促紅細胞生成素基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變發病相關性的Meta分析

趙冬冬 馬寶新 李躍榮

(濱州醫學院附屬醫院，山東 濱州 256603)

微血管病變是糖尿病患者的特異性并發癥，決定著糖尿病患者的預后。促紅細胞生成素(EPO)既可以促進紅細胞生成，也能刺激血管內皮細胞的增殖、遷移及血管生成〔1〕。高EPO水平與糖尿病微血管病變的發病相關〔2〕。近些年，糖尿病微血管病變與基因變異的相關性已然成為研究的熱點。目前也有不少研究探討EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變發病是否相關〔1～9〕，但結論存在爭議。故本Meta分析對EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變發病相關性進行系統評價。

1 資料與方法

1.1檢索策略 計算機檢索PubMed、EMbase、CNKI、VIP 和 Wan Fang Data 數據庫，搜集研究EPO基因rs1617640多態性與糖尿病視網膜病變相關性的病例-對照研究，檢索時間從建庫至2017年12月。此外，追溯納入研究的參考文獻，以補充獲取相關文獻。英文檢索詞包括：EPO、erythropoietin、rs1617640、DM、diabetes mellitus、diabetic、gene、genetic、SNP、single nucleotide polymorphisms；中文檢索詞包括：促紅細胞生成素、糖尿病、單核苷酸多態性、基因。

1.2文獻的納入和排除標準

1.2.1納入標準 ①國內、外公開發表的有關EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變相關的文獻；②研究對象為糖尿病微血管病變人群，研究設計為病例-對照研究；③排除同一人群的重復研究，選取數據清晰完整者。

1.2.2排除標準 ①非中、英文文獻；②未說明受試者來源及無對照的文獻；③資料收集方式不合理或不完整無法計算出比值比(OR)值和95%可信區間(CI)的文獻；④綜述、會議或摘要等。

1.2.3觀察指標 病例組和對照組EPO基因rs1617640多態性各基因型及等位基因所構成的4種基因模型的OR值。

1.3納入研究的質量評價 對每項納入研究的偏倚風險采用紐卡斯爾-渥太華量表(NOS)進行評價，>6顆星即認為是高質量的納入研究〔10〕。2名研究者獨立進行文獻篩選、提取資料并交叉核對，對分歧處進行討論、核查，直至達成共識。文獻篩選時首先閱讀標題及摘要排除不相關的文獻，進一步對余下文獻通篇閱讀全文，以確定是否納入此篇文獻。資料提取的主要內容包括：第一作者、國家/地區、病例組和對照組樣本量、研究人群性別分布、各基因型分布及其頻數、等位基因分布及其頻數、對照組Hardy-Weinberg平衡定律(HWE)P值及文獻NOS評分等。

1.4統計分析 采用Review Manager5.3軟件進行統計分析。采用OR值及其95%CI來描述效應量，檢驗水準設為α=0.05。檢驗研究異質性程度采用Q檢驗和I2統計量，若P<0.1或I2≥50%，則說明各研究結果不同質，采用隨機效應模型合并分析；同質，則采用固定效應模型合并分析。繪制漏斗圖直觀檢驗發表偏倚。采用4種基因模型統計所有數據：等位基因模型(T vs G)，顯性模型(TT+TG vs GG)，隱性模型(TT vs TG+GG)，加性模型：純合子TT基因型vs GG基因型(TT vs GG)和雜合子TG基因型 vs GG基因型(TG vs GG)。

2 結 果

2.1文獻檢索結果 根據檢索策略共檢索到文獻796篇，按照納入與排除標準進行篩選最終納入9篇文獻(12組病例-對照研究)〔1～9〕，共計7 060例研究對象，其中病例組3 704例，對照組3 356例。

2.2納入研究的基本特征和偏倚風險評價結果 病例組與對照組EPO rs1617640基因型、等位基因分布情況見表1。本研究最終納入的9篇文獻中，除 Tong等〔2〕發表的文獻中包括3個獨立種族(Utah、GoKinD、Boston)外，其余均僅包括1個種族；Abhary等〔1〕發表的文獻中對1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)人群分別探討EPO基因rs1617640與糖尿病微血管病變相關性。納入9篇文獻，其中5篇〔3，4，6～8〕亞種人群資料，1篇〔1〕澳大利亞人群資料。對各納入研究對照組基因型分布進行遺傳平衡χ2檢驗，去除對照組H-W檢驗P<0.05的3組病例-對照研究〔1,3,6〕及1組未給出P值研究〔9〕。

表1 納入研究的基本特征(n)

T/C：糖尿病微血管病變組/對照組；-：無法計算

2.3Meta分析結果

2.3.1EPO基因rs1617640與糖尿病微血管病變的關系 異質性檢驗提示納入的8組〔1，2，4，5，7，8〕病例-對照研究結果間在TG vs GG(P=0.25,I2=23%)不存在異質性，采用固定效應模型進行統計分析，余均存在異質性，采用隨機效應模型進行統計分析。Meta 分析結果顯示：EPO基因rs1617640與糖尿病微血管病變發病具有相關性〔TT vs GG(OR1.54，95%CI：1.09～2.19)〕，見表2。

2.3.2亞組分析 對8組〔1，2，4，5，7，8〕病例-對照研究分別就納入研究的糖尿病類型、糖尿病微血管病變類型進行亞組分析。

3組病例-對照研究〔1,2〕人群為T1DM，對其進行Meta分析：異質性檢驗提示納入研究結果間均不存在異質性，采用固定效應模型進行統計分析。Meta 分析結果顯示在4種基因模型中，EPO基因rs1617640多態性與T1DM微血管病變發病均具有相關性，見表2。

5組病例-對照研究〔2,4,5,7,8〕人群為T2DM，對其進行Meta分析：異質性檢驗提示納入研究結果間在TG vs GG(P=0.19，I2=34%)不存在異質性，采用固定效應模型進行統計分析；余均存在異質性，采用隨機效應模型進行統計分析。Meta 分析結果顯示在4種基因模型，EPO基因rs1617640多態性與T2DM微血管病變發病均不具有相關性，見表2。

3組病例-對照研究〔2〕人群為DN合并視網膜病變，對其進行Meta分析：異質性檢驗提示納入研究結果間均不存在異質性，采用固定效應模型進行統計分析。Meta 分析結果顯示在4種基因模型中，EPO基因rs1617640多態性與DN合并視網膜病變發病均相關，見表2。

5組病例-對照研究〔1,4,5,7,8〕人群為單純DR，對其進行Meta分析：異質性檢驗提示納入研究結果間在等位基因模型(T vs G：P=0.05，I2=58%)存在異質性，采用隨機效應模型進行統計分析；余均不存在異質性，采用固定效應模型進行統計分析。Meta 分析結果顯示在4種基因模型中，EPO基因rs1617640多態性與單純DR發病均不具有相關性，見表2。

表2 EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變的相關性

1)剔除對照組基因型分布不符合H-W分布的研究

2.4發表偏倚 以每項納入研究的效應值OR為橫坐標，以SE(log〔OR〕)為縱坐標繪制漏斗圖(圖1)，如圖所示納入Meta分析的各個獨立研究效應OR的點(剔除對照組不符合H-W分布的研究后)在漏斗圖左右大致對稱，說明無明顯的發表偏倚存在，結果具有較高可信度。

圖1 等位基因模型發表偏倚評估的漏斗圖

3 討 論

EPO位于染色體7q21位點，EPO基因的轉錄起始部位的上游1 125 bp為SNP rs1617640，考慮其為EPO基因的啟動子。EPO的SNP rs1617640啟動子區域的等位基因G和T的不同導致啟動子活性的不同，引起下游編碼不同水平的蛋白，進而產生不同的功能改變。糖尿病微血管病變是糖尿病具有特征性的病理改變及慢性并發癥的嚴重危險因素，隨著糖尿病微血管并發癥的發生率的上升導致糖尿病患者發病率和死亡率顯著增加。其可累計全身各器官組織，其中以DR、DN、糖尿病心肌病及糖尿病周圍神經病變為主〔11〕。近年來，關于EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病發病的相關性引起了諸多關注，但研究結果存在一定的差異。

本文結果顯示，EPO基因rs1617640與糖尿病微血管病變發病相關，亞組分析后發現，EPO基因rs1617640多態性與DN合并視網膜病變發病具有相關性，與單純DR發病無相關性；EPO基因rs1617640與T1DM微血管病變發病相關，與T2DM微血管病變發病無關。

雖然控制糖尿病患者的血糖水平有助于減少糖尿病微血管病變的發生；但在臨床上，有些血糖控制不佳或有較長糖尿病病史的患者不會發展為糖尿病微血管病變，相反，一些血糖控制良好的患者進展為糖尿病微血管病變〔12〕。有研究發現，糖尿病微血管病變的發生具有明顯不能被其他危險因素所解釋的家族聚集性，這表明糖尿病微血管病變的發病機制中具有重要的遺傳成分存在〔13,14〕。EPO是一種獨立于血管內皮生成因子(VEGF)之外的一種強效的血管生成因子，參與糖尿病微血管并發癥的進展〔2〕。EPO通過誘導抗凋亡蛋白和抑制細胞凋亡，促進紅細胞前體的增殖和分化；除此之外它還有在缺氧狀態下誘導新生血管生成的作用。EPO基因rs1617640多態性可通過影響EPO的表達，進而與糖尿病微血管病變發病存在關聯〔1,15〕。

本研究存在局限性。第一，本Meta分析僅研究了EPO基因rs1617640多態性這一單因素，未考慮到環境因素影響及與其他基因多態性的相互作用。第二，納入研究中僅Tong2、Tong3及Abhary1這三組病例-對照研究納入的糖尿病類型為T1DM，且僅Tong中3組病例-對照研究包含DR合并DN，研究數量較少、樣本量較少。第三，無可納入的DN及糖尿病心肌病等糖尿病微血管病變的相關研究。

綜上所述，本Meta分析結果顯示EPO基因rs1617640多態性與DN合并視網膜病變發病具有相關性；且與1型糖尿病微血管病變發病相關。本研究納入研究數量較少，期待更多高質量的相關研究以進一步證實EPO基因rs1617640多態性與糖尿病微血管病變發病的相關性。