流動(dòng)相的組成比例進(jìn)行考察，采用乙腈-1%冰醋酸（60∶40）為流動(dòng)相時(shí)，色譜分離效果不好，后采用乙腈-0.1%磷酸溶液組成的流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，能獲得理想的色譜圖，因此采用此流動(dòng)相。

4.7 測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照藥材溶液、供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖4、5。

5 討 論

綜合以上實(shí)驗(yàn)，化學(xué)反應(yīng)顯示相同的顏色，說明二者均含酚類物質(zhì)。薄層色譜中，兩種藥材所顯斑點(diǎn)的位置和顏色相同，也表明二者的相似程度很接近。液相色譜圖中1、2號(hào)藥材峰形接近，但二者在15～20 min的出峰情況完全不同，2號(hào)藥材有明顯的幾個(gè)峰，而1號(hào)藥材在該區(qū)間內(nèi)無明顯可見的出峰。表明1、2號(hào)藥材之間有些成分還是有差別的。另外，結(jié)合藥材性狀分析，1號(hào)藥材的大小明顯超出了廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)2011版中規(guī)定的毛冬青 “直徑1～8 cm”的標(biāo)準(zhǔn)，且在味道上有區(qū)別，所標(biāo)注的產(chǎn)地湖北在中國植物志上也查無毛冬青的分布記錄，可見1號(hào)藥材（安徽***中藥飲片公司，批號(hào)：150901標(biāo)注產(chǎn)地為湖北）為偽品。偽品的植物來源不祥，但從理化、薄層色譜、高效液相色譜圖的相似性來判斷應(yīng)當(dāng)來源于和毛冬青同科屬的某種植物。

目前毛冬青中藥材的標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)較低。湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2009年版）、上海市中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1994年版）、廣西壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第二卷）、北京市中藥材標(biāo)準(zhǔn)、中國藥典（1977年版第一部）都未對(duì)藥材的直徑作出規(guī)定。僅廣東中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2011年版）有對(duì)毛冬青藥材的直徑作出規(guī)定“直徑1～8 cm”，但也規(guī)定得過于寬泛。實(shí)際中基本難以采到5厘米以上直徑的毛冬青。希望有關(guān)部門在制定毛冬青藥材標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)當(dāng)對(duì)其直徑加以規(guī)定，建議標(biāo)準(zhǔn)中直徑定為1～4 cm較為切合實(shí)際。廣大中藥師在驗(yàn)收毛冬青藥材時(shí)對(duì)于直徑超過“5 cm”大小的藥材時(shí)應(yīng)保持警惕。也希望中藥飲片廠在產(chǎn)地收購毛冬青原藥材加強(qiáng)對(duì)植物基源的鑒別以防止偽品進(jìn)入流通領(lǐng)域。