三磷酸腺苷熒光微生物檢驗技術在醫務人員手表面微生物檢驗中的應用效果

馮昕暉, 谷建俐, 丁 婕

(1. 陜西省西安市雁塔區疾病預防控制中心 檢驗科, 陜西 西安, 710000;2. 陜西省西安市第三醫院 藥劑科, 陜西 西安, 710054;3. 陜西省西安市中心醫院 藥劑科, 陜西 西安, 710000)

醫務人員直接與患者接觸，其手表面微生物污染現象的發生極易對給患者病情及治療效果造成不利影響，甚至引發嚴重的院內感染、多重耐藥菌傳播等嚴重后果[1-2]。以往醫院多采用細菌培養法進行檢測，其可對醫務人員手部衛生情況進行準確評估，但同時也具有耗時長、操作復雜等不足[3]。隨著研究的深入，臨床上逐漸將三磷酸腺苷(ATP)生物熒光法應用于醫務人員手表面微生物的檢驗中，并取得了一定的效果。本研究探討ATP熒光微生物檢驗技術在醫務人員手表面微生物檢驗中的應用效果，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年7月本院醫務人員56名，其中男21名，女35名; 其中護士28名，醫生15名，醫技人員13名; 年齡21～51歲，平均(35.9±3.6)歲。

1.2 方法

所選取的56名醫務人員均行ATP熒光微生物檢驗技術及微生物培養法檢測。試劑與材料主要為瑞典BioThema公司提供的BiotechTMBT-112D 型生物熒光快速檢測、BioThema 266-112型ATP生物應該檢測試劑盒; 北京路橋技術有限責任公司提供的ATP提取劑、熒光素酶、裂解液、ATP標準品等。

以金黃色葡萄均菌進行菌懸液制備，取單個金黃色葡萄球菌菌落，在普通陰陽瓊脂培養基斜面進行接種，并在37 ℃恒溫培養箱內進行培養，培養時間為24 h, 再以生理鹽水洗滌新鮮斜面培養物制成細菌懸液，以行微生物培養法檢測。

ATP生物熒光法檢測: 利用UltansnapTMATP采樣器在醫務人員手指屈側進行往返涂擦方式采樣，然后將采樣棉拭子插回取樣器，折斷取樣器上方的塑料閥門，并震蕩反應液，待其充分反應后置入ATP生物熒光檢測儀內，等待15 s, 然后對反應結果進行記錄，數據記錄為相對光單位值(RLU)。

微生物培養法檢測: 以《醫院消毒衛生標準》規定的方式進行操作，以采樣棉拭沾取采樣液，并從指根向指尖往返涂抹，然后于無菌條件下將棉拭子剪斷，并置入10 mL采樣液中，進行充分震蕩后，將適量洗脫液置入無菌平皿中進行培育，于37 ℃的恒溫環境中培養48 h, 然后對反應計數進行記錄。

結果換算: 取不同濃度的金黃色葡萄球菌懸液各50 μL, 并將其分別置于無菌離心管內; 然后分別加入50 μL裂解液，混勻，然后在室溫下靜置10 min; 之后分別加入400 μL熒光素，迅速混勻，然后利用BiotechTM生物熒光快速檢測儀進行第1次RLU值測定(M1); 然后再加入10 μL ATP標準品進行第2次RLU值測定(M2)。以5 M1/(M2-M1)×105為ATP含量。

1.3 觀察指標

比較兩種檢測方法的檢測結果，以醫務人員手部細菌總數不超過10 cfu/cm2為合格; ATP生物熒光檢測法規定以檢測結果并超過1 RLU/cm2為合格[4]。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 金黃色葡萄菌群含量與ATP含量的對應關系分析

金黃色葡萄球菌懸液含量在5.8×102～6.2×106時, ATP含量可隨著菌數增加而升高，見表1。

表1 金黃色葡萄菌群含量與ATP含量的對應關系分析

2.2 兩種檢測方式對醫務人員手衛生情況評估結果對比

經兩種檢測方式檢查，醫務人員手衛生合格率對比無顯著差異(P>0.05), 見表2。

表2 兩種檢測方式對醫務人員手衛生情況評估結果對比

2.3 ATP熒光生物檢測法對醫務人員洗手前后衛生情況測定結果分析

經ATP 熒光微生物檢驗法，醫務人員洗手后ATP含量明顯低于洗手前，且手表面微生物合格率明顯高于洗手前，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 ATP熒光生物檢測法對醫務人員洗手前后衛生情況測定結果分析

與洗手前比較, *P<0.05。

3 討 論

醫務人員手部微生物污染極易引發嚴重的安全風險，導致交叉感染、院內感染等嚴重后果。因此，加強對醫務人員手部微生物污染情況評估的重視就尤為重要[5]。微生物培養法是臨床上檢測醫務人員手部微生物情況的常用方式，但其因自身所具備的多種不足之處而限制了其應用。隨著研究的深入，臨床上逐漸將ATP生物熒光法檢測應用于物體表面、醫療器械表面及醫務人員手部微生物情況的檢測中。

ATP熒光微生物檢測技術主要是以所有生物機體體內均可見程度不一的ATP，而經熒光素酶的催化作用，則可促使其與ATP發生反應，從而形成具有熒光的熒光素氧化產物; 同時其熒光強度會對著體內ATP含量的升高而加強，故而可作為反映人體微生物含量的有效指標[6]。有研究[7]顯示，與傳統的微生物培養法對比, ATP熒光微生物檢測在醫療器械清洗效果方面可取得相同的檢測結果，提示ATP熒光微生物檢測具有實際應用價值。本研究結果顯示，金黃色葡萄球菌懸液含量在一定范圍內時, ATP含量可隨著菌數增加而升高。經兩種檢測方式檢查，醫務人員手術衛生情況無顯著差異(P>0.05), 提示ATP熒光微生物檢測技術在醫務人員手表面微生物評估中具有較高的可靠性。該檢測技術還具有快速取樣、測定與反應速度快、靈敏度高等特點，可顯著縮短檢測時間; 同時，其還可減少24 h培養而造成的滯后性，可更好地指導臨床工作[8-9]。本研究結果顯示, ATP熒光微生物檢驗法顯示醫務人員洗手后ATP含量明顯低于洗手前，且手表面微生物合格率明顯高于洗手前，差異均有統計學意義(P<0.05), 提示醫務人員可通過嚴格洗手的方式來減少手表面微生物含量。