間接ELISA法研究高效豬瘟細胞苗免疫效果

文│何東旭 周勇岐 周先建 （南京天邦生物科技有限公司）

豬瘟作為中國最主要的豬病之一，在中國導致的經濟損失難以統計，專家估計豬瘟導致中國豬的平均發病死亡率在2%～5%，據此推算的直接經濟損失每年就超過20億元人民幣。高效豬瘟疫苗免疫措施成為當前有效防控豬瘟的重要手段。長期以來在臨床廣泛使用的阻斷ELISA法具有特異性強，但靈敏度較低的問題，不能準確評估豬瘟疫苗免疫效果，反應免疫保護率。間接ELISA法與兔體中和試驗符合率能達90%以上，與過氧化物酶中和試驗技術（NPLA）相關性r=0.94，敏感性在98%以上，特異性在92%以上，能準確檢測豬瘟中和抗體水平，反應疫苗免疫效果。本文旨在通過間接ELISA法研究高效豬瘟細胞苗免疫效果，為豬場科學選用豬瘟疫苗提供參考。

◎圖1 中和抗體平均值

◎圖2 中和抗體陽性率

一、材料與方法

1.豬瘟疫苗：豬瘟耐熱保護劑活疫苗（細胞源）—穩必寧由南京天邦生物科技有限公司生產（批號179043）。

2.試驗動物：由安徽省某豬場提供，篩選3～5胎次母豬所產豬瘟抗原陰性健康仔豬為試驗對象。

3.檢測試劑盒：BioChek豬瘟E2（CSFV-E2）抗體檢測試劑盒（北京天之泰生物科技有限公司），產品代碼SK106。

4.試驗方法：25日齡采集全血RT-PCR法檢測，篩選豬瘟抗原陰性健康仔豬12

頭，每窩6頭，篩選的12頭仔豬隨機分成2組，A組為免疫組，B組為對照組。免疫組于27日齡，55日齡免疫穩必寧，每次耳后根肌內注射1頭份/頭，對照組不免疫任何廠家豬瘟疫苗。分別于首免后7天、14天、21天、28天，二免疫后7天、14天、28天、132日齡和150日齡采集血樣進行中和抗體測定，間接ELISA法。

二、結果與分析

1.中和抗體平均值（圖1）（表1）。

表1

表2

（1）首免后14天，對照組豬瘟中和抗體水平一直呈下降趨勢，且首免后7天至150日齡一直維持陰性狀態。

（2）首免后14天，免疫組豬瘟中和抗體水平一直呈下降趨勢，分析為母源抗體衰減所致；首免后14天至首免后21天中和抗體水平停止下降，首免后21天到首免后28天，中和抗體水平快速上升到較高水平，分析首免抗體于首免后14天開始產生；首免后28天至二免后7天，中和抗體水平略微下降，分析為二免后抗原中和所致；二免后7天至二免后28天，中和抗體水平持續上升至最高水平，二免后28天至132日齡，中和抗體水平維持在峰值水平，132日齡至150日齡，開始略微下降，但仍維持在較高水平，分析二免后中和抗體于二免后7天開始產生，于二免后28天達到峰值，并能持續維持較高水平到150日齡以上。整體免疫效果具有中和抗體水平產生速度快，空白期短的特點，并且持續保護時間長，能滿足實際生產中豬瘟防控的免疫需求。

2.中和抗體陽性率。

（1）對照組抗體陽性率持續下降至首免后14天全部為陰性，符合母源抗體衰減基本規律。

（2）首免后21天以內，中和抗體陽性率總體呈下降趨勢，首免后21天至二免后28天，中和抗體陽性率總體呈上升趨勢，且于二免后28天達到100%，二免后28天至132日齡略微下降至80%，且維持至150日齡，符合抗體消長基本規律，滿足實際生產防控豬瘟的免疫要求。

三、討論

適應性免疫包括體液免疫和細胞免疫兩方面，機體對無包膜病毒的抵抗力主要來自抗體，對有包膜的病毒的抵抗力主要來自細胞免疫。細胞免疫與體液免疫常常處于平衡狀態，很像蹺蹺板，相互調節，一方面高另一方面必然低。豬瘟屬于有包膜的RNA病毒，細胞免疫力的強弱對豬瘟防控效果有著重要影響。因此，在評價豬瘟疫苗免疫效果時不能盲目要求高水平的中和抗體，而忽視細胞免疫力。

豬場在選擇豬瘟疫苗時應綜合考慮抗原免疫原性、效價和穩定性等關鍵指標，選擇抗原免疫原性最好，效價足夠高，批間穩定的產品為首選，不能盲目追求抗原含量而忽視抗原免疫原性，這樣才能充分發揮疫苗體液免疫和細胞免疫的雙重保護力，達到最佳免疫效果。此外，選擇疫苗時還要關注疫苗的純凈性，減少浪費免疫動物的免疫能力。最后還要結合豬場實際生產成績和科學檢測手段，選擇中和抗體產生速度更快，中和抗體水平足夠高，持續保護時間足夠長，豬場應用生產成績穩定的產品為首選。