丹參對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心律失常的影響

馮 敏 王麗蕊 徐大千

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450052)

隨著人口的不斷老齡化，心血管疾病的發(fā)生率不斷增加。心血管疾病死亡率升高的主要因素為缺血性心臟病〔1〕。缺血性心臟病在血液供應恢復后病情有以改善，再灌注在多數情況下可以使損傷結構恢復，但有時候再灌注會使心肌組織受損、功能障礙，使病情加重，發(fā)生不可逆的損傷。因此，防治心肌缺血再灌注損傷具有重要意義〔2〕。丹參具有改善血液流變性、改善微循環(huán)、保護心肌的作用，在心血管疾病的治療中具有重要意義〔3〕。本文探討丹參對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心律失常的影響。

1 材料與方法

1.1材料 實驗動物：健康、清潔級、雄性、體重210～250 g、成年Wistar大鼠45只，購自北京隆安實驗動物養(yǎng)殖中心，許可證號：SYXK(京)2014-0040。

主要試劑：注射用丹參(哈藥集團中藥二廠，生成批號：1502701)，丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(南京聚力生物醫(yī)學工程所)，白細胞介素(IL)-6試劑盒、IL-10試劑盒、腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒(艾萊薩生物科技有限公司)等。

1.2研究方法

1.2.1實驗分組 將60只大鼠隨機分為假手術組、模型組和丹參組，每組20只。

1.2.2心肌模型建立 采用25%烏來糖腹腔注射麻醉成功后，將心電圖針形電極插入大鼠四肢皮下，記錄大鼠標準肢體Ⅱ導聯心電圖。切開大鼠氣管，進行呼吸機人工呼吸，開胸暴露大鼠心臟，在大鼠左心耳下緣1 mm左右處穿過心肌淺層做一結扎線，假手術組大鼠僅穿結扎線不進行結扎；模型組和丹參組大鼠結扎左冠狀動脈前降支，結扎線以下心肌顏色變暗，心電圖S-T段升高為心肌缺血標志，心肌缺血30 min后松開結扎線，心肌相應部位顏色恢復，心電圖S-T段下降，則為心肌再灌注開始，再灌注開始后再灌注60 min。實驗過程中假手術組大鼠死亡2只，模型組大鼠死亡4只，丹參組大鼠死亡5只，存活大鼠缺血再灌注成功。

1.2.3給藥方法 建模成功后，丹參組大鼠每天給予注射用丹參(50 mg/kg)腹腔注射，假手術組和模型組大鼠給予等量生理鹽水腹腔注射，共14 d。14 d后摘除眼球采血用于血清學檢查，并同時摘取心臟備用。

1.2.4心律失常檢測 各組大鼠再灌注開始后，根據標志肢體Ⅱ導聯心電圖監(jiān)測記錄各組大鼠室性心動過速、室性纖維顫動和房室傳導阻滯的發(fā)生情況，并記錄心律失常的發(fā)生時間和持續(xù)時間。

1.2.5心肌梗死范圍和心肌缺血范圍測定 取冰凍心臟標本沿左心室長軸切成0.1 cm厚片，置于TTC溶液中孵育20 min，用甲醛溶液固定，缺血壞死心肌組織為蒼白色，缺血未壞死心肌組織為粉色，非缺血心肌組織為藍色，用解剖刀剔開不同顏色心肌組織并稱重，計算心肌梗死范圍和心肌缺血范圍，心肌梗死范圍=蒼白色心肌重量/(紅色心肌重量+蒼白色心肌重量)×100%，心肌缺血范圍=(紅色心肌組織重量+蒼白色心肌組織重量)/左心室重量×100%。

1.2.6心肌組織MDA、SOD、LDH含量測定 取部分結扎線以下左心室心肌組織，生理鹽水洗凈后吸干水分，取0.1 g心肌組織加入生理鹽水制成10%組織勻漿，置離心管中以3 000 r/min離心15 min，取上清液，采用硫代巴比妥酸法測定MDA含量，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，采用雙縮脲法測定LDH含量。

1.2.7血清IL-6、IL-10、TNF-α水平測定 將大鼠眼球血以3 000 r/min離心15 min，取上清液采用酶聯免疫法測定血清IL-6、IL-10、TNF-α水平。

1.3統計學方法 采用SPSS20.0軟件，計量資料兩組之間比較采用t檢驗，多組之間比較采用方差分析，組內兩兩比較采用LSD檢驗。

2 結 果

2.1模型組和丹參組心律失常比較 丹參組大鼠室性心動過速、心室纖顫、房室傳導阻滯的發(fā)生率均顯著低于模型組(P<0.05)，丹參組心律失常出現時間顯著長于模型組(P<0.05)，心律失常持續(xù)時間顯著短于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 各組心律失常比較

2.2模型組和丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍比較 丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍均顯著小于模型組(P<0.05)。見表2。

表2 模型組和丹參組心肌梗死范圍和心肌缺血范圍比較

2.3三組心肌組織MDA、SOD、LDH含量比較 模型組和丹參組心肌組織中MDA和LDH含量顯著高于假手術組(P<0.05)，丹參組MDA和LDH含量顯著低于模型組(P<0.05)，模型組和丹參組心肌組織中SOD含量顯著低于假手術組(P<0.05)，丹參組顯著高于模型組(P<0.05)。見表3。

2.4三組血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較 模型組和丹參組IL-6、IL-10、TNF-α水平均顯著高于假手術組(P<0.05)，丹參組IL-6、TNF-α水平均顯著低于模型組(P<0.05)，丹參組IL-10水平顯著高于模型組(P<0.05)。見表4。

表3 三組心肌組織MDA、SOD、LDH含量比較

與假手術組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05；下表同

表4 三組血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較

3 討 論

心肌缺血實質各種原因引起的冠狀動脈血流減少、心肌供氧不足、代謝產物停留過多的一種狀態(tài)，再灌注是指心肌組織缺血后恢復血液供應的過程，缺血性疾病在改善血液供應后多數可以使病情好轉，損傷結構恢復，但有時會加重病情，是受損傷組織發(fā)生不可逆損傷，即發(fā)生缺血再灌注損傷，隨著溶栓術、經皮冠狀動脈腔內成形術、冠脈搭橋術、體外循環(huán)心內直視術等治療的廣泛應用，心肌缺血再灌注損傷較為常見，心肌缺血再灌注損傷的表現主要為再灌注性心律失常、心肌頓抑、再灌注血管損傷等，嚴重影響患者的心功能〔4〕。心肌缺血再灌注損傷的機制不完全清楚，可能與氧自由基的作用和鈣超載有關，能量代謝障礙、細胞凋亡、細胞黏附分子、中性粒細胞浸潤等和心肌缺血再灌注損傷關系也比較密切〔5〕。

臨床上用于防治心肌缺血再灌注損傷的藥物有血管緊張素轉換酶抑制劑、β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑等，但這些藥物具有靶點比較單一、不良反應多的缺點。中藥的化學成分比較多，靶點多，可以安全、多途徑的治療心肌缺血再灌注損傷，且毒副作用少，具有廉價、安全、有效等優(yōu)點。丹參具有通經止痛、活血祛瘀、涼血消癰、清心除煩等作用，在抗菌消炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝、促進骨骼愈合方面具有重要作用，在呼吸系統、中樞系統、免疫系統、消化系統等疾病的治療方面具有顯著療效，在心血管系統疾病的治療方面療效更為顯著〔6,7〕。在心血管系統疾病方面，丹參具有保護紅細胞膜、改善微循環(huán)、防治心肌梗死和心肌缺血、抗動脈粥樣硬化、降低心肌耗氧量、擴張冠狀動脈、保護心肌等作用，在治療心血管疾病方面取得顯著效果〔8〕。本文結果發(fā)現：丹參可降低心肌缺血再灌注損傷大鼠室性心動過速、心室纖顫、房室傳導阻滯的發(fā)生率，延長心律失常出現時間，縮短心律失常持續(xù)時間，減少心肌梗死范圍和心肌缺血范圍。可見丹參對心肌缺血再灌注損傷后心律失常具有保護作用，可降低心律失常的發(fā)生率，減少心肌缺血和心肌梗死面積，對心肌缺血再灌注損傷后心律失常具有防治作用。

在心肌缺血再灌注損傷的過程中，由于細胞內鈣超載和大量氧自由基的產生，使SOD活性及清除氧自由基的酶降低，造成氧自由基堆積，MDA含量增加，加重心肌的損傷〔9,10〕；心肌缺血再灌注損傷過程中，氧自由基的大量產生及清除障礙，可引起膜脂質過氧化，從而改變心肌細胞膜的通透性和流動性，使心肌細胞內LDH等心肌酶大量漏出〔11,12〕。本文結果表明丹參具有降低心肌細胞膜脂質過氧化損傷，保護SOD活力，減少心肌細胞內LDH外漏，改善心肌缺血再灌注損傷預后的作用。

在心肌缺血再灌注損傷過程中，炎癥反應發(fā)揮重要作用，在灌注發(fā)生時，趨化因子激活中性粒細胞，使其釋放IL-6、TNF-α等炎癥細胞因子，IL-6主要由中性粒細胞、單核-巨噬細胞、淋巴細胞產生，TNF-α主要由單核-巨噬細胞產生，肥大細胞和心肌細胞等也可產生TNF-α，IL-6和TNF-α的產生促進內皮細胞和中性粒細胞的黏附，阻塞微血管，釋放氧自由基，從而損傷心肌細胞，引起心肌細胞死亡，炎癥因子還破壞微血管的完整性，增加其同構性，使血液黏稠，加重心肌的缺血缺氧，加重微循環(huán)障礙〔13～15〕。IL-10為抗炎因子，可以對抗免疫反應和炎癥反應，抑制炎癥因子釋放，心肌缺血再灌注損傷時，IL-10具有保護機體組織的作用，隨著再灌注時間的延長，IL-10不斷增加〔16〕，本文結果表明心肌缺血再灌注損傷時，血清炎性因子和抗炎因子水平增加，丹參對炎性因子具有抑制作用，抑制炎癥反應，并誘導抗炎因子的產生，拮抗炎癥反應，從而發(fā)揮對心肌的保護作用。