慢性乙型肝炎患者血清HBsAg定量和HBV-DNA檢測在HBV基因型與耐藥變異中的臨床探討

花艷艷 許琳婧 李夢華

（大連市第六人民醫(yī)院檢驗科，遼寧 大連 116000）

慢性乙型肝炎患者（CHB患者）通常是指患者體內(nèi)檢測出乙型肝炎病毒的存在并且病程在半年以上或者是病程不詳?shù)霈F(xiàn)慢性肝炎的患者，其常見的臨床癥狀為渾身乏力、無食欲且惡心、腹脹以及肝疼等[1-3]。近年來，隨著醫(yī)療科學與技術地迅速發(fā)展，慢性乙型肝炎抗病毒藥物的發(fā)展已經(jīng)取得了巨大的進步，其具體可以分為干擾素和核（苷）酸類似物兩大類。后者由于具有口服用藥、不良反應低以及能夠抑制病毒水平等優(yōu)點而受到廣泛的關注和臨床推廣[4]。然而，患者在長期服用核苷酸類藥物后體內(nèi)乙型肝炎病毒容易出現(xiàn)基因突變進而產(chǎn)生耐藥變異性，影響患者進一步的治療效果。由此，可見，乙型肝炎病毒耐藥變異性是乙型肝炎長期治療過程中一個臨床難題，然而當前對于乙型肝炎病毒耐藥變異性，臨床研究仍處于起步階段，需要更多的研究與臨床數(shù)據(jù)。因此，本研究從與乙型肝炎病毒相關的指標出發(fā)，探討并分析乙型肝炎患者產(chǎn)生耐藥變異性的相關性指標。

1 材料與方法

1.1 樣品標本：本研究所用的樣品標本均來自本院2017年7月1日至2017年12月31日門診和住院的79例慢性乙型肝炎患者，其年齡在8～73歲，平均45.7歲。所有的參與研究的患者血樣均為清晨空腹經(jīng)脈采血，隨后通過離心分離出血清，4 ℃下保存，隨后對相應血樣進行檢測分析。

1.2 試劑與方法：采用化學發(fā)光法檢測患者體內(nèi)血清中HBsAg含量，儀器為美國雅培公司的Architect i2000化學發(fā)光分析儀，檢測中所用到的試劑均從美國雅培公司購買；而患者血清中HBV-DNA檢測試劑，包括核酸提取試劑等由蘇州天隆科技有限公司提供，恒溫雜交儀由亞能生物科技有限公司提供；此外，乙型肝炎病毒分型及耐藥突變基因檢測流程和HBV耐藥檢測報告解讀均需嚴格按照亞能生物科技有限公司提供的說明書操作。所有參與研究的患者需要按照既定的試驗方案按時按量服用抗乙型肝炎病毒核苷酸類藥物，同時，服藥前后（6個月）分別對參與研究的患者的血樣按照上述方法進行檢測，并對比分析，研究影響患者乙型肝炎病毒耐藥變異性的因素。

表1 服藥6個月前后患者體內(nèi)血清中HBsAg含量以及HBV-DNA檢測結果對比

1.3 數(shù)理統(tǒng)計：本研究采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件對兩種檢測方法的檢測結果進行χ2檢驗。P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

為方便對比，本研究分別用數(shù)字“1”代表HBsAg，用數(shù)字“2”代表抗-HBs，用數(shù)字“3”代表HBeAg，用數(shù)字“4”代表抗-HBe以及用數(shù)字“5”代表抗-HBc，以此來研究用藥前后參與研究的乙型肝炎患者血清HBsAg含量以及HBV-DNA的檢測結果，見表1。

對比患者服用抗病毒核苷酸類藥物后，患者出現(xiàn)了明顯的耐藥變異癥狀，其中，患者體內(nèi)血清中的HBsAg含量以及HBV-DNA陽性例數(shù)均出現(xiàn)增長的情況，而基因型并未發(fā)生變化。除此之外，化學發(fā)光法具有較低的檢測限，因此可以檢測出低濃度下患者血清中HBsAg水平，這對于早期發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒具有極其重要的指示作用。

3 討 論

本研究所用的化學發(fā)光法是一種綜合化學發(fā)光與免疫反應的新型免疫標記測試方法，相比于傳統(tǒng)的ELISA法，該法可以對乙型肝炎病毒標志物進行定量分析，具有高精確性、高穩(wěn)定性、高靈敏度、高重復性且不易受環(huán)境影響等[5-6]。其基本原理為利用化學發(fā)光底物取代放射性物質(zhì)或酶底物作為抗原或者抗體標志物進行光免疫分析[7]。因此，化學發(fā)光法的高靈敏性對于研究抗乙型肝炎病毒耐藥變異性具有極其重要的作用。

慢性乙型肝病毒通常會表現(xiàn)出渾身乏力、無食欲且惡心、腹脹以及肝疼等臨床癥狀。目前，已有的抗乙型肝炎病毒藥物主要有干擾素和核苷酸兩大類，特別是核苷酸類藥物，具有服用方便（通常為口服）、不良反應小以及抑制乙型肝炎病毒效果好等優(yōu)點，因此，該類藥物在臨床上被廣發(fā)使用。然而，近年來，隨著乙型肝炎疫苗以及抗乙型肝炎病毒藥物的大量使用，乙型肝炎病毒核酸發(fā)生基因突變，形成了乙型肝炎病毒突變株，這些乙型肝炎病毒突變株容易逃脫機體內(nèi)免疫系統(tǒng)的檢測和抵御，如果采用傳統(tǒng)的低靈敏度的ELISA法，則很難對這些檢測株進行檢測，因此，這就是研究使用化學發(fā)光法檢測其突變株的原因所在。本研究所用的抗體具有受突變影響小且親和力較強的優(yōu)點，因而可以更為有效地識別出變異株，特別是一些逃脫免疫監(jiān)控的變異株，能夠被本研究所用的抗體所捕獲，因而可以大大減少突變株漏檢情況的發(fā)生。

臨床研究已經(jīng)證實，當乙型肝炎患者服用抗乙型肝炎核苷酸藥物且見效時，患者體內(nèi)血清中HBsAg含量以及HBV-DNA陽性例數(shù)均會出現(xiàn)下降趨勢，而且與患者乙型肝炎癥狀緩解情況呈一定相關性，即患者乙型肝炎癥狀越不明顯，其體內(nèi)HBsAg含量以及HBV-DNA陽性例數(shù)越低。而從表1 可以看出，對比患者服用抗病毒核苷酸類藥物后，患者出現(xiàn)了明顯的耐藥變異癥狀，即患者體內(nèi)血清中的HBsAg含量以及HBV-DNA陽性例數(shù)均出現(xiàn)增長的情況，而基因型并未發(fā)生變化。這說明慢性乙型肝炎患者體內(nèi)出現(xiàn)耐藥變異與血清中HBsAg含量以及HBV-DNA病毒載量具有一定的關聯(lián)性（P＜0.05），但與基因型無關（P＞0.05）。

4 結論與展望

綜上所述，慢性乙型肝炎患者體內(nèi)出現(xiàn)耐藥變異與血清中HBsAg含量以及HBV-DNA病毒載量具有一定的關聯(lián)性，但與基因型無關。此外，由乙型肝炎病毒耐藥株所引起的問題逐漸增多，因此，要做好預防乙型肝炎病毒耐藥變異性的發(fā)生。首先，繼續(xù)給患者服用強效的抗乙型肝炎病毒藥物，抑制乙型肝炎病毒的同時可以預防其耐藥變異性的發(fā)生；其次，因地制宜，對于不同患者使用不同的抗病毒藥物，一旦效果不佳，應立即更換抗乙型肝炎病毒藥物，甚至可以采用聯(lián)合用藥法取代傳統(tǒng)的單一用藥法，充分發(fā)揮各自抗乙型肝炎病毒的優(yōu)點，進而亦能夠預防乙型肝炎病毒耐藥變異性的發(fā)生。并基于這些臨床理論研究，進一步改進當前抗乙型肝炎病毒藥物的選擇性，研究出新型高效的抗乙型肝炎病毒靶向性藥物，即研發(fā)非作用于HBV-DNA聚合酶基因組的抗乙型肝炎病毒藥物。同時，應該立即啟動新的聯(lián)合治療方案并且加強抗乙型肝炎病毒藥物耐藥變異性的監(jiān)管，這些將大幅度地提高抗乙型肝炎病毒藥物的治療效果，也能夠減少其耐藥變異情況的發(fā)生。