硒對鄰苯二甲酸酯亞慢性暴露雄性大鼠肝臟的保護作用

寧俊康曹 乾 * 楊 梅任雪丹王民生

（1. 東 南大學公共衛生學院，江蘇 南京210009；2. 蘇州市吳江區疾病預防控制中心，江蘇 蘇州 215200；3. 江 蘇省疾病預防控制中心，江蘇 南京 210009）

鄰苯二甲酸酯(diethylhexyl phthalate，DEHP)作為塑料行業廣泛應用的一種增塑劑，由于其具有難降解性、使用量大等特點，故其廣泛存在于環境中[1]，人群可通過攝入、吸入、皮膚暴露接觸到DEHP[2]。過往的研究已證實DEHP對實驗動物肝臟的影響[3-5]。國內外學者試圖尋找能有效拮抗DEHP肝臟毒性的方法，但是效果一直不夠理想。如何有效預防和解決DEHP亞慢性暴露對肝臟的損傷依然是一個棘手的問題。

硒是一種重要的人體必需微量元素，研究發現其對于保護生殖系統[6]、 抗氧化[7]和 免疫調節[8]等方面有較好的作用。為了探究硒在DEHP慢性暴露中對肝臟組織是否發揮了保護作用，本研究使用DEHP對雄性大鼠進行亞慢性染毒，并給予微量元素硒干預；評估硒在DEHP亞慢性暴露下對大鼠肝臟的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

ADVIA2120i型全自動五分類血細胞分析儀，購自德國Siemens公司；鄰苯二甲酸酯，純度≥99.5%，購自Sigma公司；1.5 mL EP管，購自美國Corning公司；酵母硒，有機硒含量≥99%，購自江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物與飼養 實驗動物購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號SCXK(京)2012-0001，質量合格證號11400700158173。SPF級成年雄性SD大鼠77只，體質量為90～110 g，飼養于屏障動物實驗室，實驗動物環境使用許可證號SYXK(蘇)2017-0031。動物實驗室溫度控制在20~26 ℃，濕度為40%~70%，單籠飼養。

1.2.2 動物分組和處理 適應性飼養3 d后，將受試大鼠按體質量隨機分為7組，每組11只。即對照組(飼喂基礎飼料)，3個DEHP染毒組(染毒劑量分別為300、600和900 mg/kg)，3個硒干預組(在相應劑量的染毒飼料中加入1 mg/kg酵母硒)。準備顆粒飼料，各劑量組按相應比例將DEHP均勻拌入飼料中，將飼料以平均每日動物體質量10%的攝食量按組別給予大鼠，連續飼喂染毒8周。染毒期間，大鼠可自由飲水、攝食。

1.2.3 肝功能相關生化指標的測定方法 觀察記錄大鼠在染毒期間的體質量、攝食，并計算總食物利用率(總食物利用率=總增重/總攝食量×100%)。染毒期末，大鼠空腹16 h后，稱量并記錄最后一次空腹體質量。用3.5 mL的生化血清管取大鼠全血3.5 mL，應用AU640全自動生化分析儀檢測谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase， ALT)、 谷 草 轉 氨 酶 (aspartate aminotransferase，AST)、總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(globulin，GLB)等5個生化指標。采血后處死大鼠，迅速分離大鼠肝臟，稱質量并計算臟器系數(臟器系數=臟器質量/體質量×100%)。

1.3 統計學方法

實驗數據用Microsoft Excel軟件建立數據庫，采用SPSS 18.0軟件對實驗結果進行統計學分析，實驗結果用 表示，組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊時用Dunnett’s T3法比較，檢驗水準為α=0.05。

2 結 果

2.1 DEHP染毒對大鼠體質量的影響及硒的保護作用

不同劑量DEHP染毒下大鼠體質量和肝臟質量的檢測結果見表1。600和900 mg/kg DEHP染毒組大鼠的染毒后平均體質量明顯降低(P<0.05)；900 mg/kg DEHP染毒組大鼠的體質量增量、總攝食量、總食物利用率均明顯降低(P<0.01或P<0.05)；各染毒組、硒干預組的肝臟平均質量、肝臟系數均明顯降低(P<0.01)。600 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠體質量增量較相應的染毒組增加(P<0.05)。

2.2 DEHP染毒對大鼠肝功能相關指標的影響及硒的保護作用

不同劑量DEHP染毒下大鼠肝功能相關生化指標檢測結果見表2。與對照組相比，600和900 mg/kg DEHP染毒組，300和600 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠ALT濃度明顯升高(P<0.05)；900 mg/kg DEHP染毒組，300、600和900 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠AST濃度明顯升高(P<0.01)；600、900 mg/kg DEHP染毒組大鼠TP濃度明顯升高(P<0.01)；900 mg/kg DEHP染毒組，300 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠ALB濃度明顯升高(P<0.01)；900 mg/kg DEHP染毒組大鼠GLB濃度明顯升高(P<0.01)。900 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠ALT、AST、TP、GLB均明顯低于相應的染毒組(P<0.01或P<0.05)。

表1 不同劑量DEHP染毒下的大鼠體質量和肝臟質量

表1 不同劑量DEHP染毒下的大鼠體質量和肝臟質量

與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與相同劑量DEHP染毒組比較，#P<0.05，# #P<0.01.

表2 各組大鼠肝功能相關生化指標

表2 各組大鼠肝功能相關生化指標

與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與相同劑量的DEHP染毒組比較，#P<0.05， ##P<0.01.

GLB濃度/(g/L)30.72±2.9230.91±1.7233.61±2.56**36.54±2.4129.90±3.4331.61±3.45 900 93.46±33.80#**192.00±19.18#65.63±4.84##34.98±2.21 30.65±8.59##

3 討 論

DEHP亞慢性染毒后，隨著染毒劑量的增加，DEHP對于大鼠的體質量、體質量增量、總攝食量以及食物利用率有著較大的影響。與對照組相比，600 mg/kg DEHP染毒組大鼠的體質量，900 mg/kg染毒組的體質量增量、總攝食量、食物利用率均低于對照組；600 mg/kg DEHP染毒后的硒干預組大鼠體質量增量較相應的染毒組增加。說明一定劑量下，DEHP會對大鼠的體質量及生長產生影響，而硒的干預產生了保護作用。

臟器系數是實驗動物某臟器的質量與其體質量之比值，臟器系數的變化常可較好地反映化學毒物對該臟器的綜合毒性，可旁證病理組織學改變的可能性[9]。通過對大鼠的肝臟平均質量及臟器系數進行統計學分析，發現DEHP染毒前后差異有統計學意義(P<0.01)。這與陳文婕等[10]研究DEHP對大鼠肝臟的慢性損傷的研究結果相似。說明DEHP在一定劑量下，可能導致大鼠的肝臟發生充血、水腫、增生肥大性等變化，而硒的干預可能產生了一定的保護作用。

肝功能具體的生化指標能最直接的反映肝功能狀態。谷丙轉氨酶(ALT)與谷草轉氨酶(AST)主要反映肝細胞有無受損及嚴重程度[11]。ALT和AST是反映肝細胞膜穩定性最敏感的指標，大多數情況下，ALT、AST值越高，說明肝細胞病變嚴重[12]，其病理性升高的程度與肝細胞受損的程度相一致，可預測肝細胞損傷的情況[13-14]。總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLB)是反映肝臟功能的重要指標。TP是血清中所有蛋白質的總和，其中包括了ALB和GLB。ALB由肝實質細胞合成，對于組織蛋白合成、營養物質轉運、維持血漿膠體滲透壓穩定起重要作用，可反映有效肝細胞數量。GLB由淋巴細胞產生，與機體免疫功能有關。肝受損時，ALB合成減少，但由于免疫刺激作用，球蛋白產生增加[15]。國內外研究發現，核激素受體PPAR在糖脂代謝、腫瘤及炎癥信號通路等方面起著重要調節作用[16-17]，DEHP作為PPAR激活受體的配體，影響肝臟代謝系統的體內平衡[18]。硒既能以活性因子的身份增強谷胱甘肽過氧化物酶的活性，又能提升維生素E的功效，從而保護肝細胞膜免受自由基的損傷[19]。以上兩組指標說明DEHP在一定劑量下，可對大鼠的肝臟功能產生一定影響，而硒的干預則產生了積極的保護作用。

綜上所述，一定劑量的DEHP會對大鼠的肝臟產生毒性，而硒元素的干預會減輕DEHP對于肝臟系統的影響，其作用機制還有待進一步探討。