丹參對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷后心律失常的影響

馮 敏 王麗蕊 徐大千

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450052)

隨著人口的不斷老齡化，心血管疾病的發(fā)生率不斷增加。心血管疾病死亡率升高的主要因素為缺血性心臟病〔1〕。缺血性心臟病在血液供應(yīng)恢復(fù)后病情有以改善，再灌注在多數(shù)情況下可以使損傷結(jié)構(gòu)恢復(fù)，但有時(shí)候再灌注會(huì)使心肌組織受損、功能障礙，使病情加重，發(fā)生不可逆的損傷。因此，防治心肌缺血再灌注損傷具有重要意義〔2〕。丹參具有改善血液流變性、改善微循環(huán)、保護(hù)心肌的作用，在心血管疾病的治療中具有重要意義〔3〕。本文探討丹參對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷后心律失常的影響。

1 材料與方法

1.1材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康、清潔級(jí)、雄性、體重210～250 g、成年Wistar大鼠45只，購(gòu)自北京隆安實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心，許可證號(hào)：SYXK(京)2014-0040。

主要試劑：注射用丹參(哈藥集團(tuán)中藥二廠，生成批號(hào)：1502701)，丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程所)，白細(xì)胞介素(IL)-6試劑盒、IL-10試劑盒、腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒(艾萊薩生物科技有限公司)等。

1.2研究方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組 將60只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和丹參組，每組20只。

1.2.2心肌模型建立 采用25%烏來糖腹腔注射麻醉成功后，將心電圖針形電極插入大鼠四肢皮下，記錄大鼠標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。切開大鼠氣管，進(jìn)行呼吸機(jī)人工呼吸，開胸暴露大鼠心臟，在大鼠左心耳下緣1 mm左右處穿過心肌淺層做一結(jié)扎線，假手術(shù)組大鼠僅穿結(jié)扎線不進(jìn)行結(jié)扎；模型組和丹參組大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，結(jié)扎線以下心肌顏色變暗，心電圖S-T段升高為心肌缺血標(biāo)志，心肌缺血30 min后松開結(jié)扎線，心肌相應(yīng)部位顏色恢復(fù)，心電圖S-T段下降，則為心肌再灌注開始，再灌注開始后再灌注60 min。實(shí)驗(yàn)過程中假手術(shù)組大鼠死亡2只，模型組大鼠死亡4只，丹參組大鼠死亡5只，存活大鼠缺血再灌注成功。

1.2.3給藥方法 建模成功后，丹參組大鼠每天給予注射用丹參(50 mg/kg)腹腔注射，假手術(shù)組和模型組大鼠給予等量生理鹽水腹腔注射，共14 d。14 d后摘除眼球采血用于血清學(xué)檢查，并同時(shí)摘取心臟備用。

1.2.4心律失常檢測(cè) 各組大鼠再灌注開始后，根據(jù)標(biāo)志肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖監(jiān)測(cè)記錄各組大鼠室性心動(dòng)過速、室性纖維顫動(dòng)和房室傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生情況，并記錄心律失常的發(fā)生時(shí)間和持續(xù)時(shí)間。

1.2.5心肌梗死范圍和心肌缺血范圍測(cè)定 取冰凍心臟標(biāo)本沿左心室長(zhǎng)軸切成0.1 cm厚片，置于TTC溶液中孵育20 min，用甲醛溶液固定，缺血壞死心肌組織為蒼白色，缺血未壞死心肌組織為粉色，非缺血心肌組織為藍(lán)色，用解剖刀剔開不同顏色心肌組織并稱重，計(jì)算心肌梗死范圍和心肌缺血范圍，心肌梗死范圍=蒼白色心肌重量/(紅色心肌重量+蒼白色心肌重量)×100%，心肌缺血范圍=(紅色心肌組織重量+蒼白色心肌組織重量)/左心室重量×100%。

1.2.6心肌組織MDA、SOD、LDH含量測(cè)定 取部分結(jié)扎線以下左心室心肌組織，生理鹽水洗凈后吸干水分，取0.1 g心肌組織加入生理鹽水制成10%組織勻漿，置離心管中以3 000 r/min離心15 min，取上清液，采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，采用雙縮脲法測(cè)定LDH含量。

1.2.7血清IL-6、IL-10、TNF-α水平測(cè)定 將大鼠眼球血以3 000 r/min離心15 min，取上清液采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清IL-6、IL-10、TNF-α水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件，計(jì)量資料兩組之間比較采用t檢驗(yàn)，多組之間比較采用方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1模型組和丹參組心律失常比較 丹參組大鼠室性心動(dòng)過速、心室纖顫、房室傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生率均顯著低于模型組(P<0.05)，丹參組心律失常出現(xiàn)時(shí)間顯著長(zhǎng)于模型組(P<0.05)，心律失常持續(xù)時(shí)間顯著短于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 各組心律失常比較

2.2模型組和丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍比較 丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍均顯著小于模型組(P<0.05)。見表2。

表2 模型組和丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍比較

2.3三組心肌組織MDA、SOD、LDH含量比較 模型組和丹參組心肌組織中MDA和LDH含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)，丹參組MDA和LDH含量顯著低于模型組(P<0.05)，模型組和丹參組心肌組織中SOD含量顯著低于假手術(shù)組(P<0.05)，丹參組顯著高于模型組(P<0.05)。見表3。

2.4三組血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較 模型組和丹參組IL-6、IL-10、TNF-α水平均顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)，丹參組IL-6、TNF-α水平均顯著低于模型組(P<0.05)，丹參組IL-10水平顯著高于模型組(P<0.05)。見表4。

表3 三組心肌組織MDA、SOD、LDH含量比較

與假手術(shù)組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05；下表同

表4 三組血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較

3 討 論

心肌缺血實(shí)質(zhì)各種原因引起的冠狀動(dòng)脈血流減少、心肌供氧不足、代謝產(chǎn)物停留過多的一種狀態(tài)，再灌注是指心肌組織缺血后恢復(fù)血液供應(yīng)的過程，缺血性疾病在改善血液供應(yīng)后多數(shù)可以使病情好轉(zhuǎn)，損傷結(jié)構(gòu)恢復(fù)，但有時(shí)會(huì)加重病情，是受損傷組織發(fā)生不可逆損傷，即發(fā)生缺血再灌注損傷，隨著溶栓術(shù)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)、冠脈搭橋術(shù)、體外循環(huán)心內(nèi)直視術(shù)等治療的廣泛應(yīng)用，心肌缺血再灌注損傷較為常見，心肌缺血再灌注損傷的表現(xiàn)主要為再灌注性心律失常、心肌頓抑、再灌注血管損傷等，嚴(yán)重影響患者的心功能〔4〕。心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制不完全清楚，可能與氧自由基的作用和鈣超載有關(guān)，能量代謝障礙、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞黏附分子、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等和心肌缺血再灌注損傷關(guān)系也比較密切〔5〕。

臨床上用于防治心肌缺血再灌注損傷的藥物有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑等，但這些藥物具有靶點(diǎn)比較單一、不良反應(yīng)多的缺點(diǎn)。中藥的化學(xué)成分比較多，靶點(diǎn)多，可以安全、多途徑的治療心肌缺血再灌注損傷，且毒副作用少，具有廉價(jià)、安全、有效等優(yōu)點(diǎn)。丹參具有通經(jīng)止痛、活血祛瘀、涼血消癰、清心除煩等作用，在抗菌消炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝、促進(jìn)骨骼愈合方面具有重要作用，在呼吸系統(tǒng)、中樞系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等疾病的治療方面具有顯著療效，在心血管系統(tǒng)疾病的治療方面療效更為顯著〔6,7〕。在心血管系統(tǒng)疾病方面，丹參具有保護(hù)紅細(xì)胞膜、改善微循環(huán)、防治心肌梗死和心肌缺血、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低心肌耗氧量、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、保護(hù)心肌等作用，在治療心血管疾病方面取得顯著效果〔8〕。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)：丹參可降低心肌缺血再灌注損傷大鼠室性心動(dòng)過速、心室纖顫、房室傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生率，延長(zhǎng)心律失常出現(xiàn)時(shí)間，縮短心律失常持續(xù)時(shí)間，減少心肌梗死范圍和心肌缺血范圍。可見丹參對(duì)心肌缺血再灌注損傷后心律失常具有保護(hù)作用，可降低心律失常的發(fā)生率，減少心肌缺血和心肌梗死面積，對(duì)心肌缺血再灌注損傷后心律失常具有防治作用。

在心肌缺血再灌注損傷的過程中，由于細(xì)胞內(nèi)鈣超載和大量氧自由基的產(chǎn)生，使SOD活性及清除氧自由基的酶降低，造成氧自由基堆積，MDA含量增加，加重心肌的損傷〔9,10〕；心肌缺血再灌注損傷過程中，氧自由基的大量產(chǎn)生及清除障礙，可引起膜脂質(zhì)過氧化，從而改變心肌細(xì)胞膜的通透性和流動(dòng)性，使心肌細(xì)胞內(nèi)LDH等心肌酶大量漏出〔11,12〕。本文結(jié)果表明丹參具有降低心肌細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷，保護(hù)SOD活力，減少心肌細(xì)胞內(nèi)LDH外漏，改善心肌缺血再灌注損傷預(yù)后的作用。

在心肌缺血再灌注損傷過程中，炎癥反應(yīng)發(fā)揮重要作用，在灌注發(fā)生時(shí)，趨化因子激活中性粒細(xì)胞，使其釋放IL-6、TNF-α等炎癥細(xì)胞因子，IL-6主要由中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，TNF-α主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，肥大細(xì)胞和心肌細(xì)胞等也可產(chǎn)生TNF-α，IL-6和TNF-α的產(chǎn)生促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的黏附，阻塞微血管，釋放氧自由基，從而損傷心肌細(xì)胞，引起心肌細(xì)胞死亡，炎癥因子還破壞微血管的完整性，增加其同構(gòu)性，使血液黏稠，加重心肌的缺血缺氧，加重微循環(huán)障礙〔13～15〕。IL-10為抗炎因子，可以對(duì)抗免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，抑制炎癥因子釋放，心肌缺血再灌注損傷時(shí)，IL-10具有保護(hù)機(jī)體組織的作用，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，IL-10不斷增加〔16〕，本文結(jié)果表明心肌缺血再灌注損傷時(shí)，血清炎性因子和抗炎因子水平增加，丹參對(duì)炎性因子具有抑制作用，抑制炎癥反應(yīng)，并誘導(dǎo)抗炎因子的產(chǎn)生，拮抗炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮對(duì)心肌的保護(hù)作用。